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编号:10286165
变应性疾病患者血清IL-4、sCD23的研究
http://www.100md.com 《中华皮肤科杂志》 1998年第6期
     作者:张开明 李秉煦 唱文娟 尹兴平 杨小英 周敏

    单位:030009 太原市中心医院皮肤科(张开明 尹兴平 唱文娟 杨小英 周敏);温州医学院第一附属医院皮肤科(李秉煦)

    关键词:荨麻疹;湿疹;鼻炎;白细胞介素4;受体;IgE

    中华皮肤科杂志980605 【摘要】 目的 为了解几组变应性疾病患者血清IL-4和sCD23水平及IL-4对sCD23(CD23)产生的影响。方法 采用ELISA法对荨麻疹、湿疹及过敏性鼻炎患者血清、外周血单一核细胞(PBMC)及培养条件下IL-4、sCD23(CD23)水平及调控关系进行了研究。结果 13组疾病血清IL-4及sCD23水平均明显高于正常人对照组(P< 0.05~0.01),sCD23与IL-4之间具有明显的正相关关系(r=0.68~0.92,P< 0.01);2rIL-4可促进PBMC产生和表达sCD23(CD23),湿疹患者rIL-4对PBMC产生sCD23的诱导能力比正常对照组明显增强。结论 IL-4及sCD23参与了变应性疾病的发展过程,IL-4诱导PBMC产生sCD23为时间效应关系。
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    Study on Serum Levels of IL-4 and sCD23 in Patients with Allergic Diseases Zhang Kaiming, Li Binxu, Chan Wenjuan, et al. Department of Dermatology, Taiyuan Central Hospital, Taiyuan 030009

    【Abstract】 Objective To investigate the serum levels of IL-4 and sCD23 in patients with allergic diseases and the effect of IL-4 to the production of sCD23. Methods The levels of IL-4 and sCD23 in the sera and peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from patients with urticaria, eczema and rhinitis, and the level of CD23 in the cultured PBMC with and without exogenous IL-4 were measured by ELISA. Results (1) The levels of IL-4 and sCD23 were higher in patients with allergic diseases than those in controls,and there were positive correlation between IL-4 and sCD23 (r=0.68~0.92, P< 0.01); (2) rIL-4 could promote the production and expression of sCD23 (CD23) in PBMC, this effect was much more remarkable in PBMC from patients with eczema than that from controls. Conclusion The results confirm that IL-4 and sCD23 play a role in the pathogenesis of allergic diseases.
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    【Key words】 Urticaria Eczema Rhinitis Interleukin-4 Receptors, IgE

    近年的研究发现IL-4和CD23与变态反应性疾病密切相关,两者相互协调在变态反应中起着重要的作用[1,2]。为此,我们采用ELISA法及APAAP法对荨麻疹、湿疹、遗传过敏性皮炎和过敏性鼻炎患者血清、外周血单一核细胞(PBMC)及培养条件下的IL-4、sCD23(CD23)和总IgE水平及调控关系进行了研究,现将结果报道如下。

    资料与方法

    一、临床资料

    检测对象:病例为1996年8月至1997年5月皮肤科门诊和住院的患者,共149例,其中荨麻疹68例(急性荨麻疹27例,病程< 4周;慢性荨麻疹41例,病程 >4周),在慢性荨麻疹患者中,分别于缓解期(无明显风团29例)和发疹期(30例)采血;湿疹43例(原因不明的原发性湿疹, 不包括其它皮肤病湿疹化的患者);遗传过敏性皮炎14例;过敏性鼻炎24例(其中15例查出过敏物质)。所有患者于采样前1周内均未系统使用过皮质类固醇激素药物。正常人对照组72例,为门诊体检筛选的正常人、无变应性疾患的献血员及本科健康工作者。
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    二、方法

    试剂:sCD23(相对分子质量25000)及IL4检测试剂盒为比利时Medgenix公司产品;总IgE试剂盒购自中国医学科学院基础医学研究所;重组白介素(rIL)-4为Sigma产品;鼠抗人CD23单克隆抗体及APAAP试剂盒购自邦定生物试剂公司。

    标本采集:受试者均抽静脉血3ml,分离血清,-40℃备用待测,待样本累积够既定例数后。一次同步测定所有观察指标。

    1.血清sCD23测定:采用双抗体夹心ELISA法,主要步骤为:首先于已包被好的96孔酶板中每孔加入100μl稀释液,继而再分别加入100μl标准品(0~25ng/ml)或待测血清及空白对照(生理盐水),均设复孔,然后每孔加入50μl辣根过氧化物酶标记的单抗,室温(20℃)振荡(700r/min)孵育2小时,弃去孔内液体,每孔加入洗涤液400μl,重复3次,最后每孔加入200μl显色液,20℃振荡孵育30分钟,之后每孔加入50μl 1.8N H2SO4终止反应,置芬兰Labsystems全自动酶标仪450nm及650nm(双波长法)处测吸光度(A值),用标准品浓度及对应A值绘制标准曲线,然后从中求得血清中sCD23含量(单位:ng/ml)。
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    2.血清IL4测定:采用多抗夹心ELISA法[3]。

    3.血清总IgE测定:采用ELISA法。

    4.PBMC CD23免疫组化:患者及正常人对照各做了23例,采用APAAP法[4],最后统计每100个有核细胞CD23阳性细胞数(PBMC,CD23+%)。

    5.rIL-4诱导PBMC CD23表达研究:患者及正常人对照各14例,抽静脉血常规分离PBMC,用RPMI1640完全培养液调整PBMC浓度为2×106个/ml,然后吸入Nunc细胞培养板中,每孔300μl(均为复孔、rIL4浓度为100U/ml),置饱和湿度5% CO2 37℃培养箱培养,分别于48小时和72小时取细胞悬液150μl于微型离心管中离心沉淀细胞,取细胞测CD23+%,方法同“4”,上清液测sCD23含量,方法同血清测定。

    统计学处理:采用SPSS软件包进行t检验(血清sCD23及IL-4为两样本均数t检验,PBMC免疫组化及rIL-4诱导结果为配对t检验)及相关分析。
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    结 果

    一、血清sCD23、IL-4及PBMC CD23表达结果

    149例患者血清sCD23、IL-4与正常人对照组比较明显增高,见表1。慢性荨麻疹发疹期的sCD23、IL-4水平(2.30±0.87ng/ml;96.3±41.5pg/ml)与缓解期(1.62±0.48ng/ml;69.2±31.7pg/ml)比较,t值分别为2.67和2.42,P分别< 0.01和< 0.02,与急性荨麻疹(1.68±0.53ng/ml;71.8±32.6pg/ml)比较,t值分别为2.40和2.41,P均< 0.02,而慢性荨麻疹缓解期的sCD23和IL-4水平与急性荨麻疹比较无显著性差异(P >0.05)。23例湿疹患者PBMC免疫组化结果显示,湿疹患者CD23表达程度(9.3±5.2)明显高于正常人对照组(4.6±2.5),t=3.14,P< 0.01。荨麻疹组血清总IgE水平为610.4±348.6IU/ml,正常人对照组(31例)为249.7±130.6IU/ml,两组比较亦有显著性差异(P< 0.01)。
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    表1 149例变应性疾病患者血清sCD23、IL-4水平测定结果() 组别

    例数

    sCD23(ng/ml)

    IL-4(pg/ml)

    变应性疾病

    149

    1.98±0.80*

    75.2±37.4**

    荨麻疹组

    68
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    1.87±0.74*

    78.5±36.1**

    湿疹组

    43

    2.18±1.05**

    66.4±38.5**

    遗传过敏性皮炎

    14

    2.39±1.17**

    97.4±36.5**
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    过敏性鼻炎

    24

    1.93±0.65*

    72.3±34.7**

    正常人对照组

    72

    1.44±0.53

    38.7±17.1

    与正常人对照组比较 * P<0.05 ** P<0.01

    二、相关分析结果

    149例患者血清sCD23及IL-4相关分析结果,r=0.86,P< 0.01;23例湿疹患者PBMC CD23表达程度与血清sCD23比较,r=0.49,P< 0.02。
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    三、rIL-4诱导培养PBMC CD23表达结果

    湿疹组的14例患者及对照组PBMC培养48小时和72小时上清液sCD23水平及CD23表达程度与自然培养的同一时间比较,其含量和表达程度明显增高和增强(P< 0.02~0.01),详见表2、3。

    表2 rIL-4诱导外周血单一核细胞培养上清液sCD23水平(,ng/ml) 组别

    例数

    自然培养

    rIL-4诱导

    48h

    72h
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    t值*

    P值

    48h

    72h

    t值*

    P值

    湿疹组

    14

    2.4±1.6

    2.2±1.7

    1.9

    >0.05

    5.4±3.6
, 百拇医药
    8.3±5.2

    3.2

    <0.01

    对照组

    14

    2.6±1.2

    2.3±1.6

    2.0

    >0.05

    4.1±2.7

    5.6±2.4

    2.6

    <0.02
, 百拇医药
    t值**

    -

    1.8

    1.7

    -

    -

    2.4

    2.8

    -

    -

    P值

    -

    >0.05
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    >0.05

    -

    -

    <0.05

    <0.01

    -

    -

    * 培养48h与72h比较,** 两组间比较

    表3 rIL-4诱导外周血单一核细胞培养每100个细胞CD23阳性细胞数() 组别

    例数
, 百拇医药
    自然培养

    rIL-4诱导

    48h

    72h

    t值*

    P值

    48h

    72h

    t值*

    P值

    湿疹组

    14

    3.5±2.4
, 百拇医药
    3.7±2.3

    1.8

    >0.05

    7.4±3.9

    8.1±5.3

    1.9

    >0.05

    对照组

    14

    3.2±1.9

    3.5±2.8

    1.9

    >0.05
, 百拇医药
    5.6±2.1

    5.9±3.2

    1.7

    >0.01

    t值**

    -

    2.0

    1.9

    -

    -

    2.3

    2.4

    -
, 百拇医药
    -

    P值

    -

    >0.05

    >0.05

    -

    -

    <0.05

    <0.05

    -

    -

    * 培养48h与72h比较,** 两组间比较

, http://www.100md.com     讨 论

    CD23是IgE低亲和力受体,经水解酶分解形成多种大、小不等的sCD23,IL-4可促进B细胞表达CD23,所以研究IL-4同sCD23(CD23)之间的关系,对于了解变态反应过程中多个细胞因子网络的相互调节作用具有重要的意义。血清测定结果显示,所有检测组患者血清sCD23及IL-4均增高,两者之间呈高度的正相关关系,表明IL-4及sCD23在变应性疾病发病中具有一定的作用。APAAP结果显示,PBMC表达CD23与血清sCD23之间呈低度正相关关系,可能与PBMC所处的成熟(活化)期不同以及CD23表达时间较短有关。

    荨麻疹不同发病期测定结果显示,慢性荨麻疹发疹期血清中sCD23、IL-4水平高于缓解期和急性荨麻疹,而缓解期慢性荨麻疹与急性荨麻疹比较无显著性差异。IL-4主要是由Th2细胞产生[1],既往我们研究显示,慢性荨麻疹患者T细胞功能有异常[4],因此,Th2、IL4、sCD23(CD23)及IgE的异常可能是慢性荨麻疹发病机理的重要途径。
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    自然培养结果显示,PBMC自然培养48h和72h湿疹组与对照组培养上清液sCD23及CD23+%比较均无显著性差异;患者组和对照组PBMC培养上清液sCD23以及CD23+%48h和72h比较亦无显著性差异,提示湿疹患者PBMC在无诱导因素作用下,PBMC本身产生sCD23以及CD23表达能力无明显异常。

    RIL-4诱导培养结果显示:1患者组和对照组的48h和72h培养上清液sCD23水平和CD23+%与自然培养的同一时间比较无明显增高、增强,表明IL-4可促进(患者及正常人)PBMC产生CD23及sCD23,而湿疹患者PBMC对IL-4诱导感应度又明显高于正常人,结合血清IL-4与sCD23相关分析结果,提示湿疹、荨麻疹、遗传过敏性皮炎及过敏性鼻炎患者血清中较高水平的IL-4可能是sCD23(CD23)增高的原因之一。2sCD23水平与rIL-4诱导PBMC的培养时间在一定范围内呈时间效应关系,而CD23+%与rIL-4诱导PBMC的培养时间无明显联系,提示CD23在PBMC的表达时间很短,PBMC膜表达CD23后,迅即分解为sCD23;所以,当PBMC培养至72h时与48h比较CD23+%无明显区别,而培养上清液中的sCD23水平却明显增高。
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    参考文献

    1 Robinson DS, Hamid Q,Ying S, et al.Predomin ant TH2-like bronchoalveolar T-lymphocyte population in atopic asthma. N Engl J Med,1992,326∶298-230.

    2 韩连书. CD23与相关疾病的研究进展. 国外医学免疫学分册,1996,19∶250-253.

    3 尹国华, 李慧仙, 张开明. 荨麻疹患者血清可溶性细胞间粘附分子1及白介素4含量的测定. 中华皮肤科杂志, 1997,30∶402.

    4 张开明, 董峰, 李佩珍, 等. 荨麻疹患者白介素2、白介素2受体及T细胞亚群改变. 中华皮肤科杂志, 1994,27∶358-359.

    (收稿:1997-09-23 修回:1998-01-19), http://www.100md.com