HPLC测定定晕宁颗粒中葛根素的含量
作者：孙 波 张永光
单位：山东烟台荣昌制药有限公司研究所
关键词：定晕宁颗粒；葛根素；HPLC；含量测定
摘要 采用HPLC法摘要 采用HPLC法，选用Symmetry-C18柱和甲醇：水(25∶75)，乙酸调pH4.2。测定定晕宁颗粒中葛根素含量。结果回归方程为Y＝1.77x-0.2813，r＝0.999(n＝5)，线性范围为0.614～6.14μg，平均回收率为99.03%，RSD为3.98%。
Determination of Puerarin Content in Dingyunning Granules by HPLC
Sunbo， Zhang Yongguang
, http://www.100md.com
(Rongchang Pharmacy institute of Yantai)
Abstract A HPLC method has been used for the determination of puerarin content in Dingyunning Granules.It has been determined on the column RP-C18 using metholnal：water(25∶75)(adjusted to pH4.2 using actetic acid).The detective ware was 250nm.The average recovery was 99.03%，RSD＝3.98%.The linear range was good in 0.614～6.14μg/ml(r＝0.9999).
Key words Dingyunning Granules Puerarin HPLC
, 百拇医药
定晕宁颗粒(简称样品)系由葛根、天麻、钩藤等10味中药经渗漉、水煎、醇沉精制而成，临床用以治疗椎动脉型颈椎病，疗效确切，给药剂量小，使用方便。方中君药葛根含葛根素，药效学研究表明，葛根素能增加脑及冠状血管血流量，并具有解痉、降血糖作用[1]。本文采用HPLC测定该制剂中葛根素的含量，为该制剂的质量控制提供了快速准确的测定方法。
1 仪器及试药
仪器 高效液相色谱仪(Waters公司)，PC800色谱工作站，600型溶剂泵，486紫外可变波长检测器，U6K型进样器，电子天平(METTLER AT261)，CQX25—06超声波振荡器(上海必能信超声有限公司)。对照品与试药 葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇为分析纯，重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱分离条件及结果Symmetry C18柱(3.9×150mm)，5μm，甲醇：水(25：75)乙酸调pH4.2为流动相，流速0.7ml/min。检测波长250nm，检测灵敏度0.06AUFS，柱压2034psi。结果分析(见图1)。
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图1 样品色谱图(a.葛根素)
图2 阴性色谱图
2.2 供试品溶液及对照品溶液制备 供试品溶液及阴性对照液：精密称取定晕宁颗粒5 g，加80%甲醇25 ml超声10 min，定容于50 ml量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。仿此法制得缺葛根的阴性对照液。对照品溶液：取100℃恒温干燥1 h的葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解成0.307 mg/ml，即得。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 ml于2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得1～5号样品。分别进样20μl，依法分离测定，以对照品量为横坐标，峰面积值为纵坐标，得标准曲线。数据经回归分析方程Y＝1.77x-0.2813，r＝0.9999(n＝5)，线性范围为0.614～6.14μg。
, 百拇医药
2.4 精密度试验 精密吸取2.2项下样品，进样6次，每次5μl，测定峰面积值。结果RSD＝1.39%(n＝6)。
2.5 稳定性试验 取同一供试液，每1 h进样5 μl，依法分离测定葛根素峰面积值，结果RSD＝0.548%(n＝6)。结果表明，葛根素在6 h内测定结果稳定。
2.6 重复性试验 取同一批号的样品，按供试液制备方法平行制备5份，每个样品进样5 μl，依法测定，按外标一点法计算含量，结果
＝1.307%，RSD＝1.72%(n＝5)。
2.7 加样回收率测定 取葛根素对照品47.5 mg，加甲醇溶解成25 ml，备用。精密称取已知含量的样品(批号 990119)适量，平行试验5份，分别精密加入对照品溶液4 ml，按供试液制备方法制备，依法测定，根据所取批号样品的平均含量，标准品加入量及测得量，计算回收率，结果(见表1)。
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表1 葛 根 素 加 样 回 收 率 试 验(n＝3)
编号
样品中葛根素量(mg)
对照品加入量(mg)
测得量(mg)
回收率(%)(%)
RSD(%)
1
9.22
, http://www.100md.com
7.6
16.52
96.05
99.03
0.398
2
11.42
7.6
19.37
104.61
3
9.71
7.6
, http://www.100md.com
17.12
97.50
4
10.49
7.6
15.62
101.58
5
8.37
7.6
18.21
95.39
2.8 含量测定 精密称取不同批号样品各5 g，按供试液制备方法制备，进样5μl，分离、测定，外标一点法计算含量，结果(见表2)。
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表2 样 品 中 葛 根 素 的 含 量 测 定
批 号(%)
RSD(%)
990114
1.465
2.72
990119
1.470
3.01
, 百拇医药 990204
1.416
2.12
3 小结
3.1 采用RP-HPLC法测定样品中葛根素的含量，方法简便，快速、准确，可作为该样品的含量控制方法。
3.2 经比较甲醇∶水不同比例流动相的分离效果，结果表明本文所列流动相具有分离效果好、出峰时间短的优点。
3.3 经比较供试品、阴性对照液、对照液及对照品叠加试验的色谱分离图，确定tR为13 min左右的色谱峰为葛根素。
3.4 本文仅为方法学考察，其含量控制标准尚待测定更多批次样品后确定。参考文献
, http://www.100md.com
1.江苏新医学院编：中药大辞典，1993；2307页
2.张小茜等：应用高效液相色谱法测定愈风宁心片及葛根中葛根素的含量 中国中药杂志 1995；20(8)：477
3.郭建平等：葛根总黄酮不同提取工艺的探讨 中草药 1995；26(10)：522
4.谭生建等：高效液相色谱法测定心安宁片中葛根的含量 中国实验方剂学杂志 1996；2(5)：2
5.谭生建等：RP-HPLC测定葛根芩连片中葛根素的含量 中国中药杂志1996；21(12)：732
6.王铁军等：高效液相色谱法同时测定根痛平冲剂中芍药甙和葛根素的含量 中国实验方剂学杂志 1997；3(2)：2, http://www.100md.com
单位：山东烟台荣昌制药有限公司研究所
关键词：定晕宁颗粒；葛根素；HPLC；含量测定
摘要 采用HPLC法摘要 采用HPLC法，选用Symmetry-C18柱和甲醇：水(25∶75)，乙酸调pH4.2。测定定晕宁颗粒中葛根素含量。结果回归方程为Y＝1.77x-0.2813，r＝0.999(n＝5)，线性范围为0.614～6.14μg，平均回收率为99.03%，RSD为3.98%。
Determination of Puerarin Content in Dingyunning Granules by HPLC
Sunbo， Zhang Yongguang
, http://www.100md.com
(Rongchang Pharmacy institute of Yantai)
Abstract A HPLC method has been used for the determination of puerarin content in Dingyunning Granules.It has been determined on the column RP-C18 using metholnal：water(25∶75)(adjusted to pH4.2 using actetic acid).The detective ware was 250nm.The average recovery was 99.03%，RSD＝3.98%.The linear range was good in 0.614～6.14μg/ml(r＝0.9999).
Key words Dingyunning Granules Puerarin HPLC
, 百拇医药
定晕宁颗粒(简称样品)系由葛根、天麻、钩藤等10味中药经渗漉、水煎、醇沉精制而成，临床用以治疗椎动脉型颈椎病，疗效确切，给药剂量小，使用方便。方中君药葛根含葛根素，药效学研究表明，葛根素能增加脑及冠状血管血流量，并具有解痉、降血糖作用[1]。本文采用HPLC测定该制剂中葛根素的含量，为该制剂的质量控制提供了快速准确的测定方法。
1 仪器及试药
仪器 高效液相色谱仪(Waters公司)，PC800色谱工作站，600型溶剂泵，486紫外可变波长检测器，U6K型进样器，电子天平(METTLER AT261)，CQX25—06超声波振荡器(上海必能信超声有限公司)。对照品与试药 葛根素对照品(中国药品生物制品检定所)，甲醇为分析纯，重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱分离条件及结果Symmetry C18柱(3.9×150mm)，5μm，甲醇：水(25：75)乙酸调pH4.2为流动相，流速0.7ml/min。检测波长250nm，检测灵敏度0.06AUFS，柱压2034psi。结果分析(见图1)。
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图1 样品色谱图(a.葛根素)
图2 阴性色谱图
2.2 供试品溶液及对照品溶液制备 供试品溶液及阴性对照液：精密称取定晕宁颗粒5 g，加80%甲醇25 ml超声10 min，定容于50 ml量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。仿此法制得缺葛根的阴性对照液。对照品溶液：取100℃恒温干燥1 h的葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇溶解成0.307 mg/ml，即得。
2.3 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5 ml于2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得1～5号样品。分别进样20μl，依法分离测定，以对照品量为横坐标，峰面积值为纵坐标，得标准曲线。数据经回归分析方程Y＝1.77x-0.2813，r＝0.9999(n＝5)，线性范围为0.614～6.14μg。
, 百拇医药
2.4 精密度试验 精密吸取2.2项下样品，进样6次，每次5μl，测定峰面积值。结果RSD＝1.39%(n＝6)。
2.5 稳定性试验 取同一供试液，每1 h进样5 μl，依法分离测定葛根素峰面积值，结果RSD＝0.548%(n＝6)。结果表明，葛根素在6 h内测定结果稳定。
2.6 重复性试验 取同一批号的样品，按供试液制备方法平行制备5份，每个样品进样5 μl，依法测定，按外标一点法计算含量，结果
＝1.307%，RSD＝1.72%(n＝5)。2.7 加样回收率测定 取葛根素对照品47.5 mg，加甲醇溶解成25 ml，备用。精密称取已知含量的样品(批号 990119)适量，平行试验5份，分别精密加入对照品溶液4 ml，按供试液制备方法制备，依法测定，根据所取批号样品的平均含量，标准品加入量及测得量，计算回收率，结果(见表1)。
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表1 葛 根 素 加 样 回 收 率 试 验(n＝3)
编号
样品中葛根素量(mg)
对照品加入量(mg)
测得量(mg)
回收率(%)
(%)RSD(%)
1
9.22
, http://www.100md.com
7.6
16.52
96.05
99.03
0.398
2
11.42
7.6
19.37
104.61
3
9.71
7.6
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17.12
97.50
4
10.49
7.6
15.62
101.58
5
8.37
7.6
18.21
95.39
2.8 含量测定 精密称取不同批号样品各5 g，按供试液制备方法制备，进样5μl，分离、测定，外标一点法计算含量，结果(见表2)。
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表2 样 品 中 葛 根 素 的 含 量 测 定
批 号
(%)RSD(%)
990114
1.465
2.72
990119
1.470
3.01
, 百拇医药 990204
1.416
2.12
3 小结
3.1 采用RP-HPLC法测定样品中葛根素的含量，方法简便，快速、准确，可作为该样品的含量控制方法。
3.2 经比较甲醇∶水不同比例流动相的分离效果，结果表明本文所列流动相具有分离效果好、出峰时间短的优点。
3.3 经比较供试品、阴性对照液、对照液及对照品叠加试验的色谱分离图，确定tR为13 min左右的色谱峰为葛根素。
3.4 本文仅为方法学考察，其含量控制标准尚待测定更多批次样品后确定。参考文献
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1.江苏新医学院编：中药大辞典，1993；2307页
2.张小茜等：应用高效液相色谱法测定愈风宁心片及葛根中葛根素的含量 中国中药杂志 1995；20(8)：477
3.郭建平等：葛根总黄酮不同提取工艺的探讨 中草药 1995；26(10)：522
4.谭生建等：高效液相色谱法测定心安宁片中葛根的含量 中国实验方剂学杂志 1996；2(5)：2
5.谭生建等：RP-HPLC测定葛根芩连片中葛根素的含量 中国中药杂志1996；21(12)：732
6.王铁军等：高效液相色谱法同时测定根痛平冲剂中芍药甙和葛根素的含量 中国实验方剂学杂志 1997；3(2)：2, http://www.100md.com