豚鼠和小鼠光变态反应性触性皮炎模型的建立及比较*
作者：王晓彦 刘玲玲 朱学骏
单位：王晓彦(北京医科大学第一医院皮肤科 100034 现在内蒙古医学院附属医院 皮 肤科)；刘玲玲 朱学骏(北京医科大学第一医院皮肤科 100034)
关键词：豚鼠；小鼠；6-MC；PACD
中国现代医学杂志000101目的：比较两种动物作为光变态反应性接触性皮炎(PCAD)模型各自的优势，以择其在临床工作中发现潜在的光敏性物质。方法：以6-甲基香豆素(6-MC)为光敏剂分别制作豚鼠和小鼠UVA的PACD模型，并以外涂6-MC经UVB照射组作为对照。结果：成功的建立了两种动物外涂6-MC并经UVA照射的PACD模型。结论：两种动物PACD模型各占优势，可以根据实际情况选择所需要的模型。
分类号：R-332▲
PACD是细胞介导的对化学物质的免疫反应，从组织学及发生机制上类似变态反应性接触性皮炎(ACD)，两者区别的关键在于引起PACD的化学物质需要紫外线(UV)的活化才能诱导和激发这个反应[1]。
, http://www.100md.com
1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物来源 北京医科大学动物实验中心白色雌性豚鼠，体重250～300g,Balb/c纯系雌性小鼠20g左右。
1.1.2 光源 德国Waldmann 800K Lichttechnik紫外治疗灯，UVA最大波长为355nm，光强原始输出量为4.3mW/cm2，UVB最大波长为310～315nm。UV强度检测采用UV-米表。照光距离为20cm。测得豚鼠UVB MED70mJ/cm2，UVA MED 28J/cm2，小鼠UVB MED为30mJ/cm2。
1.1.3 试剂来源 6-MC(德国)，溶媒(丙酮：酒精1∶1)，福氏完全佐剂(FCA，Gibco公司)，环磷酰胺(CYC，上海华联药厂)。
, 百拇医药
1.2 实验方法
1.2.1 豚鼠6-MC PACD诱导及激发步骤 豚鼠颈肩部用石蜡：松香(1∶1)脱毛，步骤按Ichikawa[2]所述进行。首先进行诱导，FCA于脱毛区4个角各注射0.1ml,10% 6-MC 0.1ml涂于脱毛处，照光，UVA14J/cm2，UVB 140mJ/cm2，隔日重复1次上述步骤5次。14d后进行激发，豚鼠背中部脱毛，以背中部为界均匀划出6区，从头侧→尾侧分别涂10%，1%6-MC、溶媒，左侧三区照光，右侧三区避光，照光，UVA 28J/cm2，UVB60mJ/cm2，照光后24h，48h，72h，96h观察皮肤反应。皮肤红斑反应评价：0：无反应；1：轻度红斑，无水肿；2：中度红斑，轻微水肿；3：重度红斑，中度水肿。
1.2.2 小鼠6-MC PACD诱导及激发步骤 按Maguire[3]所述进行。诱导，腹腔内注射Cyc 200mg/Kg，以增加光敏感性，颈肩部同上法脱毛，Cyc注射后3d，脱毛区外涂20%6-MC，照光，UVA 10J/cm2，UVB45J/cm2，每天1次重复后2步共3次，最后1次致敏结束时皮内注射FCA各0.1ml。诱导后第7天激发，小鼠背中部脱毛，双耳外涂10%6-MC，照光，UVA、UVB剂量同上，24h，48h，72h，96h观察小鼠耳肿反应并用工程师卡钳尺测耳肿度(单位mm)。
, 百拇医药
2 结果
2.1 外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应
2.1.1 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应程度评价 豚鼠6-MC+UVA红斑反应为1(25/49)，2(24/49)。6-MC+UVB红斑反应以2(14/28)居多，其次为1(12/28)，3仅有2例，见表1。
表1 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应评价 组 别
个数
皮肤反应评价
0
1
2
, 百拇医药 3
6-MC+UVA
49
0
25
24
0
6-MC+UVB
28
0
12
14
2
2.1.2 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后不同时相皮肤红斑反应的变化 豚鼠6-MC+UVA激发后48h皮肤红斑反应程度最大，为1.60，并于72～96h保持不变，6-MC+UVB红斑反应24h达到最大，为2.50，48h后迅速下降。见附图。
, 百拇医药
附图 豚鼠6-MC+UVA/UVB激发后不同时相皮肤红斑反应积分
2.2 小鼠耳外涂6-MC并经UV激发后不同时相耳肿度的观察
小鼠6-MC+UVA耳肿以72～96h最明显，6-MC+UVB耳肿以24～48h最明显，见表2。
表2 小鼠耳外涂6-MC并经UV照射后不同时相耳肿度(mm)的观察 组 别
个数
不同时相耳肿度(
±s)
24h
48h
, 百拇医药 72h
96h
6-MC+UVA
70
0.29±0.01
0.33±0.02
0.46±0.05
0.46±0.06
6-MC+UVB
35
0.65±0.09
0.63±0.09
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0.46±0.08
0.42±0.05
3 讨论
香豆素是合成的化学品或天然存在于几种植物中，从20世纪初就作为一种香料广泛应用于洗涤剂、避光剂及香水中，其潜在光敏性早已有人认识[4，5]。到20世纪中叶相继有人报道香料麝香黄葵(MA)、杀菌剂四氯水杨酰胺(TCSA)具有光敏感性[6，7]，随着光敏物质的增多，如何发现及验证新的光敏物质就成为一个现实问题。因此动物PACD模型应运而生。早在1979年Kochevar[6]就成功的建立了豚鼠对MA的PCA模型，1981年Ichikawa[2]改善了该方法，诱导时使用了FCA。1982年Maguire[3]用小鼠成功的制作了对TCSA、氯丙嗪等光敏剂的PACD模型。
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本文成功的建立了这两种动物对6-MC的PACD模型，皮肤反应以红斑、肿胀为主。从时间进程上来说，豚鼠6-MC+UVA红斑肿胀程度在48～96h最强，临床评分为1居多，6-MC+UVB在24h反应最强，48h后下降，临床评分以2居多；小鼠对UV的反应与豚鼠相近，6-MC+UVA耳肿度在72～96h最大，6-MC+UVB耳肿度在24h最大。实验中采用的6-MC浓度(10%、1%)与皮肤红斑反应程度无关。从时间进程及皮肤反应评价上可以看到两种动物6-MC+UVA红斑出现晚，强度以1为主，持续时间长，6-MC+UVB红斑出现早，反应强，以2为主，持续时间短，能够说明豚鼠或小鼠6-MC+UVA炎症反应是PACD，6-MC+UVB反应是光引起的生物学效应。
6-MC据文献报导对275nm的UV吸收得最多，在320～340nm时产生第2个吸收峰值[4]。所以在6-MC+UVB炎症时皮肤反应评价较UVA强烈，可能该因素也参与其中。
从6-MC PACD模型制作及临床观察时间上看，豚鼠需要29d，小鼠需要15d。豚鼠背部面积大可以分出多个部位进行照光及取材进行动态观察，小鼠背部面积小，但通过测量及观察耳厚可以精确地了解光敏物经UV照射后的反应。而且，豚鼠皮肤厚度与人接近，易于观察，小鼠皮肤极薄，不易观察，很易脱片。所以两种动物制作PACD模型各有优缺点，需要根据实际情况有所选择。
, 百拇医药
总之，通过制作两种动物对6-MC的PACD模型，我们可以得出6-MC+UVA炎症是PACD，6-MC+UVB炎症是光引起的生物学效应。在临床工作中，当需要观察不同受试物或相同物质不同浓度的光敏性时可以选择豚鼠，于背部涂受试物后照射UVA并评价皮肤反应程度来确定受试物的光敏性，如需要短时间观察受试物的光敏性时就可选用小鼠，通过测量耳厚来了解受试物的光敏性及强弱。■
*杨森皮肤科学教育和研究基金资助课题
参考文献：
[1]Gerberick GF,Ryan CA.Investigating contact photoallergy in the mouse.Photobiology.The science and its applications.Edited by E.Riklis.New York:Plenum Press,1991:671
, http://www.100md.com
[2]Ichikawa H,Armstrong RB,Harber LC.Photoallergic contact dermatitis in guinea pigs:Improved induction technique using freunds complete adjuvant.J Invest Dermatol,1981;76:498
[3]Maguire HC,Kaidbey K.Experimental photoallergic conact dermatitis:A mouse model.J Invest Dermatol,1982;79:147
[4]Kaidbey KH,Kligman AM.Photosensitization by coumarin derivatives.Arch Dermatol,1981;117:258
[5]Jackson RT,Nesbitt LT,DeLeo VA.6-Methylcourmarin photocontact dermatitis.J Am Acad Drmatol,1980;2:124
[6]Kochever IE,Zalar GL,Einbinder J,et al.Assay of contact photosensitivity to musk ambrette in guinea pigs.J Invest Dermatol,1979;73:144
[7]Wilkinson DS.Photodermatitis due to tetrachlotosalicylanilide.Br J Dermatol,1961;73:123
1999-05-04收稿, 百拇医药
单位：王晓彦(北京医科大学第一医院皮肤科 100034 现在内蒙古医学院附属医院 皮 肤科)；刘玲玲 朱学骏(北京医科大学第一医院皮肤科 100034)
关键词：豚鼠；小鼠；6-MC；PACD
中国现代医学杂志000101目的：比较两种动物作为光变态反应性接触性皮炎(PCAD)模型各自的优势，以择其在临床工作中发现潜在的光敏性物质。方法：以6-甲基香豆素(6-MC)为光敏剂分别制作豚鼠和小鼠UVA的PACD模型，并以外涂6-MC经UVB照射组作为对照。结果：成功的建立了两种动物外涂6-MC并经UVA照射的PACD模型。结论：两种动物PACD模型各占优势，可以根据实际情况选择所需要的模型。
分类号：R-332▲
PACD是细胞介导的对化学物质的免疫反应，从组织学及发生机制上类似变态反应性接触性皮炎(ACD)，两者区别的关键在于引起PACD的化学物质需要紫外线(UV)的活化才能诱导和激发这个反应[1]。
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1 材料和方法
1.1 实验材料
1.1.1 动物来源 北京医科大学动物实验中心白色雌性豚鼠，体重250～300g,Balb/c纯系雌性小鼠20g左右。
1.1.2 光源 德国Waldmann 800K Lichttechnik紫外治疗灯，UVA最大波长为355nm，光强原始输出量为4.3mW/cm2，UVB最大波长为310～315nm。UV强度检测采用UV-米表。照光距离为20cm。测得豚鼠UVB MED70mJ/cm2，UVA MED 28J/cm2，小鼠UVB MED为30mJ/cm2。
1.1.3 试剂来源 6-MC(德国)，溶媒(丙酮：酒精1∶1)，福氏完全佐剂(FCA，Gibco公司)，环磷酰胺(CYC，上海华联药厂)。
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1.2 实验方法
1.2.1 豚鼠6-MC PACD诱导及激发步骤 豚鼠颈肩部用石蜡：松香(1∶1)脱毛，步骤按Ichikawa[2]所述进行。首先进行诱导，FCA于脱毛区4个角各注射0.1ml,10% 6-MC 0.1ml涂于脱毛处，照光，UVA14J/cm2，UVB 140mJ/cm2，隔日重复1次上述步骤5次。14d后进行激发，豚鼠背中部脱毛，以背中部为界均匀划出6区，从头侧→尾侧分别涂10%，1%6-MC、溶媒，左侧三区照光，右侧三区避光，照光，UVA 28J/cm2，UVB60mJ/cm2，照光后24h，48h，72h，96h观察皮肤反应。皮肤红斑反应评价：0：无反应；1：轻度红斑，无水肿；2：中度红斑，轻微水肿；3：重度红斑，中度水肿。
1.2.2 小鼠6-MC PACD诱导及激发步骤 按Maguire[3]所述进行。诱导，腹腔内注射Cyc 200mg/Kg，以增加光敏感性，颈肩部同上法脱毛，Cyc注射后3d，脱毛区外涂20%6-MC，照光，UVA 10J/cm2，UVB45J/cm2，每天1次重复后2步共3次，最后1次致敏结束时皮内注射FCA各0.1ml。诱导后第7天激发，小鼠背中部脱毛，双耳外涂10%6-MC，照光，UVA、UVB剂量同上，24h，48h，72h，96h观察小鼠耳肿反应并用工程师卡钳尺测耳肿度(单位mm)。
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2 结果
2.1 外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应
2.1.1 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应程度评价 豚鼠6-MC+UVA红斑反应为1(25/49)，2(24/49)。6-MC+UVB红斑反应以2(14/28)居多，其次为1(12/28)，3仅有2例，见表1。
表1 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后的皮肤反应评价 组 别
个数
皮肤反应评价
0
1
2
, 百拇医药 3
6-MC+UVA
49
0
25
24
0
6-MC+UVB
28
0
12
14
2
2.1.2 豚鼠外涂6-MC并经UV激发后不同时相皮肤红斑反应的变化 豚鼠6-MC+UVA激发后48h皮肤红斑反应程度最大，为1.60，并于72～96h保持不变，6-MC+UVB红斑反应24h达到最大，为2.50，48h后迅速下降。见附图。
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附图 豚鼠6-MC+UVA/UVB激发后不同时相皮肤红斑反应积分
2.2 小鼠耳外涂6-MC并经UV激发后不同时相耳肿度的观察
小鼠6-MC+UVA耳肿以72～96h最明显，6-MC+UVB耳肿以24～48h最明显，见表2。
表2 小鼠耳外涂6-MC并经UV照射后不同时相耳肿度(mm)的观察 组 别
个数
不同时相耳肿度(
±s)24h
48h
, 百拇医药 72h
96h
6-MC+UVA
70
0.29±0.01
0.33±0.02
0.46±0.05
0.46±0.06
6-MC+UVB
35
0.65±0.09
0.63±0.09
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0.46±0.08
0.42±0.05
3 讨论
香豆素是合成的化学品或天然存在于几种植物中，从20世纪初就作为一种香料广泛应用于洗涤剂、避光剂及香水中，其潜在光敏性早已有人认识[4，5]。到20世纪中叶相继有人报道香料麝香黄葵(MA)、杀菌剂四氯水杨酰胺(TCSA)具有光敏感性[6，7]，随着光敏物质的增多，如何发现及验证新的光敏物质就成为一个现实问题。因此动物PACD模型应运而生。早在1979年Kochevar[6]就成功的建立了豚鼠对MA的PCA模型，1981年Ichikawa[2]改善了该方法，诱导时使用了FCA。1982年Maguire[3]用小鼠成功的制作了对TCSA、氯丙嗪等光敏剂的PACD模型。
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本文成功的建立了这两种动物对6-MC的PACD模型，皮肤反应以红斑、肿胀为主。从时间进程上来说，豚鼠6-MC+UVA红斑肿胀程度在48～96h最强，临床评分为1居多，6-MC+UVB在24h反应最强，48h后下降，临床评分以2居多；小鼠对UV的反应与豚鼠相近，6-MC+UVA耳肿度在72～96h最大，6-MC+UVB耳肿度在24h最大。实验中采用的6-MC浓度(10%、1%)与皮肤红斑反应程度无关。从时间进程及皮肤反应评价上可以看到两种动物6-MC+UVA红斑出现晚，强度以1为主，持续时间长，6-MC+UVB红斑出现早，反应强，以2为主，持续时间短，能够说明豚鼠或小鼠6-MC+UVA炎症反应是PACD，6-MC+UVB反应是光引起的生物学效应。
6-MC据文献报导对275nm的UV吸收得最多，在320～340nm时产生第2个吸收峰值[4]。所以在6-MC+UVB炎症时皮肤反应评价较UVA强烈，可能该因素也参与其中。
从6-MC PACD模型制作及临床观察时间上看，豚鼠需要29d，小鼠需要15d。豚鼠背部面积大可以分出多个部位进行照光及取材进行动态观察，小鼠背部面积小，但通过测量及观察耳厚可以精确地了解光敏物经UV照射后的反应。而且，豚鼠皮肤厚度与人接近，易于观察，小鼠皮肤极薄，不易观察，很易脱片。所以两种动物制作PACD模型各有优缺点，需要根据实际情况有所选择。
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总之，通过制作两种动物对6-MC的PACD模型，我们可以得出6-MC+UVA炎症是PACD，6-MC+UVB炎症是光引起的生物学效应。在临床工作中，当需要观察不同受试物或相同物质不同浓度的光敏性时可以选择豚鼠，于背部涂受试物后照射UVA并评价皮肤反应程度来确定受试物的光敏性，如需要短时间观察受试物的光敏性时就可选用小鼠，通过测量耳厚来了解受试物的光敏性及强弱。■
*杨森皮肤科学教育和研究基金资助课题
参考文献：
[1]Gerberick GF,Ryan CA.Investigating contact photoallergy in the mouse.Photobiology.The science and its applications.Edited by E.Riklis.New York:Plenum Press,1991:671
, http://www.100md.com
[2]Ichikawa H,Armstrong RB,Harber LC.Photoallergic contact dermatitis in guinea pigs:Improved induction technique using freunds complete adjuvant.J Invest Dermatol,1981;76:498
[3]Maguire HC,Kaidbey K.Experimental photoallergic conact dermatitis:A mouse model.J Invest Dermatol,1982;79:147
[4]Kaidbey KH,Kligman AM.Photosensitization by coumarin derivatives.Arch Dermatol,1981;117:258
[5]Jackson RT,Nesbitt LT,DeLeo VA.6-Methylcourmarin photocontact dermatitis.J Am Acad Drmatol,1980;2:124
[6]Kochever IE,Zalar GL,Einbinder J,et al.Assay of contact photosensitivity to musk ambrette in guinea pigs.J Invest Dermatol,1979;73:144
[7]Wilkinson DS.Photodermatitis due to tetrachlotosalicylanilide.Br J Dermatol,1961;73:123
1999-05-04收稿, 百拇医药