新型隐球菌临床与环境分离株对抗真菌药物敏感性的比较及血清分型
作者:苏逸丹 汪师贞 翁心华 张强强 李莉
单位:苏逸丹(乌鲁木齐,新疆医科大学第二附属医院传染病教研室 830028);汪师贞(新疆医科大学第二附属医院内科);翁心华(上海医科大学华山医院);张强强(上海医科大学华山医院);李莉(上海医科大学华山医院)
关键词:
中华医学杂志000618 新型隐球菌根据其生物学特性和荚膜多糖抗原成份分为2个变种5种血清型:新生变种(血 清型A、D和AD)和格特变种(血清型B、C)[1],不同变种及血清型在导致感染方面有一定的地域性分布。我们对从上海地区鸽粪中分离得到的17株新型隐球菌环境株和1995~1998年上海医科大学附属华山医院皮肤科真菌室分离鉴定的35株来自患者脑脊液标本的新型隐球菌 临床株进行了血清分型,并测定了对各种抗真菌药物的敏感性。
一、材料与方法
, http://www.100md.com
1.主要试剂和培养基:隐球菌因子血清分型试剂盒(日本,Crypto Check Itron Lab公司)、RPMI-1640液体培养基、改良沙氏琼脂培养基及咖啡酸琼脂培养基。
2.菌株来源与鉴定:新型隐球菌标准血清型A、B、C、D型菌株由第二军医大学长征医院皮肤科惠赠。35株新型隐球菌临床株均分离自临床脑脊液标本,于上海医科大学附属华山医院皮肤科真菌室收集所得,其中1995~1996年部分保存菌种11 株,1997年部分保存菌种6株,1998年收集菌种18株。17株新型隐球菌环境株分离自1997年秋从上海地区广场鸽鸽棚和私人寓所鸽棚中收集的鸽粪。
所有菌株根据印度墨汁染色、37℃沙氏培养基培养、碳源同化(API20系统 ) 咖啡酸鉴别培养基培养及尿素酶试验鉴定到种的水平。
3.血清分型:应用隐球菌特异性荚膜多糖单克隆抗体(因子血清分型试剂盒 )进行血清分型。
, 百拇医药
4.抗真菌药物与药敏试验:参照NCCLS M27-A微量稀释法测定氟康唑(FCZ)、二性霉素B(AmB)、氟胞嘧啶(5-FC)、伊曲康唑(Itra)和酮康唑(KCZ)对实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)[2]。
二、结果
1.对各种抗真菌药物的敏感性(MIC测定):对35株分离自脑脊液和17株分离自鸽粪的新型隐球菌进行了FCZ、AmB、5-FC、Itra和KCZ的敏感性测定,结果见表1。临床株与环境株对5种药物的敏感性 无明显差异。1995~1998年临床株对各种药物的敏感性基本相似。4株标准菌株作为质控菌株在每次药敏测定中各药物的 MIC值均在公布范围内,基本稳定。
2.血清分型:对新型隐球菌35株临床分离株和17株环境分离株的血清分型结果见表2。临床株以A型为主,占89%(31/35),分离出4株血清B型,占11%(4/35)。环境株均为血清A型,未发现血清B、C、D及AD型。
, 百拇医药
表1 新型隐球菌临床及环境分离株对五种抗真菌药物的体外敏感性 来源
菌株数
氟康唑
二性霉素B
5-氟胞嘧啶
伊曲康唑
酮康唑
范围
MIC
范围
MIC
范围
, 百拇医药 MIC
范围
MIC
范围
MIC
脑脊液
1995~1997年
11
4- 6
8
0.25 -1
0.5
0.5 - 8
, 百拇医药
2
0.5 -1
0.5
0.25 -1
0.5
1997年
6
16-32
16
0.125-1
0.25
0.25-64
4
, 百拇医药
0.5 -1
0.5
0.5 -1
0.5
1998年
18
2-64
16
0.03 -1
0.5
0.25-16
2
0.25-1
, 百拇医药
0.5
0.125-1
0.5
鸽粪
17
4-16
8
0.03 -1
0.25
1 - 4
2
0.25-1
0.25
, 百拇医药
0.5 -1
0.5
质控菌株
4
2- 8
4
0.125-0.5
0.25
0.5 - 4
2
0.25-0.5
0.25
0.125-0.5
, http://www.100md.com
0.25
表2 新型隐球菌临床及环境分离株血清学分型结果 来源
菌株数
血 清 型
A型
B型
C型
D型
AD型
脑脊液
1995-1996年
11
10
, http://www.100md.com
1
0
0
0
1997年
6
6
0
0
0
0
1998年
18
15
, 百拇医药
3
0
0
0
鸽粪
17
17
0
0
0
0
三、讨论
国内有关新型隐球菌临床及环境分离株对各种抗真菌药物的敏感性研究报告尚不多,本研究结果显示,35株新型隐球菌临床分离株与17株环境分离株对FCZ、Am B、 5-FC、Itra和KCZ的敏感性无明显差异,提示菌株来源不影响其对抗真菌药 物的敏感性。从1995~1998年临床株对5种抗真菌药物的MICS分析看,FCZ的MICS有上升趋势,而AmB、5-FC、Itra和KCZ的MICS则无明显变化,这是否与近年来 FCZ的普遍应用甚至滥用有关需进一步调查。在隐球菌病的病原治疗中AmB 联合5-FC一直被作为首选治疗方案,而FCZ由于其安全、方便、脑脊液中浓度高等 特点在临床抗真菌治疗中的应用越来越普遍,特别是在患隐球菌脑膜炎的AIDS患者中,更需以FCZ作为长期抑菌治疗。已有因普遍长期应用FCZ而致隐球菌对其 敏感性降低甚至耐药的报道[3,4]。因此,对于接受抗真菌治疗的患者,特别是深部真菌感染者如遇临床治疗反应差或复发时 ,有必要进行MIC测定,以指导临床用药。
, 百拇医药
我们对35株新型隐球菌临床分离株的血清分型结果显示:A型占89%(31/35),B型占11%(4/35),与国内学者的研究结果相似,我国新型隐球菌血清 型分布以A型为主,D型少见,有少量的AD型,缺乏C型[5]。我们所分离出的4例 血清B型患者均来自农村地区无免疫缺陷或 免疫抑制等基础疾病,但我们从鸽粪 中分离所得的17株新型隐球菌血清分型 全部是A型,因此,对于引起临床感染的血 清B型的可能来源尚需进一步调查。
参考文献
1,Mitchell TG, Perfect JR. Cryptococcosis in the era of AIDS-100 years after the discovery of Cryptococcus neoformans. Clin Microbiol Rev,1995,8:515-548.
2,National Committee for Clinical Laboratory Standards. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts; approved standard. Wayne, Pennsylvania: NCCLS, 1997.
, 百拇医药
3,Davey KG, Johnson EM, Holmes AD, et al. In-vitro susceptibility of Cryptococcus neoformans isolates to fluconazole and itraconazole. J Antimicrob Chemother, 1998,42:217-220.
4,Venkateswarlu K, Talor M. Fluconazole tolerance in clinical isolates of cryptococcus neoformans. Antimicrob Agents Chemother,1997,41:748-751.
5,吴绍熙,郭宁如,刘维达,等.新生隐球菌的生态学、流行病学、分子生物学及临床研究.真菌学报,1996,15:114-120.
(收稿日期:1999-08-24), http://www.100md.com
单位:苏逸丹(乌鲁木齐,新疆医科大学第二附属医院传染病教研室 830028);汪师贞(新疆医科大学第二附属医院内科);翁心华(上海医科大学华山医院);张强强(上海医科大学华山医院);李莉(上海医科大学华山医院)
关键词:
中华医学杂志000618 新型隐球菌根据其生物学特性和荚膜多糖抗原成份分为2个变种5种血清型:新生变种(血 清型A、D和AD)和格特变种(血清型B、C)[1],不同变种及血清型在导致感染方面有一定的地域性分布。我们对从上海地区鸽粪中分离得到的17株新型隐球菌环境株和1995~1998年上海医科大学附属华山医院皮肤科真菌室分离鉴定的35株来自患者脑脊液标本的新型隐球菌 临床株进行了血清分型,并测定了对各种抗真菌药物的敏感性。
一、材料与方法
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1.主要试剂和培养基:隐球菌因子血清分型试剂盒(日本,Crypto Check Itron Lab公司)、RPMI-1640液体培养基、改良沙氏琼脂培养基及咖啡酸琼脂培养基。
2.菌株来源与鉴定:新型隐球菌标准血清型A、B、C、D型菌株由第二军医大学长征医院皮肤科惠赠。35株新型隐球菌临床株均分离自临床脑脊液标本,于上海医科大学附属华山医院皮肤科真菌室收集所得,其中1995~1996年部分保存菌种11 株,1997年部分保存菌种6株,1998年收集菌种18株。17株新型隐球菌环境株分离自1997年秋从上海地区广场鸽鸽棚和私人寓所鸽棚中收集的鸽粪。
所有菌株根据印度墨汁染色、37℃沙氏培养基培养、碳源同化(API20系统 ) 咖啡酸鉴别培养基培养及尿素酶试验鉴定到种的水平。
3.血清分型:应用隐球菌特异性荚膜多糖单克隆抗体(因子血清分型试剂盒 )进行血清分型。
, 百拇医药
4.抗真菌药物与药敏试验:参照NCCLS M27-A微量稀释法测定氟康唑(FCZ)、二性霉素B(AmB)、氟胞嘧啶(5-FC)、伊曲康唑(Itra)和酮康唑(KCZ)对实验菌株的最低抑菌浓度(MIC)[2]。
二、结果
1.对各种抗真菌药物的敏感性(MIC测定):对35株分离自脑脊液和17株分离自鸽粪的新型隐球菌进行了FCZ、AmB、5-FC、Itra和KCZ的敏感性测定,结果见表1。临床株与环境株对5种药物的敏感性 无明显差异。1995~1998年临床株对各种药物的敏感性基本相似。4株标准菌株作为质控菌株在每次药敏测定中各药物的 MIC值均在公布范围内,基本稳定。
2.血清分型:对新型隐球菌35株临床分离株和17株环境分离株的血清分型结果见表2。临床株以A型为主,占89%(31/35),分离出4株血清B型,占11%(4/35)。环境株均为血清A型,未发现血清B、C、D及AD型。
, 百拇医药
表1 新型隐球菌临床及环境分离株对五种抗真菌药物的体外敏感性 来源
菌株数
氟康唑
二性霉素B
5-氟胞嘧啶
伊曲康唑
酮康唑
范围
MIC
范围
MIC
范围
, 百拇医药 MIC
范围
MIC
范围
MIC
脑脊液
1995~1997年
11
4- 6
8
0.25 -1
0.5
0.5 - 8
, 百拇医药
2
0.5 -1
0.5
0.25 -1
0.5
1997年
6
16-32
16
0.125-1
0.25
0.25-64
4
, 百拇医药
0.5 -1
0.5
0.5 -1
0.5
1998年
18
2-64
16
0.03 -1
0.5
0.25-16
2
0.25-1
, 百拇医药
0.5
0.125-1
0.5
鸽粪
17
4-16
8
0.03 -1
0.25
1 - 4
2
0.25-1
0.25
, 百拇医药
0.5 -1
0.5
质控菌株
4
2- 8
4
0.125-0.5
0.25
0.5 - 4
2
0.25-0.5
0.25
0.125-0.5
, http://www.100md.com
0.25
表2 新型隐球菌临床及环境分离株血清学分型结果 来源
菌株数
血 清 型
A型
B型
C型
D型
AD型
脑脊液
1995-1996年
11
10
, http://www.100md.com
1
0
0
0
1997年
6
6
0
0
0
0
1998年
18
15
, 百拇医药
3
0
0
0
鸽粪
17
17
0
0
0
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三、讨论
国内有关新型隐球菌临床及环境分离株对各种抗真菌药物的敏感性研究报告尚不多,本研究结果显示,35株新型隐球菌临床分离株与17株环境分离株对FCZ、Am B、 5-FC、Itra和KCZ的敏感性无明显差异,提示菌株来源不影响其对抗真菌药 物的敏感性。从1995~1998年临床株对5种抗真菌药物的MICS分析看,FCZ的MICS有上升趋势,而AmB、5-FC、Itra和KCZ的MICS则无明显变化,这是否与近年来 FCZ的普遍应用甚至滥用有关需进一步调查。在隐球菌病的病原治疗中AmB 联合5-FC一直被作为首选治疗方案,而FCZ由于其安全、方便、脑脊液中浓度高等 特点在临床抗真菌治疗中的应用越来越普遍,特别是在患隐球菌脑膜炎的AIDS患者中,更需以FCZ作为长期抑菌治疗。已有因普遍长期应用FCZ而致隐球菌对其 敏感性降低甚至耐药的报道[3,4]。因此,对于接受抗真菌治疗的患者,特别是深部真菌感染者如遇临床治疗反应差或复发时 ,有必要进行MIC测定,以指导临床用药。
, 百拇医药
我们对35株新型隐球菌临床分离株的血清分型结果显示:A型占89%(31/35),B型占11%(4/35),与国内学者的研究结果相似,我国新型隐球菌血清 型分布以A型为主,D型少见,有少量的AD型,缺乏C型[5]。我们所分离出的4例 血清B型患者均来自农村地区无免疫缺陷或 免疫抑制等基础疾病,但我们从鸽粪 中分离所得的17株新型隐球菌血清分型 全部是A型,因此,对于引起临床感染的血 清B型的可能来源尚需进一步调查。
参考文献
1,Mitchell TG, Perfect JR. Cryptococcosis in the era of AIDS-100 years after the discovery of Cryptococcus neoformans. Clin Microbiol Rev,1995,8:515-548.
2,National Committee for Clinical Laboratory Standards. Reference method for broth dilution antifungal susceptibility testing of yeasts; approved standard. Wayne, Pennsylvania: NCCLS, 1997.
, 百拇医药
3,Davey KG, Johnson EM, Holmes AD, et al. In-vitro susceptibility of Cryptococcus neoformans isolates to fluconazole and itraconazole. J Antimicrob Chemother, 1998,42:217-220.
4,Venkateswarlu K, Talor M. Fluconazole tolerance in clinical isolates of cryptococcus neoformans. Antimicrob Agents Chemother,1997,41:748-751.
5,吴绍熙,郭宁如,刘维达,等.新生隐球菌的生态学、流行病学、分子生物学及临床研究.真菌学报,1996,15:114-120.
(收稿日期:1999-08-24), http://www.100md.com