胶质瘤细胞血小板源生长因子B链的纯合二聚体与其受体基因表达和受体活化水平的研究
作者：于士柱 浦佩玉 江德华 管欣琴 安同岭
单位：300052 天津医科大学总医院 天津市神经病学研究所
关键词：神经胶质瘤；血小板源生长因子；受体；血小板源生长因子
摘要 目的 摘要 目的：探讨不同年龄段大鼠小肠肥大细胞结构变化与功能的关系。方法：应用透射电镜对出生10 d至1年以上各组大鼠的小肠肥大细胞进行电镜观察。结果：10～20 d组：多为正在发育中的肥大细胞，生后30 d、8周和6个月组大致可分为形态不规则，表面有许多微绒毛，分泌颗粒大小不等的活化型和细胞呈圆形或卵圆形，表面光滑突起少，分泌颗粒较均匀，胞质内有大小不等的空泡出现的恢复期的肥大细胞。6个月和1年以上组还见到正在缓慢分泌和功能静止的肥大细胞。结论：不同年龄段大鼠小肠肥大细胞在结构上有很大差异。
Electron Microscopic Study of Mast Cells of Rats of Different Ages
, http://www.100md.com
Ma Tingxian， Penghong， Shi Jizhong
Department of Histology and Embryology, College of Basie Medical Sciences, China Medical University, Shenyang, 110001
ABSTRACT Objective:This study is to approach relationship between structure change and functions of mast cells in small intestinal mucosa of differentaged rats. Methods：Mast cells in small intestinal mucosa of rats aged from 10 days to one year up were observed under TEM. Results:Most of mast cells in rats of 10～20 days of age were developing ones those found in rats of 30 days, 8 weeks, and 6 monds of age could be divided into two types the mast cells were irregular in shape with many microvilli on the surface and secretory granules of different size in the cytoplasm were found which were activated-typed cells; the mast cells were round or oval with few processes on the surface, secretory granules of same size and vacuoles of different size in the cytoplasm were found. Conclusion:There are significant differences in structure of mast cells in rats of different ages.
, 百拇医药
KEY WORDS rat; mast cell; obesrvation under TEM
近年来对肥大细胞(mast cell， MC)的研究取得了长足的进展。早在60年代，对大鼠胚胎发育时期MC颗粒的组化性质进行了研究[1]，相继又有许多类似的报道。但对大鼠小肠肥大细胞年龄性变化的研究报道甚少。本实验在透射电镜下观察生后10 d至1年以上各年龄组大鼠小肠MC的超微结构，以期对MC的发育进行进一步的探讨。
1 材料与方法
分别取生后10d、18d、20d、30d、8周、6个月、1年以上不同年龄段大鼠各5例，切取空肠段0.5 cm2的组织块，立即投入固定液中(多聚甲醛4 g，戊二醛20ml，0.2mol/L磷酸盐缓冲液100ml，双蒸水80ml,pH7.4),4℃固定2 h后再切成1mm×2mm小块。用含10%蔗糖的磷酸盐缓冲液洗3次，每次10min，用1%锇酸后固定，4℃1h。常规脱水，树脂包埋，超薄切片。用醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色，JEX-1200透射电镜观察并拍照。
, http://www.100md.com
2 结果
电镜下各年龄组小肠绒毛固有层内有许多肥大细胞，多沿小血管分布，细胞形态各异，体积较少，胞质内分泌颗粒大小不等，数量不一，按其结构多属粘膜肥大细胞(mucosal mast cell, MMC)。常见一个或多个肥大细胞与嗜酸粒细胞相伴存在，同时还可见与巨噬细胞、淋巴细胞密切接触。在不同年龄段肥大细胞的外形和内部结构均有较大差异，分述如下：
2.1 生后10d、18d、20d大鼠MC的结构基本相同，胞体呈不规则形，可见有伸长的突起，细胞表面有许多微绒毛和皱襞，胞质丰富，分泌颗粒大小不等，数量少。颗粒内容均质状，电子密度高低不等，可见一些低电子密度的大颗粒。核圆或不规则形，胞质中可见中心粒，发达的高尔基复合体和较多的线粒体，质膜下可见微丝和微管(图1、2)。
2.2 生后30d、8周的大鼠小肠粘膜层的肥大细胞，大致可分为两种类型：一类与10d、18d、20d大鼠的相同，为不规则形多突起的细胞，只胞质相对少些，分泌颗粒数量增多(图3)。另一类：胞体呈圆形或卵圆形，表面光滑，微绒毛和皱襞均较少，核圆或卵圆形居中，胞质相对少，各种细胞器均无前者发达，分泌颗粒大小差异不甚明显，电子密度高，胞质内出现一个或多个大小不等的空泡(图4)。
, 百拇医药
2.3 生后6个月大鼠多数肥大细胞表面较光滑，微绒毛和皱襞均少，胞质内均有大小不等的空泡，还有些肥大细胞核的异染色质增多，核偏位或固缩，胞质稀疏，颗粒间有许多小空泡出现，大空泡内常可见絮状物或髓样结构(图5)。
2.4 1年以上大鼠MC的结构多数与6个月大鼠相似，只是胞质多出现较大的空泡，分泌颗粒较多，少见低电子密度的大颗粒(图6)。
图1 生后10 d大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×6000
图2 生后20 d大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×10000
, http://www.100md.com
图3 生后8周大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×8000
图4 生后8周大鼠小肠粘膜MC，表面光滑，分泌颗粒电子密度高属于静止型MC ×5000
图5 生后6个月大鼠小肠粘膜MC，核偏位、固缩、溶解，属于衰亡过程中MC ×5000
图6 生后1年以上大鼠小肠粘膜MC，核偏位、固缩、溶解，属于衰亡过程中MC ×6000
3 讨论
3.1 肥大细胞在不同种属、个体、部位、乃至同一部位的不同细胞都存在着异质性。大鼠的肥大细胞也是一个异质性群体。许多研究认为，大鼠肥大细胞可分为两大亚群：(1) 主要存在于胃肠道粘膜中，称为粘膜肥大细胞(Mucosal mast cell, MMC);(2) 主要存在于皮肤，结缔组织和腹腔中，称为结缔组织肥大细胞(Connective tissue mast cell, CTMC)[2]。MMC具有体积小、形态各异、分泌颗粒大小不一等特点[3]，本实验各年龄组的MC，多属于MMC。
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3.2 有关肥大细胞的超微结构分型目前尚无定论。Susan等[4]证明大鼠腹腔分离肥大细胞组胺的分泌与表面质膜褶的长度之间呈正相关关系，即其褶越多说明其分泌活跃旺盛。本研究发现，大鼠各年龄段MC的超微结构差异较大：生后10 d、18 d、20 d大鼠的肥大细胞，属于发育成熟的肥大细胞，功能亦比较活跃；30 d、8周、6个月的大鼠MC大致分为两种类型：一类形态不规则，表面微绒毛和皱襞较多，分泌颗粒大小和电子密度均不一致，其中大的低电子密度的分泌颗粒属于脱颗粒前的颗粒，此时应视为分泌活动开始。故此类MC属于分泌活跃型或称活化型。这些特征与杨美林等[5]在人食管癌和癌周组织中所见到的活化型MC的超微结构上极相似。另一类MC为圆形或卵圆型，表面光滑，微绒毛很少，分泌颗粒电子密度高且大小较均匀一致，属于静止型MC。有的在胞质中出现大小不等的空泡[6]，这类细胞可能属于分泌后恢复期的MC[4]。而在6个月大鼠中所见到的在分泌颗粒中间有许多小空泡，有的在膜上有开口，据Dvorak[7]报道是MC持续缓慢地脱颗粒。这些细胞均应认为是处于活化状态，只是对抗原作用的应答方式不同，前者属于快速脱颗粒，而后者是缓慢的释放其生物活性物质。
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3.3 目前认为，MC不是终末细胞，脱颗粒后“年轻化”[8]，新的颗粒缓慢形成，并可再进入活化期，但仍认为MMC的生存年限短于CTMC[2]，在6个月，1年以上大鼠中所见到的核偏位或固缩溶解等状态的MC，不能排除这些细胞最终走向衰亡。
参考文献
1 Combs IW. Differentiation and proliferation of enbryonic mast cell of the rat. J cell Biol, 1965，25:577_579
2 安庆云，滕树华.肥大细胞的研究进展.首都医学院学报，1992，13(2)：154—158
3 成令忠.组织学.第2版.北京：人民卫生出版社，1993.234
, http://www.100md.com
4 Susan Jo Burwen, Birgit H Satir. Plasma Membrane folds in the mast cell surface and their relationship to secretory activity. J Cell Biol, 1997,74:690_697
5 杨美林，路喜安，乔从进，等.肥大细胞在食管癌的特征—组织化学与电镜的观察.解剖学杂志，1994,17(1)：1—5
6 Douglas. WW. Involvment of calcium in exocytosis and the exocytosis-vesiculation sequence. Biochen Soc Symp, 1974,39:1_28
7 Dvorak AM. Granules changes of human skin mast cell characteristic of piece-meal degranulation and associated with recovery during wound healing in sitic. J Leukoc Biol, 1991,49(2):197_200
8 陆德源.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社，1995.149
1998-07-06收稿, 百拇医药
单位：300052 天津医科大学总医院 天津市神经病学研究所
关键词：神经胶质瘤；血小板源生长因子；受体；血小板源生长因子
摘要 目的 摘要 目的：探讨不同年龄段大鼠小肠肥大细胞结构变化与功能的关系。方法：应用透射电镜对出生10 d至1年以上各组大鼠的小肠肥大细胞进行电镜观察。结果：10～20 d组：多为正在发育中的肥大细胞，生后30 d、8周和6个月组大致可分为形态不规则，表面有许多微绒毛，分泌颗粒大小不等的活化型和细胞呈圆形或卵圆形，表面光滑突起少，分泌颗粒较均匀，胞质内有大小不等的空泡出现的恢复期的肥大细胞。6个月和1年以上组还见到正在缓慢分泌和功能静止的肥大细胞。结论：不同年龄段大鼠小肠肥大细胞在结构上有很大差异。
Electron Microscopic Study of Mast Cells of Rats of Different Ages
, http://www.100md.com
Ma Tingxian， Penghong， Shi Jizhong
Department of Histology and Embryology, College of Basie Medical Sciences, China Medical University, Shenyang, 110001
ABSTRACT Objective:This study is to approach relationship between structure change and functions of mast cells in small intestinal mucosa of differentaged rats. Methods：Mast cells in small intestinal mucosa of rats aged from 10 days to one year up were observed under TEM. Results:Most of mast cells in rats of 10～20 days of age were developing ones those found in rats of 30 days, 8 weeks, and 6 monds of age could be divided into two types the mast cells were irregular in shape with many microvilli on the surface and secretory granules of different size in the cytoplasm were found which were activated-typed cells; the mast cells were round or oval with few processes on the surface, secretory granules of same size and vacuoles of different size in the cytoplasm were found. Conclusion:There are significant differences in structure of mast cells in rats of different ages.
, 百拇医药
KEY WORDS rat; mast cell; obesrvation under TEM
近年来对肥大细胞(mast cell， MC)的研究取得了长足的进展。早在60年代，对大鼠胚胎发育时期MC颗粒的组化性质进行了研究[1]，相继又有许多类似的报道。但对大鼠小肠肥大细胞年龄性变化的研究报道甚少。本实验在透射电镜下观察生后10 d至1年以上各年龄组大鼠小肠MC的超微结构，以期对MC的发育进行进一步的探讨。
1 材料与方法
分别取生后10d、18d、20d、30d、8周、6个月、1年以上不同年龄段大鼠各5例，切取空肠段0.5 cm2的组织块，立即投入固定液中(多聚甲醛4 g，戊二醛20ml，0.2mol/L磷酸盐缓冲液100ml，双蒸水80ml,pH7.4),4℃固定2 h后再切成1mm×2mm小块。用含10%蔗糖的磷酸盐缓冲液洗3次，每次10min，用1%锇酸后固定，4℃1h。常规脱水，树脂包埋，超薄切片。用醋酸双氧铀和柠檬酸铅染色，JEX-1200透射电镜观察并拍照。
, http://www.100md.com
2 结果
电镜下各年龄组小肠绒毛固有层内有许多肥大细胞，多沿小血管分布，细胞形态各异，体积较少，胞质内分泌颗粒大小不等，数量不一，按其结构多属粘膜肥大细胞(mucosal mast cell, MMC)。常见一个或多个肥大细胞与嗜酸粒细胞相伴存在，同时还可见与巨噬细胞、淋巴细胞密切接触。在不同年龄段肥大细胞的外形和内部结构均有较大差异，分述如下：
2.1 生后10d、18d、20d大鼠MC的结构基本相同，胞体呈不规则形，可见有伸长的突起，细胞表面有许多微绒毛和皱襞，胞质丰富，分泌颗粒大小不等，数量少。颗粒内容均质状，电子密度高低不等，可见一些低电子密度的大颗粒。核圆或不规则形，胞质中可见中心粒，发达的高尔基复合体和较多的线粒体，质膜下可见微丝和微管(图1、2)。
2.2 生后30d、8周的大鼠小肠粘膜层的肥大细胞，大致可分为两种类型：一类与10d、18d、20d大鼠的相同，为不规则形多突起的细胞，只胞质相对少些，分泌颗粒数量增多(图3)。另一类：胞体呈圆形或卵圆形，表面光滑，微绒毛和皱襞均较少，核圆或卵圆形居中，胞质相对少，各种细胞器均无前者发达，分泌颗粒大小差异不甚明显，电子密度高，胞质内出现一个或多个大小不等的空泡(图4)。
, 百拇医药
2.3 生后6个月大鼠多数肥大细胞表面较光滑，微绒毛和皱襞均少，胞质内均有大小不等的空泡，还有些肥大细胞核的异染色质增多，核偏位或固缩，胞质稀疏，颗粒间有许多小空泡出现，大空泡内常可见絮状物或髓样结构(图5)。
2.4 1年以上大鼠MC的结构多数与6个月大鼠相似，只是胞质多出现较大的空泡，分泌颗粒较多，少见低电子密度的大颗粒(图6)。
图1 生后10 d大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×6000
图2 生后20 d大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×10000
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图3 生后8周大鼠小肠粘膜MC，形态不规则，分泌颗粒电子密度高低不等，属活化型MC ×8000
图4 生后8周大鼠小肠粘膜MC，表面光滑，分泌颗粒电子密度高属于静止型MC ×5000
图5 生后6个月大鼠小肠粘膜MC，核偏位、固缩、溶解，属于衰亡过程中MC ×5000
图6 生后1年以上大鼠小肠粘膜MC，核偏位、固缩、溶解，属于衰亡过程中MC ×6000
3 讨论
3.1 肥大细胞在不同种属、个体、部位、乃至同一部位的不同细胞都存在着异质性。大鼠的肥大细胞也是一个异质性群体。许多研究认为，大鼠肥大细胞可分为两大亚群：(1) 主要存在于胃肠道粘膜中，称为粘膜肥大细胞(Mucosal mast cell, MMC);(2) 主要存在于皮肤，结缔组织和腹腔中，称为结缔组织肥大细胞(Connective tissue mast cell, CTMC)[2]。MMC具有体积小、形态各异、分泌颗粒大小不一等特点[3]，本实验各年龄组的MC，多属于MMC。
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3.2 有关肥大细胞的超微结构分型目前尚无定论。Susan等[4]证明大鼠腹腔分离肥大细胞组胺的分泌与表面质膜褶的长度之间呈正相关关系，即其褶越多说明其分泌活跃旺盛。本研究发现，大鼠各年龄段MC的超微结构差异较大：生后10 d、18 d、20 d大鼠的肥大细胞，属于发育成熟的肥大细胞，功能亦比较活跃；30 d、8周、6个月的大鼠MC大致分为两种类型：一类形态不规则，表面微绒毛和皱襞较多，分泌颗粒大小和电子密度均不一致，其中大的低电子密度的分泌颗粒属于脱颗粒前的颗粒，此时应视为分泌活动开始。故此类MC属于分泌活跃型或称活化型。这些特征与杨美林等[5]在人食管癌和癌周组织中所见到的活化型MC的超微结构上极相似。另一类MC为圆形或卵圆型，表面光滑，微绒毛很少，分泌颗粒电子密度高且大小较均匀一致，属于静止型MC。有的在胞质中出现大小不等的空泡[6]，这类细胞可能属于分泌后恢复期的MC[4]。而在6个月大鼠中所见到的在分泌颗粒中间有许多小空泡，有的在膜上有开口，据Dvorak[7]报道是MC持续缓慢地脱颗粒。这些细胞均应认为是处于活化状态，只是对抗原作用的应答方式不同，前者属于快速脱颗粒，而后者是缓慢的释放其生物活性物质。
, http://www.100md.com
3.3 目前认为，MC不是终末细胞，脱颗粒后“年轻化”[8]，新的颗粒缓慢形成，并可再进入活化期，但仍认为MMC的生存年限短于CTMC[2]，在6个月，1年以上大鼠中所见到的核偏位或固缩溶解等状态的MC，不能排除这些细胞最终走向衰亡。
参考文献
1 Combs IW. Differentiation and proliferation of enbryonic mast cell of the rat. J cell Biol, 1965，25:577_579
2 安庆云，滕树华.肥大细胞的研究进展.首都医学院学报，1992，13(2)：154—158
3 成令忠.组织学.第2版.北京：人民卫生出版社，1993.234
, http://www.100md.com
4 Susan Jo Burwen, Birgit H Satir. Plasma Membrane folds in the mast cell surface and their relationship to secretory activity. J Cell Biol, 1997,74:690_697
5 杨美林，路喜安，乔从进，等.肥大细胞在食管癌的特征—组织化学与电镜的观察.解剖学杂志，1994,17(1)：1—5
6 Douglas. WW. Involvment of calcium in exocytosis and the exocytosis-vesiculation sequence. Biochen Soc Symp, 1974,39:1_28
7 Dvorak AM. Granules changes of human skin mast cell characteristic of piece-meal degranulation and associated with recovery during wound healing in sitic. J Leukoc Biol, 1991,49(2):197_200
8 陆德源.现代免疫学.上海：上海科学技术出版社，1995.149
1998-07-06收稿, 百拇医药