丙型肝炎病毒抗体一步快速检测法及与ELISA的比较
作者：郑 铃 詹丽钦 陈贻锴
单位：郑 铃 詹丽钦 陈贻锴 福建医科大学基因工程研究室(福州 350004)
关键词：丙型肝炎病毒抗体；快速检测
福建医科大学学报990141 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种非肠道传染性肝炎。感染HCV后，50%～85%的病人转为长期带毒者；其中25%的病人于5～10年左右出现肝硬化甚至肝癌[1,2]。HCV主要通过输血、静脉毒品注射针头、性传播和一定程度的家庭传播。因此，现在国内外已把HCV检测列为献血员筛选指标之一。HCV在血液中的含量很低，需要用非常灵敏的方法，如RT-PCR，才能检测出。但RT-PCR法由于存在费用高、操作复杂以及非病毒血症期检测结果阴性等问题，不能作为常规方法在临床上使用。目前广泛运用的检测法是HCV抗体的ELISA检测法，此方法具有快速、简便、稳定等优点，因而在丙型肝炎诊断、鉴别诊断、献血员筛选以及流行病学调查中都有很高的使用价值。但是，多年来尽管对其进行了大量改进，ELISA检测法仍存在步骤繁琐、需要特殊设备(酶标测定仪)等缺点。因此发展更为简便有效的HCV抗体检测法便成为研究的热点。美国BioAge公司最近研制出一种“丙型肝炎病毒抗体快速诊断试条”，该方法只要一步操作即可定性地检测出人血中的HCV特异性抗体。本研究对80例丙肝患者和102例健康体检人群同时应用ELISA和快速诊断试条进行检测比较，以检验快速诊断试条在我国人群中的应用效果。
, 百拇医药
1 材料和方法
1.1 HCV抗体快速诊断试条 由美国BioAge公司研制。用HCV基因重组混合抗原(C、NS3和NS4)标记乳胶，然后固定于试条上。在试条检测区预先包被特异性抗体。试条结构如图所示。
1.2 丙型肝炎抗体酶联免疫测定试剂盒 购自华美生物工程公司(批号980301)和北京万泰生物药业公司(批号98031801)
1.3 血清样品
1. 3.1 丙肝患者血清 收集本地区市级以上医院近1～2年保存的患者血清。这些患者经临床和实验室检测(包括ELISA和/或PCR法)已诊断为HCV感染。
1.3.2 正常人群血清样品 为新近正常人群的健康体检血清。
, 百拇医药
1.4 ELISA检测法 按厂家提供之使用说明书操作，用美国Bio-Rad酶标仪测定OD405 nm。依据厂家提供之标准判定结果。
1.5 快速诊断试条的一步测定法 吸取50 μl血清样品加入试条的样品端，肉眼观察试条测试区的变化。如在3 min内测试区同时显现A线和B线，则结果为阳性；如仅显现B线，无A线，则结果为阴性；如果A线和B线均不显现，说明试条失效，需更换试条重新检测。2 结 果
2.1 丙型肝炎患者血清检测 共检测80例丙型肝炎患者血清。快速诊断试条法检出73例阳性，阳性率为91.3%；而ELISA法，华美试剂盒和万泰试剂盒分别测出71例和72例阳性。实验结果表明，试条法检测的阳性样品含盖了上述两种ELISA法的阳性样品；它们之间的阳性检出符合率分别为97.5%和98.8%(表1)。卡方检验显示试条法与ELISA法在样品的阳性检出率方面无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com 表1 80例丙型肝炎患者HCV抗体检测结果 ELISA法
快速诊断试条法
阳性符合率(%)
+
-
华美试剂盒
+
71
0
-
2
7
97.5
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万泰试剂盒
+
72
0
-
1
7
98.8
2.2 健康体检人群检测 共检测102份健康体检人群的血清。快速诊断试条法检出其中6份血清为阳性；ELISA法，华美试剂盒检见3份阳性，而万泰试剂盒检见1份阳性。试条法检测阴性率为94.4%，华美试剂盒阴性率97.1%；万泰试剂盒99%，它们之间的阴性符合率分别为97.1%和95.1%(表2)。同样经卡方检验显示试条法与ELISA法在样品检测阴性率方面无显著性差异(P>0.05)。表2 102例健康体检人群HCV抗体检测结果 ELISA法
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快速诊断试条法
阳性符合率(%)
+
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华美试剂盒
+
3
0
-
3
96
97.1
万泰试剂盒
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+
1
0
-
5
96
95.1
3 讨 论
目前，欧美许多研究所和公司都在大力开发各种疾病的快速诊断试条法。这种试条主要采用胶体金或乳胶作为标记物。其中一些产品已上市，如早早孕(HCG)、HIV-2抗体、HBsAg、胃幽门螺杆菌(HP)抗体、癌胚抗原(CEA)和毒品(可卡因、吗啡)等；但未见在丙型肝炎诊断方面的类似报道。本文采用美国BioAge公司最新研制的丙型肝炎病毒抗体快速诊断试条对80例丙肝患者和102份健康体检人群进行了检测，同时与ELISA法比较。结果显示试条法和ELISA法对丙肝患者检测的阳性率都在90%左右；两者的阳性和阴性符合率均高达95%～98%，卡方检验显示两方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。由此可见，试条法检测HCV抗体的敏感性和特异性与ELISA法相当；而且，此方法法需血量极少(50 μl血清或70 μl末捎指血)，操作十分简便，不需要任何仪器设备，3 min内就可判定结果。检测试条可直接存放在室温，无需冷存。因此特别适合于基层机构和现场使用。
, http://www.100md.com
本研究中，尚有部分丙肝患者样品，几种抗体检测方法的检测结果均为阴性，这可能与部分早期患者血清抗体尚末产生有关，也可能与诊断试剂所采用的抗原广谱性不足有关。对健康体检人群的检测，快速诊断试条法阳性率为5.9%，与国外报道的献血员中丙肝阳性比例在0.5%～8%之间的结果[3]相一致。快速诊断试条法的检测阳性数略多于ELISA法，是否说明前者的敏感性优于后者，或者是后者的特异性稍高于前者，还有待于资料积累。但作为献血员HCV抗体的筛选和普查，快速诊断试条法完全可以替代现行的ELISA法。
参考文献
[1]Hoofnagle JH. Hepatitis C： the clinical spectrum of disease. Hepatelogy, 1997; 26(Suppl):15
[2]Esteban JI, Gonzalez A, Hornandez JM. Evaluation of antibodies to hepatitis C virus in a study of transfusion-associated hepatitis. N Engl J Med, 1990;323:1107
[3]Genetic diversity of hepatitis C virus: Implications for pathogenesis treatment, and prevention. Report of a meeting of physicians and scientists. Royal Free Hospital and School of Medicine. Lancet, 1995;345:562
(收稿：1998-08-20 修回：1998-10-06), http://www.100md.com
单位：郑 铃 詹丽钦 陈贻锴 福建医科大学基因工程研究室(福州 350004)
关键词：丙型肝炎病毒抗体；快速检测
福建医科大学学报990141 丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(HCV)引起的一种非肠道传染性肝炎。感染HCV后，50%～85%的病人转为长期带毒者；其中25%的病人于5～10年左右出现肝硬化甚至肝癌[1,2]。HCV主要通过输血、静脉毒品注射针头、性传播和一定程度的家庭传播。因此，现在国内外已把HCV检测列为献血员筛选指标之一。HCV在血液中的含量很低，需要用非常灵敏的方法，如RT-PCR，才能检测出。但RT-PCR法由于存在费用高、操作复杂以及非病毒血症期检测结果阴性等问题，不能作为常规方法在临床上使用。目前广泛运用的检测法是HCV抗体的ELISA检测法，此方法具有快速、简便、稳定等优点，因而在丙型肝炎诊断、鉴别诊断、献血员筛选以及流行病学调查中都有很高的使用价值。但是，多年来尽管对其进行了大量改进，ELISA检测法仍存在步骤繁琐、需要特殊设备(酶标测定仪)等缺点。因此发展更为简便有效的HCV抗体检测法便成为研究的热点。美国BioAge公司最近研制出一种“丙型肝炎病毒抗体快速诊断试条”，该方法只要一步操作即可定性地检测出人血中的HCV特异性抗体。本研究对80例丙肝患者和102例健康体检人群同时应用ELISA和快速诊断试条进行检测比较，以检验快速诊断试条在我国人群中的应用效果。
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1 材料和方法
1.1 HCV抗体快速诊断试条 由美国BioAge公司研制。用HCV基因重组混合抗原(C、NS3和NS4)标记乳胶，然后固定于试条上。在试条检测区预先包被特异性抗体。试条结构如图所示。
1.2 丙型肝炎抗体酶联免疫测定试剂盒 购自华美生物工程公司(批号980301)和北京万泰生物药业公司(批号98031801)
1.3 血清样品
1. 3.1 丙肝患者血清 收集本地区市级以上医院近1～2年保存的患者血清。这些患者经临床和实验室检测(包括ELISA和/或PCR法)已诊断为HCV感染。
1.3.2 正常人群血清样品 为新近正常人群的健康体检血清。
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1.4 ELISA检测法 按厂家提供之使用说明书操作，用美国Bio-Rad酶标仪测定OD405 nm。依据厂家提供之标准判定结果。
1.5 快速诊断试条的一步测定法 吸取50 μl血清样品加入试条的样品端，肉眼观察试条测试区的变化。如在3 min内测试区同时显现A线和B线，则结果为阳性；如仅显现B线，无A线，则结果为阴性；如果A线和B线均不显现，说明试条失效，需更换试条重新检测。2 结 果
2.1 丙型肝炎患者血清检测 共检测80例丙型肝炎患者血清。快速诊断试条法检出73例阳性，阳性率为91.3%；而ELISA法，华美试剂盒和万泰试剂盒分别测出71例和72例阳性。实验结果表明，试条法检测的阳性样品含盖了上述两种ELISA法的阳性样品；它们之间的阳性检出符合率分别为97.5%和98.8%(表1)。卡方检验显示试条法与ELISA法在样品的阳性检出率方面无显著性差异(P>0.05)。
, http://www.100md.com 表1 80例丙型肝炎患者HCV抗体检测结果 ELISA法
快速诊断试条法
阳性符合率(%)
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华美试剂盒
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万泰试剂盒
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2.2 健康体检人群检测 共检测102份健康体检人群的血清。快速诊断试条法检出其中6份血清为阳性；ELISA法，华美试剂盒检见3份阳性，而万泰试剂盒检见1份阳性。试条法检测阴性率为94.4%，华美试剂盒阴性率97.1%；万泰试剂盒99%，它们之间的阴性符合率分别为97.1%和95.1%(表2)。同样经卡方检验显示试条法与ELISA法在样品检测阴性率方面无显著性差异(P>0.05)。表2 102例健康体检人群HCV抗体检测结果 ELISA法
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快速诊断试条法
阳性符合率(%)
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华美试剂盒
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万泰试剂盒
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3 讨 论
目前，欧美许多研究所和公司都在大力开发各种疾病的快速诊断试条法。这种试条主要采用胶体金或乳胶作为标记物。其中一些产品已上市，如早早孕(HCG)、HIV-2抗体、HBsAg、胃幽门螺杆菌(HP)抗体、癌胚抗原(CEA)和毒品(可卡因、吗啡)等；但未见在丙型肝炎诊断方面的类似报道。本文采用美国BioAge公司最新研制的丙型肝炎病毒抗体快速诊断试条对80例丙肝患者和102份健康体检人群进行了检测，同时与ELISA法比较。结果显示试条法和ELISA法对丙肝患者检测的阳性率都在90%左右；两者的阳性和阴性符合率均高达95%～98%，卡方检验显示两方法检测结果无显著性差异(P>0.05)。由此可见，试条法检测HCV抗体的敏感性和特异性与ELISA法相当；而且，此方法法需血量极少(50 μl血清或70 μl末捎指血)，操作十分简便，不需要任何仪器设备，3 min内就可判定结果。检测试条可直接存放在室温，无需冷存。因此特别适合于基层机构和现场使用。
, http://www.100md.com
本研究中，尚有部分丙肝患者样品，几种抗体检测方法的检测结果均为阴性，这可能与部分早期患者血清抗体尚末产生有关，也可能与诊断试剂所采用的抗原广谱性不足有关。对健康体检人群的检测，快速诊断试条法阳性率为5.9%，与国外报道的献血员中丙肝阳性比例在0.5%～8%之间的结果[3]相一致。快速诊断试条法的检测阳性数略多于ELISA法，是否说明前者的敏感性优于后者，或者是后者的特异性稍高于前者，还有待于资料积累。但作为献血员HCV抗体的筛选和普查，快速诊断试条法完全可以替代现行的ELISA法。
参考文献
[1]Hoofnagle JH. Hepatitis C： the clinical spectrum of disease. Hepatelogy, 1997; 26(Suppl):15
[2]Esteban JI, Gonzalez A, Hornandez JM. Evaluation of antibodies to hepatitis C virus in a study of transfusion-associated hepatitis. N Engl J Med, 1990;323:1107
[3]Genetic diversity of hepatitis C virus: Implications for pathogenesis treatment, and prevention. Report of a meeting of physicians and scientists. Royal Free Hospital and School of Medicine. Lancet, 1995;345:562
(收稿：1998-08-20 修回：1998-10-06), http://www.100md.com