成釉细胞瘤和角化囊肿细胞生长特点的研究
作者：赵宁侠 于世凤 王卫华 庞淑珍
单位：赵宁侠 于世凤 王卫华 庞淑珍(100081 北京医科大学口腔医学院)
关键词：上皮细胞；组织培养；成釉细胞瘤；角化囊肿
中华口腔医学杂志990109 【摘要】 目的 观察、比较成釉细胞瘤和角化囊肿细胞的生长特点，探讨角化囊肿复发的原因。方法 原代体外培养成釉细胞瘤细胞、牙源性角化囊肿、根端囊肿及口腔粘膜的上皮细胞和成纤维细胞，倒置光相差显微镜观察。结果 成釉细胞瘤上皮细胞生长较快，细胞生长晕周围不规则，大细胞生长晕周围有许多卫星样小生长晕，成纤维细胞呈网格状。角化囊肿与其他囊肿和正常粘膜的上皮细胞相同，生长缓慢，细胞生长晕周围规则，由呈漩涡状生长的成纤维细胞围绕。结论 成釉细胞瘤细胞生长活跃，而角化囊肿细胞的生长特点与其他囊肿和粘膜相似，提示成釉细胞瘤细胞的浸润性生长特点，推测角化囊肿复发的主要因素不是因为其具有肿瘤的生长特点。
, http://www.100md.com
Growth behavior of cells of ameloblastoma and odontogenic keratocyst
ZHAO Ningxia，YU Shifeng，WANG Weihua，et al.
School of Stomatology,Beijing Medical University, Beijing 100081
【Abstract】 Objective To compare the growth behavior of epithelium and fibroblast from ameloblastoma and keratocyst and to discuss the recurrence reason for the keratocyst.Methods Epithelial cells and fibroblast from ameloblastoma, keratocyst, dentigerous cyst, radicular cyst and oral mucosa were cultured and observed by phase-contrast microscope. Results The epithelial cells of ameloblastoma grew faster, with an irregular area around the cell mass and some small satellite-shaped cell mass. The epithelial cells of all the cysts and mucosa grew slower with the cell masses surrounded by fibroblasts which grew in whirl manner with a round and smooth periphery. Conclusion The cells from the ameloblastoma grow faster and more active,and those from the keratocysts grow like the other cysts and the normal mucosa. It is speculated that the ameloblastoma grows in an aggressive manner and it is possible that the recurrence of the keratocyst isn't primarily resulted from its growth behavior as a tumor.
, 百拇医药
【Key words】 Epithelial cells Tissue culture Ameloblastoma Keratocyst epithelium
成釉细胞瘤是比较常见的牙源性肿瘤，虽然生长缓慢，属良性肿瘤，但易呈局部浸润性生长，手术不彻底常易复发。牙源性角化囊肿也具有较大的复发倾向，关于其原因却意见不一。上皮细胞原代培养的方法，国外早在六七十年代即已开展，目前成釉细胞瘤细胞的传代培养，随着各种材料的出现也日趋成熟，但国内这方面的研究仍然是需要填补的空白。我们通过原代培养的方法，观察、比较牙源性角化囊肿和成釉细胞瘤细胞不同的生长特点，并对角化囊肿复发的原因进行探讨。
材料与方法
1.材料 ：根端囊肿3例，含牙囊肿2例，口腔粘膜2例，牙源性角化囊肿2例，成釉细胞瘤3例。
2.方法：
, http://www.100md.com
(1)取材， D-Hanks液(含青霉素、链霉素各1×106U/L)中浸泡3次，每次20 min。
(2)将组织块分切成1mm×1mm×1mm大小，种于培养皿上，置37℃培养箱3～4小时。
(3)沿培养皿壁缓慢加入DMEM培养液(含胎牛血清10%，青霉素、链霉素各1×105U/L)。
(4)置37℃、5%CO2孵箱内，更换DMEM培养液2次/周，Olympus倒置光相差显微镜观察。
结果
1.一般生长特点：①各囊肿及颊粘膜的组织块周围，2天左右首先有梭形的成纤维细胞呈散射样爬出。含牙囊肿、角化囊肿和颊粘膜分别在2～3天、3～4天和7～8天左右，上皮细胞从组织块中爬出，围绕组织块周围，形成膜状的铺路石样结构，最外层由先爬出的成纤维细胞包绕。随后1周内，上皮细胞生长较快，之后成纤维细胞增多，上皮细胞出现复层，生长速度减慢。根端囊肿无上皮细胞爬出。 ②成釉细胞瘤在种植后16小时，培养液内即可有大量的细胞悬浮，24小时左右成釉细胞瘤上皮细胞贴壁生长，有的围绕组织块周围，有的散在于组织块间，形成结构松散的鳞状细胞团。以后2周内生长较快，成纤维细胞较少，第3周成纤维细胞增多，瘤细胞生长减慢(表1)。
, 百拇医药
表1 成釉细胞瘤、各囊肿及颊粘膜的生长特点 项目
上皮细胞
出现时间
上皮生长
迅速期
成纤维细胞
生长迅速期
成釉细胞瘤
24小时
贴壁后2周
第3周
角化囊肿
, http://www.100md.com 3～4天
贴壁后1周
第2天
含牙囊肿
2～3天
贴壁后1周
第2天
根端囊肿
无
无
第4～5天
颊粘膜
7～8天
, 百拇医药
贴壁后1周
第2天
2. 上皮细胞的结构特点： 成釉细胞瘤的上皮细胞大而松散，呈膜状生长的细胞生长晕周边不规则，有一些突起伸出。不同的细胞生长晕之间，有些细胞浆延展而互相连接，呈手拉手样；有些细胞生长晕周围出现小卫星样生长晕，并且逐渐增大。牙源性角化囊肿和含牙囊肿的上皮细胞大而紧密，而颊粘膜的上皮细胞小，其细胞生长晕周围由成纤维细胞围绕，均十分规则(图1、2)。
图1 成釉细胞瘤上皮细胞生长晕周围有卫星样小生长晕。倒置光相差显微镜(×300)
图2 角化囊肿上皮细胞生长晕周围规则，由纤维细胞围绕。倒置光相差显微镜(×300)
, 百拇医药
3. 成纤维细胞的生长特点：成釉细胞瘤的成纤维细胞出现较迟，且生长缓慢，呈网格状。角化囊肿和含牙囊肿的成纤维细胞出现较早，生长快而多，颊粘膜居中，这几种成纤维细胞均呈漩涡状。
讨论
本研究采用原代培养，方法简捷明了，而且与体内细胞性状更接近。1979年Yang等[1]将成釉细胞瘤组织块置于胶原凝胶中进行三维培养观察，结果发现在凝胶中长出许多与组织块结构相似的瘤样结构，但关于其浸润性生长的特点未作报道。本研究中，成釉细胞瘤细胞在培养16 小时后，培养液中有大量的瘤细胞游出，24 小时后有细胞贴壁生长，较其他上皮细胞出现早，说明其不仅具有活跃的增殖能力，且瘤细胞向周围游走的能力也较强。另外，细胞团周边不规则，有突起和卫星样细胞团，更提示细胞具有主动生长的特点。
由于牙源性角化囊肿有较高的复发率，Ahlfors等[2]认为牙源性角化囊肿是良性的囊性肿物，Partridge和Towers[3]则认为其具有肿瘤的生物学行为，Stenman等[4]通过体外培养的方法，发现含牙囊肿无上皮细胞生长，而成釉细胞瘤和角化囊肿有，认为角化囊肿不仅是单纯的囊肿，而更具肿物的生长特点。本研究中2例含牙囊肿均有上皮细胞生长，且较角化囊肿出现早。另外，角化囊肿的上皮细胞团与颊粘膜基本相似，周围平滑规则，与松散的成釉细胞瘤、向周围突出生长和在周围形成卫星样细胞团的结构明显不同。故角化囊肿与成釉细胞瘤的差别更大，而与颊粘膜基本相似。所以，角化囊肿易复发，并不是因为具有肿瘤的生物学特点。Hume等[5]培养的93例牙源性囊肿中，91%的含牙囊肿和58%的角化囊肿有上皮细胞长出，也为此提供了证据。
, 百拇医药
从各实验组的成纤维细胞生长特点观察，成釉细胞瘤的成纤维细胞少而生长较迟，对上皮细胞的局限力小，因而较早就有大量的上皮细胞游出。而各囊肿的成纤维细胞生长快而多，且呈漩涡状紧密围绕于上皮细胞团周围，所以对上皮细胞游出有较强的局限力，另外对囊腔内的膨胀压力也具有较强的对抗力。颊粘膜的成纤维细胞，无论是生长速度还是数量都居于成釉细胞瘤和囊肿之间。High和Robinson[6]在胶原凝胶中培养各种牙源性囊肿的成纤维细胞，含牙囊肿的凝胶收缩速度较慢，说明各囊肿壁的成纤维细胞及细胞外基质存在差异，因此其对抗囊腔内的膨胀压的能力不同。另外各实验组的成纤维细胞具有不同的生长特点，也说明其上皮与结缔组织之间存在相互诱导、相互调节的作用。
本研究证明，角化囊肿与浸润性生长的成釉细胞瘤不同，不具有肿瘤的生长特点。根据角化囊肿的成纤维细胞具有较强的对抗能力，推测其膨胀性生长的能力较强，其复发倾向可能主要是由于较强的膨胀性生长，使病变较大，手术不易完全根除而致。国外曾报道，复发的角化囊肿大多范围较大。经过治疗缩小的角化囊肿，复发率则明显降低。另外，由于上皮与结缔组织之间存在相互诱导的作用，手术残余的组织可能对周围分化不成熟的幼稚细胞，如剩余牙板、粘膜的基底细胞等诱导而复发。无论是囊肿过大，还是幼稚细胞诱导再生，或是剩余的子囊，主要是与手术不彻底有关。Forsell和Sainio[7]随访121例患者发现，手术破碎不能完全摘除的囊肿，50%以上复发。从临床治疗意义来看，角化囊肿虽然不必象成釉细胞瘤一样做下颌骨截除，但单纯的摘除术必然存在复发的危险，所以，除彻底刮治外，还应在病变区与正常组织间做彻底清扫。
, 百拇医药
国家自然科学基金资助课题(39330220)
参考文献
[1] Yang J, Richards J, Bowman P, et al. Sustained growth and three-dimensional organization of primary mammary tumor epithelial cells embedded in collagen gels. Proc Natl Acad Sci U S A， 1979，76：3401-3405.
[2] Ahlfors E, Larsson A, Sjogren S. The odontogenic keratocyst：a benign cystic tumor? J Oral Maxillofac Surg ，1984，42:10-19.
, 百拇医药 [3] Partridge M， Towers JF. The primordial cyst (odontogenic keratocyst): its tumour-like characteristics and behaviour. Br J Oral Maxillofac Surg， 1987，25:271-279.
[4] Stenman G, Magnusson B, Lennartsson B,et al. In vitro growth characteristic of human odontogenic keratocysts and dentigerous cysts.J Oral Pathol, 1986，15:143-145.
[5] Hume WJ, Moore JK, Main DM. Differences in in vitro growth of epithelium from inflammatory and developmental odontogenic cysts. Br J Oral Maxillofac Surg,1990,28:85-88.
, 百拇医药
[6] High AS, Robinson PA. Differences in adhesion and collagen gel contraction between fibroblasts from various types of odontogenic cyst. Arch Oral Biol,1994,39:387-393.
[7] Forsell K, Sainio P. Clinicopathological study of keratinized cysts of the jaws. Proc Finn Dent Soc,1979,75:36-45.
(收稿：1997-01-17 修回：1998-09-23), 百拇医药
单位：赵宁侠 于世凤 王卫华 庞淑珍(100081 北京医科大学口腔医学院)
关键词：上皮细胞；组织培养；成釉细胞瘤；角化囊肿
中华口腔医学杂志990109 【摘要】 目的 观察、比较成釉细胞瘤和角化囊肿细胞的生长特点，探讨角化囊肿复发的原因。方法 原代体外培养成釉细胞瘤细胞、牙源性角化囊肿、根端囊肿及口腔粘膜的上皮细胞和成纤维细胞，倒置光相差显微镜观察。结果 成釉细胞瘤上皮细胞生长较快，细胞生长晕周围不规则，大细胞生长晕周围有许多卫星样小生长晕，成纤维细胞呈网格状。角化囊肿与其他囊肿和正常粘膜的上皮细胞相同，生长缓慢，细胞生长晕周围规则，由呈漩涡状生长的成纤维细胞围绕。结论 成釉细胞瘤细胞生长活跃，而角化囊肿细胞的生长特点与其他囊肿和粘膜相似，提示成釉细胞瘤细胞的浸润性生长特点，推测角化囊肿复发的主要因素不是因为其具有肿瘤的生长特点。
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Growth behavior of cells of ameloblastoma and odontogenic keratocyst
ZHAO Ningxia，YU Shifeng，WANG Weihua，et al.
School of Stomatology,Beijing Medical University, Beijing 100081
【Abstract】 Objective To compare the growth behavior of epithelium and fibroblast from ameloblastoma and keratocyst and to discuss the recurrence reason for the keratocyst.Methods Epithelial cells and fibroblast from ameloblastoma, keratocyst, dentigerous cyst, radicular cyst and oral mucosa were cultured and observed by phase-contrast microscope. Results The epithelial cells of ameloblastoma grew faster, with an irregular area around the cell mass and some small satellite-shaped cell mass. The epithelial cells of all the cysts and mucosa grew slower with the cell masses surrounded by fibroblasts which grew in whirl manner with a round and smooth periphery. Conclusion The cells from the ameloblastoma grow faster and more active,and those from the keratocysts grow like the other cysts and the normal mucosa. It is speculated that the ameloblastoma grows in an aggressive manner and it is possible that the recurrence of the keratocyst isn't primarily resulted from its growth behavior as a tumor.
, 百拇医药
【Key words】 Epithelial cells Tissue culture Ameloblastoma Keratocyst epithelium
成釉细胞瘤是比较常见的牙源性肿瘤，虽然生长缓慢，属良性肿瘤，但易呈局部浸润性生长，手术不彻底常易复发。牙源性角化囊肿也具有较大的复发倾向，关于其原因却意见不一。上皮细胞原代培养的方法，国外早在六七十年代即已开展，目前成釉细胞瘤细胞的传代培养，随着各种材料的出现也日趋成熟，但国内这方面的研究仍然是需要填补的空白。我们通过原代培养的方法，观察、比较牙源性角化囊肿和成釉细胞瘤细胞不同的生长特点，并对角化囊肿复发的原因进行探讨。
材料与方法
1.材料 ：根端囊肿3例，含牙囊肿2例，口腔粘膜2例，牙源性角化囊肿2例，成釉细胞瘤3例。
2.方法：
, http://www.100md.com
(1)取材， D-Hanks液(含青霉素、链霉素各1×106U/L)中浸泡3次，每次20 min。
(2)将组织块分切成1mm×1mm×1mm大小，种于培养皿上，置37℃培养箱3～4小时。
(3)沿培养皿壁缓慢加入DMEM培养液(含胎牛血清10%，青霉素、链霉素各1×105U/L)。
(4)置37℃、5%CO2孵箱内，更换DMEM培养液2次/周，Olympus倒置光相差显微镜观察。
结果
1.一般生长特点：①各囊肿及颊粘膜的组织块周围，2天左右首先有梭形的成纤维细胞呈散射样爬出。含牙囊肿、角化囊肿和颊粘膜分别在2～3天、3～4天和7～8天左右，上皮细胞从组织块中爬出，围绕组织块周围，形成膜状的铺路石样结构，最外层由先爬出的成纤维细胞包绕。随后1周内，上皮细胞生长较快，之后成纤维细胞增多，上皮细胞出现复层，生长速度减慢。根端囊肿无上皮细胞爬出。 ②成釉细胞瘤在种植后16小时，培养液内即可有大量的细胞悬浮，24小时左右成釉细胞瘤上皮细胞贴壁生长，有的围绕组织块周围，有的散在于组织块间，形成结构松散的鳞状细胞团。以后2周内生长较快，成纤维细胞较少，第3周成纤维细胞增多，瘤细胞生长减慢(表1)。
, 百拇医药
表1 成釉细胞瘤、各囊肿及颊粘膜的生长特点 项目
上皮细胞
出现时间
上皮生长
迅速期
成纤维细胞
生长迅速期
成釉细胞瘤
24小时
贴壁后2周
第3周
角化囊肿
, http://www.100md.com 3～4天
贴壁后1周
第2天
含牙囊肿
2～3天
贴壁后1周
第2天
根端囊肿
无
无
第4～5天
颊粘膜
7～8天
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贴壁后1周
第2天
2. 上皮细胞的结构特点： 成釉细胞瘤的上皮细胞大而松散，呈膜状生长的细胞生长晕周边不规则，有一些突起伸出。不同的细胞生长晕之间，有些细胞浆延展而互相连接，呈手拉手样；有些细胞生长晕周围出现小卫星样生长晕，并且逐渐增大。牙源性角化囊肿和含牙囊肿的上皮细胞大而紧密，而颊粘膜的上皮细胞小，其细胞生长晕周围由成纤维细胞围绕，均十分规则(图1、2)。
图1 成釉细胞瘤上皮细胞生长晕周围有卫星样小生长晕。倒置光相差显微镜(×300)
图2 角化囊肿上皮细胞生长晕周围规则，由纤维细胞围绕。倒置光相差显微镜(×300)
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3. 成纤维细胞的生长特点：成釉细胞瘤的成纤维细胞出现较迟，且生长缓慢，呈网格状。角化囊肿和含牙囊肿的成纤维细胞出现较早，生长快而多，颊粘膜居中，这几种成纤维细胞均呈漩涡状。
讨论
本研究采用原代培养，方法简捷明了，而且与体内细胞性状更接近。1979年Yang等[1]将成釉细胞瘤组织块置于胶原凝胶中进行三维培养观察，结果发现在凝胶中长出许多与组织块结构相似的瘤样结构，但关于其浸润性生长的特点未作报道。本研究中，成釉细胞瘤细胞在培养16 小时后，培养液中有大量的瘤细胞游出，24 小时后有细胞贴壁生长，较其他上皮细胞出现早，说明其不仅具有活跃的增殖能力，且瘤细胞向周围游走的能力也较强。另外，细胞团周边不规则，有突起和卫星样细胞团，更提示细胞具有主动生长的特点。
由于牙源性角化囊肿有较高的复发率，Ahlfors等[2]认为牙源性角化囊肿是良性的囊性肿物，Partridge和Towers[3]则认为其具有肿瘤的生物学行为，Stenman等[4]通过体外培养的方法，发现含牙囊肿无上皮细胞生长，而成釉细胞瘤和角化囊肿有，认为角化囊肿不仅是单纯的囊肿，而更具肿物的生长特点。本研究中2例含牙囊肿均有上皮细胞生长，且较角化囊肿出现早。另外，角化囊肿的上皮细胞团与颊粘膜基本相似，周围平滑规则，与松散的成釉细胞瘤、向周围突出生长和在周围形成卫星样细胞团的结构明显不同。故角化囊肿与成釉细胞瘤的差别更大，而与颊粘膜基本相似。所以，角化囊肿易复发，并不是因为具有肿瘤的生物学特点。Hume等[5]培养的93例牙源性囊肿中，91%的含牙囊肿和58%的角化囊肿有上皮细胞长出，也为此提供了证据。
, 百拇医药
从各实验组的成纤维细胞生长特点观察，成釉细胞瘤的成纤维细胞少而生长较迟，对上皮细胞的局限力小，因而较早就有大量的上皮细胞游出。而各囊肿的成纤维细胞生长快而多，且呈漩涡状紧密围绕于上皮细胞团周围，所以对上皮细胞游出有较强的局限力，另外对囊腔内的膨胀压力也具有较强的对抗力。颊粘膜的成纤维细胞，无论是生长速度还是数量都居于成釉细胞瘤和囊肿之间。High和Robinson[6]在胶原凝胶中培养各种牙源性囊肿的成纤维细胞，含牙囊肿的凝胶收缩速度较慢，说明各囊肿壁的成纤维细胞及细胞外基质存在差异，因此其对抗囊腔内的膨胀压的能力不同。另外各实验组的成纤维细胞具有不同的生长特点，也说明其上皮与结缔组织之间存在相互诱导、相互调节的作用。
本研究证明，角化囊肿与浸润性生长的成釉细胞瘤不同，不具有肿瘤的生长特点。根据角化囊肿的成纤维细胞具有较强的对抗能力，推测其膨胀性生长的能力较强，其复发倾向可能主要是由于较强的膨胀性生长，使病变较大，手术不易完全根除而致。国外曾报道，复发的角化囊肿大多范围较大。经过治疗缩小的角化囊肿，复发率则明显降低。另外，由于上皮与结缔组织之间存在相互诱导的作用，手术残余的组织可能对周围分化不成熟的幼稚细胞，如剩余牙板、粘膜的基底细胞等诱导而复发。无论是囊肿过大，还是幼稚细胞诱导再生，或是剩余的子囊，主要是与手术不彻底有关。Forsell和Sainio[7]随访121例患者发现，手术破碎不能完全摘除的囊肿，50%以上复发。从临床治疗意义来看，角化囊肿虽然不必象成釉细胞瘤一样做下颌骨截除，但单纯的摘除术必然存在复发的危险，所以，除彻底刮治外，还应在病变区与正常组织间做彻底清扫。
, 百拇医药
国家自然科学基金资助课题(39330220)
参考文献
[1] Yang J, Richards J, Bowman P, et al. Sustained growth and three-dimensional organization of primary mammary tumor epithelial cells embedded in collagen gels. Proc Natl Acad Sci U S A， 1979，76：3401-3405.
[2] Ahlfors E, Larsson A, Sjogren S. The odontogenic keratocyst：a benign cystic tumor? J Oral Maxillofac Surg ，1984，42:10-19.
, 百拇医药 [3] Partridge M， Towers JF. The primordial cyst (odontogenic keratocyst): its tumour-like characteristics and behaviour. Br J Oral Maxillofac Surg， 1987，25:271-279.
[4] Stenman G, Magnusson B, Lennartsson B,et al. In vitro growth characteristic of human odontogenic keratocysts and dentigerous cysts.J Oral Pathol, 1986，15:143-145.
[5] Hume WJ, Moore JK, Main DM. Differences in in vitro growth of epithelium from inflammatory and developmental odontogenic cysts. Br J Oral Maxillofac Surg,1990,28:85-88.
, 百拇医药
[6] High AS, Robinson PA. Differences in adhesion and collagen gel contraction between fibroblasts from various types of odontogenic cyst. Arch Oral Biol,1994,39:387-393.
[7] Forsell K, Sainio P. Clinicopathological study of keratinized cysts of the jaws. Proc Finn Dent Soc,1979,75:36-45.
(收稿：1997-01-17 修回：1998-09-23), 百拇医药