二次灭菌法去除不合格输液中热原的探讨
作者：曾焕初
单位：梧州市工人医院 广西梧州市 543001
关键词：热原；输液；灭菌
华夏医学990261 热原问题一直是困扰着输液生产的难题之一。医院制剂室在生产检测大输液过程中,有时会出现热原阳性的产品。对这个问题,我们探讨采用二次热压灭菌的方法,消除输液中污染的热原,经过检测合格后,用于临床未见出现热原反应,取得肯定的效果,现报道如下。
1 实验材料、仪器和器具
1.1 实验材料 细菌内毒素工作标准品(批号980905,10Eu/支),鲎试剂(批号980913,灵敏度:0.5Eu/ml),超纯水(批号980925,2ml/支)均由厦门鲎试剂厂出品。氯化钠注射液,葡萄糖注射液由本院制剂室提供。
, http://www.100md.com
1.2 仪器和器具
旋涡混合器,恒温水浴箱,净化工作台。具盖小试管,刻度吸管和1ml空安瓿,清洗干净后,置烤箱中200℃烤2h备用。
2 试验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 用超纯水将细菌内毒素工作标准品稀释为1,0.5，0.25，0.125Eu/ml浓度,取每一浓度样品0.1ml,加入鲎试剂0.1ml,轻轻混匀,37℃保温60min,每种浓度做4管。由公式
,计算得本批鲎试剂的灵敏度λ=0.35Eu/ml(1～0.125Eu/ml)符合规定。
2.2 试验方法 用超纯水将细菌内毒素工作标准品稀释10,5,3,2,1,0.5,0.25Eu/ml浓度备用。分别取上述各浓度者1ml于空安瓿中,熔封安瓿,于蒸汽灭菌柜中115℃热压灭菌30min备用。另取稀释品2,1,0.5,0.25,Eu/ml浓度者各1ml分别置于安瓿中,熔封后放置备用。
, 百拇医药
另取无热原的5%葡萄糖注射液(500ml)3瓶分别加入大肠杆菌杂菌后,置温箱中24h,然后每瓶一分为二。其中一份封口,115℃热压灭菌30min备用。另一份放置备用。
2.3 测定与结果 取2.2项中的样本,每个样本平行2支试管,每支试管0.1ml鲎试剂+0.1ml样本液,另做一阳性对照管和一阴性对照管,轻轻混匀,置水浴箱中37℃保温60min,观察结果。结果见表1。
表1 样本的细菌内毒素测定结果 未灭菌样本
115℃ 30min灭菌样本
管号
细菌内毒素浓度
或菌种(Eu/ml)
结 果
, http://www.100md.com
管号
细菌内毒素浓度
或菌种(Eu/ml)
结果
1
2
+
+
10
10
-
-
2
, 百拇医药 1
+
+
11
5
-
-
3
0.5
+
+
12
3
-
, 百拇医药
-
4
0.25
+
+
13
2
-
-
5
大肠杆菌
+
+
14
, 百拇医药
1
-
-
6
杂菌1
+
+
15
0.5
-
-
7
杂菌2
+
, http://www.100md.com
+
16
0.25
-
-
8
阳性管1
+
+
17
大肠杆菌
-
-
9
, 百拇医药
阴性管
+
+
18
杂菌1
-
-
19
杂菌2
-
-
3 热原不合格输液的处理
生产输液过程中,一旦检测到热原项目不合格品,我们采用115℃,30min重复一次灭菌的方法来处理。按中国药典1995版要求,经检测合格后,使用于临床未见发生热原反应。比较的结果见表2。表2 几种输液重复灭菌处理前后的比较 品 名
, http://www.100md.com
批 号
原成品检查
115℃ 30min重复灭菌后检查
细菌内毒素检查
含量%
pH
5-HMF
细菌内毒素检查
含量%
pH
5-HMF
50%葡萄糖液
960730
, 百拇医药
+
+
5.05
3.75
0.178
-
-
4.98
3.68
0.220
生理盐水
960906
+
, 百拇医药
+
0.89
5.35
-
-
0.88
5.37
10%葡萄糖液
960910
+
+
10.10
3.96
, 百拇医药
0.164
-
-
10.08
4.00
0.212
5%葡萄糖液
961010
+
+
4.94
4.30
0.058
, 百拇医药
-
-
4.96
4.28
0.012
生理盐水
961126
+
+
0.87
5.71
-
-
, 百拇医药
0.90
5.68
生理盐水
970708
+
+
0.91
6.39
-
-
0.90
6.30
生理盐水
, 百拇医药
980718
+
+
0.91
5.55
-
-
0.89
5.55
5%葡萄糖液
980811
+
+
, http://www.100md.com
4.99
4.19
0.172
-
-
4.95
4.10
0.240
生理盐水
980909
+
+
0.89
, 百拇医药
5.56
-
-
0.90
5.52
生理盐水
981117
+
+
0.88
5.58
-
-
, 百拇医药 0.88
5.56
4 讨论
4.1 本试验表明,115℃,30min热压灭菌处理,可破坏10Eu/ml浓度以下的细菌内毒素,可破坏人为加入输液中一定量的大肠杆菌、杂菌产生的内毒素。有文献指出[1],G+菌的内毒素主要由蛋白质组成,故耐热性差。由金葡球菌制得的热原,经115℃,30min有97%被破坏。过去认为热原的耐热性很强,不能一概而论。本试验证实了这一论点。
4.2 热压灭菌去除热原的效果和输液中污染热原的量有关。故第一次灭菌后,虽然已破坏了部分热原,但仍有检测到某批输液热原阳性的情况。因此,再次灭菌后,达到了去除输液中热原的目的。
4.3 对热原不合格的输液实行二次灭菌,可消除输液中污染的热原,对输液的主药含量、pH等数据无大的改变,临床上使用也证实无热原反应发生。但对含有葡萄糖的输液采用二次灭菌时,应考虑其分解产物5-HMF含量会升高，把升高值掌握在合格范围内,以免影响质量。
4.4 输液生产还必须严格执行操作规程,最大限度的减少生产过程中各种途径的污染,以确保输液质量。采用二次灭菌法去除不合格输液中的热原,只是一种补救办法。但实践证明, 这种办法在需要时是可行的。 参考文献
1 南京药学院主编.药剂学.北京:人民卫生出版社,1978.226
收稿 1999-03-18, http://www.100md.com
单位：梧州市工人医院 广西梧州市 543001
关键词：热原；输液；灭菌
华夏医学990261 热原问题一直是困扰着输液生产的难题之一。医院制剂室在生产检测大输液过程中,有时会出现热原阳性的产品。对这个问题,我们探讨采用二次热压灭菌的方法,消除输液中污染的热原,经过检测合格后,用于临床未见出现热原反应,取得肯定的效果,现报道如下。
1 实验材料、仪器和器具
1.1 实验材料 细菌内毒素工作标准品(批号980905,10Eu/支),鲎试剂(批号980913,灵敏度:0.5Eu/ml),超纯水(批号980925,2ml/支)均由厦门鲎试剂厂出品。氯化钠注射液,葡萄糖注射液由本院制剂室提供。
, http://www.100md.com
1.2 仪器和器具
旋涡混合器,恒温水浴箱,净化工作台。具盖小试管,刻度吸管和1ml空安瓿,清洗干净后,置烤箱中200℃烤2h备用。
2 试验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度复核 用超纯水将细菌内毒素工作标准品稀释为1,0.5，0.25，0.125Eu/ml浓度,取每一浓度样品0.1ml,加入鲎试剂0.1ml,轻轻混匀,37℃保温60min,每种浓度做4管。由公式
,计算得本批鲎试剂的灵敏度λ=0.35Eu/ml(1～0.125Eu/ml)符合规定。2.2 试验方法 用超纯水将细菌内毒素工作标准品稀释10,5,3,2,1,0.5,0.25Eu/ml浓度备用。分别取上述各浓度者1ml于空安瓿中,熔封安瓿,于蒸汽灭菌柜中115℃热压灭菌30min备用。另取稀释品2,1,0.5,0.25,Eu/ml浓度者各1ml分别置于安瓿中,熔封后放置备用。
, 百拇医药
另取无热原的5%葡萄糖注射液(500ml)3瓶分别加入大肠杆菌杂菌后,置温箱中24h,然后每瓶一分为二。其中一份封口,115℃热压灭菌30min备用。另一份放置备用。
2.3 测定与结果 取2.2项中的样本,每个样本平行2支试管,每支试管0.1ml鲎试剂+0.1ml样本液,另做一阳性对照管和一阴性对照管,轻轻混匀,置水浴箱中37℃保温60min,观察结果。结果见表1。
表1 样本的细菌内毒素测定结果 未灭菌样本
115℃ 30min灭菌样本
管号
细菌内毒素浓度
或菌种(Eu/ml)
结 果
, http://www.100md.com
管号
细菌内毒素浓度
或菌种(Eu/ml)
结果
1
2
+
+
10
10
-
-
2
, 百拇医药 1
+
+
11
5
-
-
3
0.5
+
+
12
3
-
, 百拇医药
-
4
0.25
+
+
13
2
-
-
5
大肠杆菌
+
+
14
, 百拇医药
1
-
-
6
杂菌1
+
+
15
0.5
-
-
7
杂菌2
+
, http://www.100md.com
+
16
0.25
-
-
8
阳性管1
+
+
17
大肠杆菌
-
-
9
, 百拇医药
阴性管
+
+
18
杂菌1
-
-
19
杂菌2
-
-
3 热原不合格输液的处理
生产输液过程中,一旦检测到热原项目不合格品,我们采用115℃,30min重复一次灭菌的方法来处理。按中国药典1995版要求,经检测合格后,使用于临床未见发生热原反应。比较的结果见表2。表2 几种输液重复灭菌处理前后的比较 品 名
, http://www.100md.com
批 号
原成品检查
115℃ 30min重复灭菌后检查
细菌内毒素检查
含量%
pH
5-HMF
细菌内毒素检查
含量%
pH
5-HMF
50%葡萄糖液
960730
, 百拇医药
+
+
5.05
3.75
0.178
-
-
4.98
3.68
0.220
生理盐水
960906
+
, 百拇医药
+
0.89
5.35
-
-
0.88
5.37
10%葡萄糖液
960910
+
+
10.10
3.96
, 百拇医药
0.164
-
-
10.08
4.00
0.212
5%葡萄糖液
961010
+
+
4.94
4.30
0.058
, 百拇医药
-
-
4.96
4.28
0.012
生理盐水
961126
+
+
0.87
5.71
-
-
, 百拇医药
0.90
5.68
生理盐水
970708
+
+
0.91
6.39
-
-
0.90
6.30
生理盐水
, 百拇医药
980718
+
+
0.91
5.55
-
-
0.89
5.55
5%葡萄糖液
980811
+
+
, http://www.100md.com
4.99
4.19
0.172
-
-
4.95
4.10
0.240
生理盐水
980909
+
+
0.89
, 百拇医药
5.56
-
-
0.90
5.52
生理盐水
981117
+
+
0.88
5.58
-
-
, 百拇医药 0.88
5.56
4 讨论
4.1 本试验表明,115℃,30min热压灭菌处理,可破坏10Eu/ml浓度以下的细菌内毒素,可破坏人为加入输液中一定量的大肠杆菌、杂菌产生的内毒素。有文献指出[1],G+菌的内毒素主要由蛋白质组成,故耐热性差。由金葡球菌制得的热原,经115℃,30min有97%被破坏。过去认为热原的耐热性很强,不能一概而论。本试验证实了这一论点。
4.2 热压灭菌去除热原的效果和输液中污染热原的量有关。故第一次灭菌后,虽然已破坏了部分热原,但仍有检测到某批输液热原阳性的情况。因此,再次灭菌后,达到了去除输液中热原的目的。
4.3 对热原不合格的输液实行二次灭菌,可消除输液中污染的热原,对输液的主药含量、pH等数据无大的改变,临床上使用也证实无热原反应发生。但对含有葡萄糖的输液采用二次灭菌时,应考虑其分解产物5-HMF含量会升高，把升高值掌握在合格范围内,以免影响质量。
4.4 输液生产还必须严格执行操作规程,最大限度的减少生产过程中各种途径的污染,以确保输液质量。采用二次灭菌法去除不合格输液中的热原,只是一种补救办法。但实践证明, 这种办法在需要时是可行的。 参考文献
1 南京药学院主编.药剂学.北京:人民卫生出版社,1978.226
收稿 1999-03-18, http://www.100md.com