HBV宫内感染儿童接种乙型肝炎疫苗免疫失败与IL-2及其受体的关系
作者：于广军 朱启
单位：200032 上海医科大学附属儿科医院
关键词：宫内感染；肝炎病毒，乙型；IL-2；IL-2受体
中华传染病杂志980309 【摘要】 目的 从IL-2及其受体角度探讨宫内感染HBV导致乙型肝炎(乙肝)疫苗免疫失败的机制。方法 采用体外细胞培养、流式细胞仪和酶联免疫检测技术对22例HBV宫内感染儿童和15例正常儿童的外周血单个核淋巴细胞(PBMC)在非特异性刺激(PHA)和特异性刺激(HBsAg)下的膜IL-2受体表达水平和IL-2含量进行了测定。结果 在HBsAg刺激情况下，HBV宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组PBMC的IL-2膜受体表达水平低于有反应组和正常儿童组。在PHA或HBsAg刺激情况下，HBV宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组PBMC细胞培养上清的IL-2水平低于有反应组和正常儿童组。结论 IL-2分泌能力低下，以及IL-2膜受体表达不足可能是宫内感染HBV导致乙肝疫苗免疫失败的机制之一。
, http://www.100md.com
Study on the relationship between IL-2/IL-2R and immunization failure of hepatitis B vaccine in the children with HBV intrauterine infection Yu Guangjun, Zhu Qirong. Children Hospital,Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract】 Objective To study the mechanism of immunization failure of Hepatitis B vaccine by analyzing the changes of IL-2/IL-2R system in HBV intrauterine infection children. Methods Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolated from 22 intrauterine HBV infected children and 15 healthy children were incubated in the presence of PHA as well as purified HBsAg.Membrane IL-2R (mIL-2R) expression of activated cells was determined by using Flow Cytometry Analysis System (FCAS).The levels of Interleukin-2 in the supernatants of activated cells were determined by Enzyme Linked Immunoassay. Results The extent of expression of mIL-2R in PBMC stimulated by HBsAg as well as the level of IL-2 in the supernatants of PHA or HBsAg activated PBMC cultures in nonresponders of HBV intrauterine infection children was lower than that of responders and normal controls. Conclusion Low level of IL-2 production and IL-2R expression under the HBsAg stimulation may contribute to the failure of immunization in HBV infected children.
, 百拇医药
【Key words】 Intrauterine infection Hepatitis B virus IL-2 IL-2 Receptor
乙型肝炎(乙肝)疫苗用于阻断HBV母婴传播是安全有效的，但仍有10%～20%的高危产儿不能得到乙肝疫苗的保护，即免疫失败[1]。而HBV宫内感染是造成乙肝疫苗免疫失败的主要原因，对宫内HBV感染导致乙肝疫苗免疫失败机制的研究有助于探索治疗免疫失败的途径，完善乙肝免疫策略。IL-2及其受体在免疫调控网络中具有重要作用。本研究从IL-2及其受体角度探讨宫内HBV感染小儿接种乙肝疫苗免疫失败的机制。
材料与方法
一、研究对象
均来自上海医科大学附属中山医院、妇产科医院及国际和平妇婴保健院，母亲为无症状的HBsAg(+)和/或HBeAg(+)的HBV携带者所产的新生儿。凡出生时静脉血HBsAg(+)和/或HBeAg(+)，或HBV DNA阳性并持续2月以上者则列为宫内感染小儿。按生后0、1、2、7月龄接种HBIG 100μl次，乙肝疫苗30μg 3次，若一年内HBsAg持续阳性，抗-HBs(-)或抗-HBs(+)但滴度<10mIu/ml者列为宫内感染免疫失败者(无反应组)；若一年内HBsAg由阳性转为阴性，抗-HBs(+)且滴度>10Iu/ml者列为宫内感染免疫成功者(有反应组)。出生时及生后HBsAg持续阴性，接种HBIG及乙肝疫苗后抗-HBs(+)且滴度≥10mIu/ml者列为正常免疫儿童(正常儿童组)。
, 百拇医药
选择正常儿童组15例，男10例，女5例，平均年龄4.19±2.60岁；有反应组13例，男9例，女4例，平均年龄5.24±1.90岁；无反应组9例，男6例，女3例，平均年龄4.83±2.10岁。
二、试剂和器材
RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；PHA-P为Serva公司产品；HBsAg为上海生物制品研究所产品；荧光标记CD25单抗为美国Bection Dickinson公司产品；人IL-2免疫测定试剂盒为Biosource公司产品。24孔细胞培养板为美国Coster产品；流式细胞仪为美国Bection Dickinson公司产品。
三、实验方法
(一) PBMC(外周血单个核细胞)的分离 无菌采静脉血3ml，以肝素抗凝。加等倍Hank's液稀释，混匀，叠加入3ml淋巴细胞分离液表面。密度梯度离心20分钟，2 000r/min。小心吸出界面细胞，以Hank's液洗涤2次，即得到PBMC悬液。
, 百拇医药
(二) 细胞培养 用1640培养液调整PBMC浓度至2×106个/ml。取PHA 0.4ml(40μg/ml)加入24孔培养板，然后加入细胞悬液0.4ml，每一标本均作三复孔，并设1640培养液调整的细胞悬液作对照。另取一块24孔培养板，每孔先加入纯化HBsAg 0.4ml(终浓度10μg/ml)然后加入细胞悬液0.4ml，每一标本均作三复孔，并设1640培养液调整的细胞悬液作对照。将上述培养液置37℃、5% CO2培养箱，培养48小时。
(三) mIL-2R(CD25)的FACS(流式细胞仪)检测 将培养细胞悬液离心5分钟×2 000r/min，吸取上清(留测IL-2用)。加入PBS5ml，混匀，离心2 000r/min×5分钟。弃去上清，加入20μl FITC荧光标记CD25单抗。4℃下放置45分钟。加入5ml PBS，离心2 000r/min×5分钟。弃去上清，加入1ml PBS，上机检测，计算5 000个细胞中有荧光标记细胞的百分比。
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(四) IL-2的检测 按美国Biosource公司的IL-2酶联免疫测定试剂盒说明书进行操作。
四、统计分析
在Epi-info软件包中建立数据库，输入患者的一般情况(年龄、性别等)资料及实验数据，而后转入SPSS软件进行统计学处理。
结 果
一、白细胞介素-2膜受体(
单位：200032 上海医科大学附属儿科医院
关键词：宫内感染；肝炎病毒，乙型；IL-2；IL-2受体
中华传染病杂志980309 【摘要】 目的 从IL-2及其受体角度探讨宫内感染HBV导致乙型肝炎(乙肝)疫苗免疫失败的机制。方法 采用体外细胞培养、流式细胞仪和酶联免疫检测技术对22例HBV宫内感染儿童和15例正常儿童的外周血单个核淋巴细胞(PBMC)在非特异性刺激(PHA)和特异性刺激(HBsAg)下的膜IL-2受体表达水平和IL-2含量进行了测定。结果 在HBsAg刺激情况下，HBV宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组PBMC的IL-2膜受体表达水平低于有反应组和正常儿童组。在PHA或HBsAg刺激情况下，HBV宫内感染儿童接种乙肝疫苗无反应组PBMC细胞培养上清的IL-2水平低于有反应组和正常儿童组。结论 IL-2分泌能力低下，以及IL-2膜受体表达不足可能是宫内感染HBV导致乙肝疫苗免疫失败的机制之一。
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Study on the relationship between IL-2/IL-2R and immunization failure of hepatitis B vaccine in the children with HBV intrauterine infection Yu Guangjun, Zhu Qirong. Children Hospital,Shanghai Medical University, Shanghai 200032
【Abstract】 Objective To study the mechanism of immunization failure of Hepatitis B vaccine by analyzing the changes of IL-2/IL-2R system in HBV intrauterine infection children. Methods Peripheral blood mononuclear cells (PBMC) isolated from 22 intrauterine HBV infected children and 15 healthy children were incubated in the presence of PHA as well as purified HBsAg.Membrane IL-2R (mIL-2R) expression of activated cells was determined by using Flow Cytometry Analysis System (FCAS).The levels of Interleukin-2 in the supernatants of activated cells were determined by Enzyme Linked Immunoassay. Results The extent of expression of mIL-2R in PBMC stimulated by HBsAg as well as the level of IL-2 in the supernatants of PHA or HBsAg activated PBMC cultures in nonresponders of HBV intrauterine infection children was lower than that of responders and normal controls. Conclusion Low level of IL-2 production and IL-2R expression under the HBsAg stimulation may contribute to the failure of immunization in HBV infected children.
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【Key words】 Intrauterine infection Hepatitis B virus IL-2 IL-2 Receptor
乙型肝炎(乙肝)疫苗用于阻断HBV母婴传播是安全有效的，但仍有10%～20%的高危产儿不能得到乙肝疫苗的保护，即免疫失败[1]。而HBV宫内感染是造成乙肝疫苗免疫失败的主要原因，对宫内HBV感染导致乙肝疫苗免疫失败机制的研究有助于探索治疗免疫失败的途径，完善乙肝免疫策略。IL-2及其受体在免疫调控网络中具有重要作用。本研究从IL-2及其受体角度探讨宫内HBV感染小儿接种乙肝疫苗免疫失败的机制。
材料与方法
一、研究对象
均来自上海医科大学附属中山医院、妇产科医院及国际和平妇婴保健院，母亲为无症状的HBsAg(+)和/或HBeAg(+)的HBV携带者所产的新生儿。凡出生时静脉血HBsAg(+)和/或HBeAg(+)，或HBV DNA阳性并持续2月以上者则列为宫内感染小儿。按生后0、1、2、7月龄接种HBIG 100μl次，乙肝疫苗30μg 3次，若一年内HBsAg持续阳性，抗-HBs(-)或抗-HBs(+)但滴度<10mIu/ml者列为宫内感染免疫失败者(无反应组)；若一年内HBsAg由阳性转为阴性，抗-HBs(+)且滴度>10Iu/ml者列为宫内感染免疫成功者(有反应组)。出生时及生后HBsAg持续阴性，接种HBIG及乙肝疫苗后抗-HBs(+)且滴度≥10mIu/ml者列为正常免疫儿童(正常儿童组)。
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选择正常儿童组15例，男10例，女5例，平均年龄4.19±2.60岁；有反应组13例，男9例，女4例，平均年龄5.24±1.90岁；无反应组9例，男6例，女3例，平均年龄4.83±2.10岁。
二、试剂和器材
RPMI-1640为美国GIBCO公司产品；PHA-P为Serva公司产品；HBsAg为上海生物制品研究所产品；荧光标记CD25单抗为美国Bection Dickinson公司产品；人IL-2免疫测定试剂盒为Biosource公司产品。24孔细胞培养板为美国Coster产品；流式细胞仪为美国Bection Dickinson公司产品。
三、实验方法
(一) PBMC(外周血单个核细胞)的分离 无菌采静脉血3ml，以肝素抗凝。加等倍Hank's液稀释，混匀，叠加入3ml淋巴细胞分离液表面。密度梯度离心20分钟，2 000r/min。小心吸出界面细胞，以Hank's液洗涤2次，即得到PBMC悬液。
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(二) 细胞培养 用1640培养液调整PBMC浓度至2×106个/ml。取PHA 0.4ml(40μg/ml)加入24孔培养板，然后加入细胞悬液0.4ml，每一标本均作三复孔，并设1640培养液调整的细胞悬液作对照。另取一块24孔培养板，每孔先加入纯化HBsAg 0.4ml(终浓度10μg/ml)然后加入细胞悬液0.4ml，每一标本均作三复孔，并设1640培养液调整的细胞悬液作对照。将上述培养液置37℃、5% CO2培养箱，培养48小时。
(三) mIL-2R(CD25)的FACS(流式细胞仪)检测 将培养细胞悬液离心5分钟×2 000r/min，吸取上清(留测IL-2用)。加入PBS5ml，混匀，离心2 000r/min×5分钟。弃去上清，加入20μl FITC荧光标记CD25单抗。4℃下放置45分钟。加入5ml PBS，离心2 000r/min×5分钟。弃去上清，加入1ml PBS，上机检测，计算5 000个细胞中有荧光标记细胞的百分比。
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(四) IL-2的检测 按美国Biosource公司的IL-2酶联免疫测定试剂盒说明书进行操作。
四、统计分析
在Epi-info软件包中建立数据库，输入患者的一般情况(年龄、性别等)资料及实验数据，而后转入SPSS软件进行统计学处理。
结 果
一、白细胞介素-2膜受体(