HPLC测定利福平胶囊含量
作者：李平 匡佩琳 王庆全 陈新菊
单位：李平 匡佩琳 王庆全(江西省药品检验所， 南昌330046)；陈新菊(江西省药物研究所)
关键词：利福平；高效液相色谱法；胶囊
中国抗生素杂志000122 摘 要 应用HPLC法，采用RPC8柱，乙腈-甲醇-0.1mol/L KH2PO4(310∶180∶:590)为流动相，254nm检测，建立了测定利福平胶囊含量的方法，在0.79ug～7.9μg范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.9999。样品加样回收率为100.29%，RSD为0.52%，方法较中国药典方法灵敏，重现性好。
Determination of rifampicin capsules by HPLC
, 百拇医药
Li Ping， Kuang Peilin， Wang Qingquan and Chen Xingju
(Jiangxi Institute for Drug Control， Nanchang 330046)
利福平胶囊为中国药典收载的抗结核病抗生素，药典规定其含量测定用TLC-UV法[1]，该法繁锁费时，且干扰因素较多。国外已有药典采用高效液相色谱法测定其含量[2]，但流动相配制繁锁。本文采用的反相高效液相色谱法，操作简便，可将其主要杂质醌式利福平及3-甲酰基利福霉素分离，定量分析利福平，结果令人满意。
1 仪器与试剂
岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPD-10A检测器；定量20(μl)手动进样阀；C-R6A数据处理器。
, 百拇医药
利福平对照品含量99.39%(江西省药物研究所提供)；醌式利福平及3-甲酰基利福霉素(中国药品生物制品检定所)；利福平胶囊(江西赣江制药有限公司)；甲醇、乙腈均为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾为分析纯。
2 色谱条件
柱：Pre-Packed C8 (5μm，300mm×4.6mm)；流动相：乙腈-甲醇-磷酸二氢钾(0.1mol/L)(310∶180∶590)，2%的磷酸溶液调节pH至4.8；检测波长；254nm；灵敏度：0.05AUFS；流速1.2ml/min；柱温；室温。
3 实验方法及结果
在上述色谱条件下，利福平及其主要杂质的色谱图见图1。
3.1 线性关系的考察
, http://www.100md.com
精密称取利福平对照品20mg，置50ml容量瓶中，加入甲醇与0.1mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1)的稀释溶液至刻度，充分振摇，使溶解，从中分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至10ml容量瓶中用上述稀释溶液稀释至刻度，摇匀、进样(20μl)测定以不同浓度时的峰面积，对浓度进行回归计算，结果表明测定成份在0.79～7.9μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为： Y=825824X+2053 r=0.9999
图1 对照品(A)、样品(B)、杂质对照(C)
1、2：未知杂质； 3：利福平； 4：醌式利福平； 5：3-甲酰基利福霉素； 6：溶剂峰
3.2 精密度试验
准确吸取同一样品液，重复进样5次，峰面积的RSD为0.21%。
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3.3 回收率试验
准确称取已测知含量的样品5份，加入一定量的对照品，依法测定，结果5次测定的平均回收率为100.29%，RSD为0.52%。
3.4 样品测定
对照品溶液的制备 精密称取利福平对照品约20mg，置100ml容量瓶中，溶液稀释至刻度。
供试品溶液的制备 取装量项下的内容物适量，精密称定(约相当含利福平150mg)，置250ml容量瓶中，加入稀释溶液，振摇溶解，过滤，精密量取续滤液10ml，置25ml容量瓶中，稀释溶液至刻度。
杂质对照品的溶液制备 精密称取醌式利福平及3-甲酰基利福霉素各20mg，置100ml容量瓶中，稀释溶液至刻度。
测定结果 将上述对照品与供试品溶液分别注入液相色谱仪，依上述色谱条件，按外标法进行计算，结果见表1。
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3.5 稳定性实验
样品溶液及对照品溶液室温下放置2h，重新进样，结果峰面积基本不变。
表1 利福平胶囊的含量(%) 批号
HPLC法
(n=5)
TLC-UV法
(n=2)
1
96.47
97.67
2
95.34
, 百拇医药
96.85
3
99.41
102.08
4 讨论
4.1 根据药典及文献报道，利福平在236、255、334nm等波长处有最大吸收，本法选择254nm为检测波长。
4.2 根据利福平的溶解性及在缓冲液pH为6.0～7.0时溶液较稳定[3]，本法所采用的稀释液为甲醇与0.1mol/L磷酸二氢钾的混合溶液，比例为1∶1。
4.3 本法与现行中国药典方法比较，操作简便，结果准确，重现性好。样品含量测定后者稍偏高，作者认为此系薄层展开时，一些杂质斑点不能完全分离所致。同时该法也可用于其杂质控制的检测方法。
, 百拇医药
李平，女，生于1964年，学士，副主任药师。
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)，1995年版，北京：化学化工出版社，1995：300
2，United States Pharmacopeial Convention Inc. The United States Pharmacoreia ⅩⅩⅢ Taunon. Rand McNally，1995：1382
3，周景云，汪苹，李银增. pH及缓冲液对利福平水溶液稳定性的影响. 中国药学杂志，1996；31(7)：406
1998年9月23日收稿, http://www.100md.com
单位：李平 匡佩琳 王庆全(江西省药品检验所， 南昌330046)；陈新菊(江西省药物研究所)
关键词：利福平；高效液相色谱法；胶囊
中国抗生素杂志000122 摘 要 应用HPLC法，采用RPC8柱，乙腈-甲醇-0.1mol/L KH2PO4(310∶180∶:590)为流动相，254nm检测，建立了测定利福平胶囊含量的方法，在0.79ug～7.9μg范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r=0.9999。样品加样回收率为100.29%，RSD为0.52%，方法较中国药典方法灵敏，重现性好。
Determination of rifampicin capsules by HPLC
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Li Ping， Kuang Peilin， Wang Qingquan and Chen Xingju
(Jiangxi Institute for Drug Control， Nanchang 330046)
利福平胶囊为中国药典收载的抗结核病抗生素，药典规定其含量测定用TLC-UV法[1]，该法繁锁费时，且干扰因素较多。国外已有药典采用高效液相色谱法测定其含量[2]，但流动相配制繁锁。本文采用的反相高效液相色谱法，操作简便，可将其主要杂质醌式利福平及3-甲酰基利福霉素分离，定量分析利福平，结果令人满意。
1 仪器与试剂
岛津LC-10A高效液相色谱仪；SPD-10A检测器；定量20(μl)手动进样阀；C-R6A数据处理器。
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利福平对照品含量99.39%(江西省药物研究所提供)；醌式利福平及3-甲酰基利福霉素(中国药品生物制品检定所)；利福平胶囊(江西赣江制药有限公司)；甲醇、乙腈均为色谱纯；磷酸、磷酸二氢钾为分析纯。
2 色谱条件
柱：Pre-Packed C8 (5μm，300mm×4.6mm)；流动相：乙腈-甲醇-磷酸二氢钾(0.1mol/L)(310∶180∶590)，2%的磷酸溶液调节pH至4.8；检测波长；254nm；灵敏度：0.05AUFS；流速1.2ml/min；柱温；室温。
3 实验方法及结果
在上述色谱条件下，利福平及其主要杂质的色谱图见图1。
3.1 线性关系的考察
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精密称取利福平对照品20mg，置50ml容量瓶中，加入甲醇与0.1mol/L磷酸二氢钾溶液(1∶1)的稀释溶液至刻度，充分振摇，使溶解，从中分别取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml至10ml容量瓶中用上述稀释溶液稀释至刻度，摇匀、进样(20μl)测定以不同浓度时的峰面积，对浓度进行回归计算，结果表明测定成份在0.79～7.9μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为： Y=825824X+2053 r=0.9999
图1 对照品(A)、样品(B)、杂质对照(C)
1、2：未知杂质； 3：利福平； 4：醌式利福平； 5：3-甲酰基利福霉素； 6：溶剂峰
3.2 精密度试验
准确吸取同一样品液，重复进样5次，峰面积的RSD为0.21%。
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3.3 回收率试验
准确称取已测知含量的样品5份，加入一定量的对照品，依法测定，结果5次测定的平均回收率为100.29%，RSD为0.52%。
3.4 样品测定
对照品溶液的制备 精密称取利福平对照品约20mg，置100ml容量瓶中，溶液稀释至刻度。
供试品溶液的制备 取装量项下的内容物适量，精密称定(约相当含利福平150mg)，置250ml容量瓶中，加入稀释溶液，振摇溶解，过滤，精密量取续滤液10ml，置25ml容量瓶中，稀释溶液至刻度。
杂质对照品的溶液制备 精密称取醌式利福平及3-甲酰基利福霉素各20mg，置100ml容量瓶中，稀释溶液至刻度。
测定结果 将上述对照品与供试品溶液分别注入液相色谱仪，依上述色谱条件，按外标法进行计算，结果见表1。
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3.5 稳定性实验
样品溶液及对照品溶液室温下放置2h，重新进样，结果峰面积基本不变。
表1 利福平胶囊的含量(%) 批号
HPLC法
(n=5)
TLC-UV法
(n=2)
1
96.47
97.67
2
95.34
, 百拇医药
96.85
3
99.41
102.08
4 讨论
4.1 根据药典及文献报道，利福平在236、255、334nm等波长处有最大吸收，本法选择254nm为检测波长。
4.2 根据利福平的溶解性及在缓冲液pH为6.0～7.0时溶液较稳定[3]，本法所采用的稀释液为甲醇与0.1mol/L磷酸二氢钾的混合溶液，比例为1∶1。
4.3 本法与现行中国药典方法比较，操作简便，结果准确，重现性好。样品含量测定后者稍偏高，作者认为此系薄层展开时，一些杂质斑点不能完全分离所致。同时该法也可用于其杂质控制的检测方法。
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李平，女，生于1964年，学士，副主任药师。
参考文献
1，中华人民共和国卫生部药典委员会. 中华人民共和国药典(二部)，1995年版，北京：化学化工出版社，1995：300
2，United States Pharmacopeial Convention Inc. The United States Pharmacoreia ⅩⅩⅢ Taunon. Rand McNally，1995：1382
3，周景云，汪苹，李银增. pH及缓冲液对利福平水溶液稳定性的影响. 中国药学杂志，1996；31(7)：406
1998年9月23日收稿, http://www.100md.com