ZTC 1+1 天然澄清剂在化积膜制备工艺中的应用
作者：曾祖平 何薇 穆树仁
单位：北京市中医研究所 100010
关键词：ZTC 1+1；澄清剂；薄层层析；大黄酸；含量测定
中草药000718摘 要 向化积膜提取液中加入不同量的ZTC 1+1 澄清剂，鉴别了上清液的主要成分当归、黄柏，测定了上清液中大黄酸的含量，并与醇沉工艺和未处理的药液进行了比较，筛选出最佳工艺。
化积膜是由黑膏药剂改成的中药复方涂膜剂。在工艺研究时，分别用不同量的ZTC 1+1 澄清剂和乙醇对化积膜群药水煎液进行沉淀处理。采用薄层层析法检识了上清液中的有效成分阿魏酸等，采用薄层扫描法测定了上清液中大黄酸的含量，确定了最佳工艺。
1 仪器与试药
LD5-2A离心机(北京医用离心机厂)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)，CS-9000薄层扫描仪(日本岛津)。
, http://www.100md.com
ZTC-Ⅲ型澄清剂A和B(北京正天成澄清技术有限公司)，化积膜群药液(自制，水煎后浓缩至相对密度为1.01，60 ℃测)，盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、阿魏酸、大黄酸对照品(中国药品生物制品检定所)，硅胶G、硅胶H(青岛海洋化工厂)，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 澄清剂的配制：A组份用水配成1%溶液，先用少量水搅成糊状，然后加入需要的水量，溶胀24 h，搅拌，双层纱布过滤，即得。B组份用1%醋酸配成1%溶液，先用少量1%醋酸溶解B组份并搅成糊状，再加入需要量的1%醋酸，溶胀24 h，双层纱布过滤，即得。
2.2 样品制备：精密吸取化积膜群药液25 mL共12 份，其中8 份在70 ℃水浴5 min后，振摇下分别加入药液体积2%，4%，6%，8%的B组分，保温2 h后振摇下再分别加入药液体积1%，2%，3%，4%的A组分，离开水浴，静置过夜后离心(4 000 r/min，20 min)，倾出上清液，得样品1，2，3，4各两份。
, 百拇医药
另两份化积膜群药液直接离心(条件同上)，分取上清液，得样品5两份。
剩余两分化积膜群药液分别加入95%乙醇使含醇量达60%，静置过夜，离心(条件同上)，倾出上清液，回收乙醇，剩余药液为样品6两份。
2.3 TLC检识
2.3.1 阿魏酸的鉴别[1]：取各样品各1 份，分别用盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯萃取2 次，每次20 mL，合并醋酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣用醋酸乙酯1 mL溶解，作为供试液。另取处方配比、除当归外的其它药材，同法制成当归阴性对照液。另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。分别吸取供试液各5 μL、阴性对照液5 μL、对照品溶液2 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的薄层硅胶G板上，以苯-冰醋酸-甲醇(10∶0.3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的蓝色荧光斑点，阴性对照则无(图1)。
图1 当归样品TLC图
, 百拇医药
2.3.2 黄柏的TLC鉴别[2]：将2.3.1中醋酸乙酯萃取后的水层蒸干，甲醇10 mL溶解，过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试液。另取不含黄柏的处方其它药材同法制成黄柏阴性对照液。取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品用甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液。分别吸取供试液各5 μL、阴性对照液5 μL、对照液各2 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展开缸另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，饱和15 min后展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的黄色荧光斑点，阴性对照则无(图2)。
图2 黄柏样品TLC图
2.4 大黄酸含量测定
, 百拇医药
2.4.1 标准曲线绘制：精密称取大黄酸对照品1.3 mg于25 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min，定容至刻度，得标准溶液。精密吸取标准溶液2，4，6，8，10 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的硅胶H板上，以环己烷-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶0.5)为展开剂，展开12 cm，取出，晾干，进行双波长锯齿扫描，λS=430 nm，λR=550 nm，经计算得回归方程Y=121 875.61X+5 472.91，r=0.999 7，线性范围为0.104～0.520 μg。
2.4.2 样品测定：将另一份样品1～样品6分别用氯仿萃取4 次，用量为30，20，20，10 mL，合并氯仿层，回收溶剂至干，残渣用氯仿定溶于5 mL容量瓶中，精密吸取标准溶液2，4μL和各样品定容液5 μL，交叉点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，扫描，以外标二点法计算各样品中大黄酸含量，见表1。
表1 大黄酸含量测定结果 样品编号
, 百拇医药
大黄酸含量(mg/25 mL)
1
0.293 0
2
0.287 2
3
0.287 3
4
0.283 3
5
0.308 1
6
0.276 8
, 百拇医药
2.5 结论：TLC检识和大黄酸含量测定结果表明，加入澄清剂和乙醇沉淀这两种方法，均能保留化积膜群药液中的主要有效成分，达到除去杂质澄清药液的目的，但前者上清液中大黄酸含量大于后者，与未处理的药液比较还是有一定损失，而且随着澄清剂浓度的加大，大黄酸含量损失增多。综合以上各因素，同时考虑各样品的颜色、澄明度，化积膜澄清方法选择样品3 的处理方法，即加入药液体积6%的B组分，2 h后再加入3%的A组分。
3 讨论
ZTC澄清剂作为一种天然高分子，其作用机制是利用电荷和大分子的架桥作用，去除溶液中的鞣质、蛋白质、树胶等杂质，得到稳定、澄清的溶液。本实验结果显示，这种处理方法与醇沉比较，大黄酸含量提高很多。
本实验以大黄酸为定量指标，是由于大黄为处方中的主要药味，测定结果表明大黄酸含量最高，无需水解即可测定，方法简便。TLCS中所用展开剂由文献[2]改进而成，只需展开一次即得满意效果，但最好控制湿度在50%以下。
参考文献
1，张 蕾，王勤国.中成药，1997，19(2)：15
2，中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集.广州：广东科技出版社，1993：23，71
(1999-04-05收稿), http://www.100md.com
单位：北京市中医研究所 100010
关键词：ZTC 1+1；澄清剂；薄层层析；大黄酸；含量测定
中草药000718摘 要 向化积膜提取液中加入不同量的ZTC 1+1 澄清剂，鉴别了上清液的主要成分当归、黄柏，测定了上清液中大黄酸的含量，并与醇沉工艺和未处理的药液进行了比较，筛选出最佳工艺。
化积膜是由黑膏药剂改成的中药复方涂膜剂。在工艺研究时，分别用不同量的ZTC 1+1 澄清剂和乙醇对化积膜群药水煎液进行沉淀处理。采用薄层层析法检识了上清液中的有效成分阿魏酸等，采用薄层扫描法测定了上清液中大黄酸的含量，确定了最佳工艺。
1 仪器与试药
LD5-2A离心机(北京医用离心机厂)，UV-1型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)，CS-9000薄层扫描仪(日本岛津)。
, http://www.100md.com
ZTC-Ⅲ型澄清剂A和B(北京正天成澄清技术有限公司)，化积膜群药液(自制，水煎后浓缩至相对密度为1.01，60 ℃测)，盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、阿魏酸、大黄酸对照品(中国药品生物制品检定所)，硅胶G、硅胶H(青岛海洋化工厂)，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 澄清剂的配制：A组份用水配成1%溶液，先用少量水搅成糊状，然后加入需要的水量，溶胀24 h，搅拌，双层纱布过滤，即得。B组份用1%醋酸配成1%溶液，先用少量1%醋酸溶解B组份并搅成糊状，再加入需要量的1%醋酸，溶胀24 h，双层纱布过滤，即得。
2.2 样品制备：精密吸取化积膜群药液25 mL共12 份，其中8 份在70 ℃水浴5 min后，振摇下分别加入药液体积2%，4%，6%，8%的B组分，保温2 h后振摇下再分别加入药液体积1%，2%，3%，4%的A组分，离开水浴，静置过夜后离心(4 000 r/min，20 min)，倾出上清液，得样品1，2，3，4各两份。
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另两份化积膜群药液直接离心(条件同上)，分取上清液，得样品5两份。
剩余两分化积膜群药液分别加入95%乙醇使含醇量达60%，静置过夜，离心(条件同上)，倾出上清液，回收乙醇，剩余药液为样品6两份。
2.3 TLC检识
2.3.1 阿魏酸的鉴别[1]：取各样品各1 份，分别用盐酸调pH至2～3，用醋酸乙酯萃取2 次，每次20 mL，合并醋酸乙酯层，回收溶剂至干，残渣用醋酸乙酯1 mL溶解，作为供试液。另取处方配比、除当归外的其它药材，同法制成当归阴性对照液。另取阿魏酸对照品，用甲醇制成每1 mL含1 mg的对照品溶液。分别吸取供试液各5 μL、阴性对照液5 μL、对照品溶液2 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的薄层硅胶G板上，以苯-冰醋酸-甲醇(10∶0.3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同的蓝色荧光斑点，阴性对照则无(图1)。
图1 当归样品TLC图, 百拇医药
2.3.2 黄柏的TLC鉴别[2]：将2.3.1中醋酸乙酯萃取后的水层蒸干，甲醇10 mL溶解，过滤，滤液蒸干，残渣用甲醇1 mL溶解，作为供试液。另取不含黄柏的处方其它药材同法制成黄柏阴性对照液。取盐酸小檗碱、盐酸巴马汀对照品用甲醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液。分别吸取供试液各5 μL、阴性对照液5 μL、对照液各2 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液(6∶3∶1.5∶1.5∶0.5)为展开剂，展开缸另一槽加入与展开剂等体积的浓氨试液，饱和15 min后展开，取出，晾干，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的黄色荧光斑点，阴性对照则无(图2)。
图2 黄柏样品TLC图
2.4 大黄酸含量测定
, 百拇医药
2.4.1 标准曲线绘制：精密称取大黄酸对照品1.3 mg于25 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理10 min，定容至刻度，得标准溶液。精密吸取标准溶液2，4，6，8，10 μL，点于同一含0.5% CMC-Na的硅胶H板上，以环己烷-醋酸乙酯-甲酸(15∶5∶0.5)为展开剂，展开12 cm，取出，晾干，进行双波长锯齿扫描，λS=430 nm，λR=550 nm，经计算得回归方程Y=121 875.61X+5 472.91，r=0.999 7，线性范围为0.104～0.520 μg。
2.4.2 样品测定：将另一份样品1～样品6分别用氯仿萃取4 次，用量为30，20，20，10 mL，合并氯仿层，回收溶剂至干，残渣用氯仿定溶于5 mL容量瓶中，精密吸取标准溶液2，4μL和各样品定容液5 μL，交叉点于同一薄层板上，展开，取出，晾干，扫描，以外标二点法计算各样品中大黄酸含量，见表1。
表1 大黄酸含量测定结果 样品编号
, 百拇医药
大黄酸含量(mg/25 mL)
1
0.293 0
2
0.287 2
3
0.287 3
4
0.283 3
5
0.308 1
6
0.276 8
, 百拇医药
2.5 结论：TLC检识和大黄酸含量测定结果表明，加入澄清剂和乙醇沉淀这两种方法，均能保留化积膜群药液中的主要有效成分，达到除去杂质澄清药液的目的，但前者上清液中大黄酸含量大于后者，与未处理的药液比较还是有一定损失，而且随着澄清剂浓度的加大，大黄酸含量损失增多。综合以上各因素，同时考虑各样品的颜色、澄明度，化积膜澄清方法选择样品3 的处理方法，即加入药液体积6%的B组分，2 h后再加入3%的A组分。
3 讨论
ZTC澄清剂作为一种天然高分子，其作用机制是利用电荷和大分子的架桥作用，去除溶液中的鞣质、蛋白质、树胶等杂质，得到稳定、澄清的溶液。本实验结果显示，这种处理方法与醇沉比较，大黄酸含量提高很多。
本实验以大黄酸为定量指标，是由于大黄为处方中的主要药味，测定结果表明大黄酸含量最高，无需水解即可测定，方法简便。TLCS中所用展开剂由文献[2]改进而成，只需展开一次即得满意效果，但最好控制湿度在50%以下。
参考文献
1，张 蕾，王勤国.中成药，1997，19(2)：15
2，中华人民共和国药典中药薄层色谱彩色图集.广州：广东科技出版社，1993：23，71
(1999-04-05收稿), http://www.100md.com