龙黄合剂抑Hp实验及临床应用
作者：韩玉山 齐伯贞 黄 培 张淑琴 郎作环
单位：
关键词：十二指肠溃疡/药物疗法；螺杆菌感染/药物疗法；螺杆菌，幽门/药物作用；大黄/治疗应用；龙胆/治疗应用
华人消化杂志980928Experimental and clinical study of Long-Huang mixture on the inhibition of Helicobacter pylori
HAN Yu-Shan, QI Bo-Zhen, HUANG Pei, ZHANG Shu-Qin and LANG Zuo-Huan
Department of Gastroenterology, Tianjin Second Central Hospital, Tianjin 300120, China
, http://www.100md.com
Subject headings duodenal ulcer/drug therapy; Helicobacter infections/drug therapy; Helicobacter pylori/drug effects; Rheum Palmatum/therapeutic use; Gentiana Scabra/therapeutic use
Abstract
AIM To investigate the extrasomatic inhibition of Long-Huang mixture (mixture gentianae rheum, MGR) on Helicobacter pylori (Hp) and its clinical effect on Hp-positive duodenal ulcer patients.
METHODS The paper diffusion and the agar dilution methods were used in the extrasomatic inhibition test of Hp with MGR alone and in combination with other drugs. Duodenal ulcer patients, identified as Hp-positive, were randomized into 3 groups, i.e. the MGR group (group A, n=42), the ranitidine + furazolidone group (group B, n=40) and the MGR +ranitidine + furazolidone group (group C, n=46) to observe their Hp eradication rate, ulcer healing rate, pathological improvement rate of the gastric antrum mucosa and the incidences of side effects.
, 百拇医药
RESULTS MGR had a rather better extrasomatic inhibition effect on Hp. In group C the Hp eradication rate was 84.8%; the pathological improvement rate of the gastric autrum mucosa was 65.3%, while the incidences of side effects was 13.0%; all of which were better than those in group A (45.2%， 37.5%，57.1%，7.1%) and group B (37.5%，50.0%，37.5%，19.5%). Statistical analysis revealed that there were significant or highly significant difference in the results (P<0.05 or <0.01). The ulcer healing rate was 100.0% (group C)， 90.0% (group A) and 90.5% (group B).
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CONCLUSION MGR has a better inhibition effect on Hp. MGR + ranitidine + furazolidone can improve the eradication rate, reduce ulcer recurrence and side effects. Because of its low cost, MGR suits the China market and worthy of recommendation for clinical use.
摘 要
目的 探讨龙黄合剂体外抑Hp作用，及对Hp阳性十二指肠溃疡的疗效.
方法 采用纸片扩散法和琼脂稀释法，对龙黄合剂中单味中药及复合制剂进行体外抑Hp实验，并与部分中成药抑Hp效果对比. 将128例Hp阳性十二指肠溃疡随机分成龙黄合剂组(A组)，雷尼替丁+呋喃唑酮组(B组)及龙黄合剂+呋喃唑酮+雷尼替丁(C组)3组进行治疗，观察各组溃疡愈合率，复发率,Hp根除率，胃窦粘膜病理好转率，药物副反应发生率.
, 百拇医药
结果 龙黄合剂有较好体外抑Hp作用. C组Hp根除率为84.8%，溃疡1?a复发率13.5%，胃窦粘膜炎症病理好转率为65.3%，副反应发生率为13.0%，均优于A组(45.2%，37.5%，57.1%，7.1%)及B组(37.5%，50.0%，37.5%，19.5%)，统计学处理有显著或极显著差异(P<0.05或0.01). 3组溃疡愈合有效率分别为C组100.0%，A组90.0%，B组90.5%，统计学处理无显著差异(P>0.05).
结论 体外试验证明龙黄合剂对Hp有较好抑制作用，龙黄合剂+雷尼替丁+呋喃唑酮用于Hp阳性的十二指肠溃疡治疗，可提高Hp根除率，减少复发率，副作用小，价格低廉，服用方便，适合国情，值得推广.
0 引言
龙黄合剂为我院研制的以大黄为君药的制剂，经体外抑Hp实验证实其对Hp有较强杀灭作用. 在临床和西药合用可增强抑酸及杀灭Hp作用，从而提高十二指肠溃疡愈合率，降低溃疡复发率. 对伴发的慢性胃窦炎的粘膜有较好修复作用，是值得进一步开发研究的中西医结合治疗Hp阳性十二指肠溃疡及伴发胃窦炎的有效方法. 现将体外抑Hp实验及临床应用情况报道如下.
, 百拇医药
1 实验研究
1.1 材料 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)菌株：内镜检查时，将所取尿素酶试验Hp阳性之组织块立即接种于改良Skirrow平坦培养基上(100?mL/?L羊血Skirrow琼脂培养基)，在微氧(50?mL/?L O2,100?mL/?L CO2，850?mL/?L N2)环境下置于35℃恒温箱培养3?d～4?d；待培养基上出现透明针尖样浸润，稍隆起园形菌落后进行菌种鉴定，包括：菌落涂片，革兰染色阴性；光镜下查见海鸥状/?豆点状/?S状弯曲/?短杆菌；生物化学检测葡萄糖试验阴性，尿素酶试验阳性，触酶试验阳性，氧化酶试验阳性，醋酸铅纸片试验H2S阴性，硝酸盐还原试验阴性；于需氧/?厌氧条件下培养均不见繁殖，生长，即肯定为Hp备用. 龙黄合剂及对照液：①龙黄合剂，包括大黄300?g，龙胆100?g，白芨150?g，元胡100?g，槟榔150?g，甘草100?g，其中大黄照流浸膏项下的渗漉法(1995中国药典规定)用600?mL/?L乙醇作溶剂、浸渍24?h后进行渗漉，收集初漉液备用，续漉液浓缩后并入初漉液中，回收乙醇后备用；其他五味药加水煎煮2次(第1次2?h，第2次1.5?h)，将2次煎液合并、滤过、滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，与大黄渗漉液合并，用400?g/?L氢氧化钠溶液将pH 调节至7.0，加水至1000?mL，放置24?h，取上清液滤过、灌装、压盖、灭菌即制成棕色液体备用(天津医科大学临床药理基地临床药理研究室对龙黄合剂进行急性毒性研究结论：小鼠口服LD50>128?mg/?kg，表明该制剂无毒性，又经天津市药品检验所检测其相对密度、最低装量、微生物限度及活螨等项指标均符合规定)；②对照液用氯化钠加水装于无菌瓶中，流通蒸气灭菌制成50?g/?L NaCl备用；龙黄合剂及50?g/?L NaCl均按1∶1比例配制(即1?mL药液中分别含龙黄合剂中药材及氯化钠均为1?g. 试验用药敏纸片：选用定性滤纸直径6.5?mm，厚1?mm，吸液量30?μL/?片.
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1.2 方法 药敏试验：将培养成的Hp制成1个麦氏单位浓度悬液，均匀涂布在培养基上，再将含不同药物的纸片分别贴于该培养基上，在微氧环境下培养3?d～4?d后，取出培养基，测量其抑菌环直径；最小抑菌浓度(MIC)试验：采用固体稀释法，将上述药敏试验用药物稀释成不同浓度制成培养基，再将1个麦氏单位的Hp悬液接种于培养基上，在35℃恒温箱中微氧环境下培养3?d～4?d，观察Hp生长情况，计算最低抑菌浓度.
1.3 结果 体外抑菌试验结果证明，龙黄合剂醇提液及水提液对Hp抑菌环最大，分别为26.5?mm及23.0?mm；龙黄合剂中除白芨外其他五味中药也有较好的抑制Hp生长作用(表1)而50?g/?L氯化钠对Hp生长则无任何抑制作用.
表1 龙黄合剂中单味中药对Hp体外抑菌情况
(mm) 中药
醇提液抑菌环直径
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水提液抑菌环直径
大黄
24.0
19.0
元胡
23.0
17.0
甘草
19.0
17.0
龙胆
14.0
10.5
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槟榔
15.0
9.0
白芨
0.0
0.0
另外还用龙黄合剂醇提液，与市场上出售的一些中成药做了体外抑Hp试验比较. 结果证明，龙黄合剂体外抑菌试验明显优于其他一些中成药(表2).
表2 龙黄合剂与一些中成药对Hp体外抑菌作用比较
(mm) 药名
抑菌环直径
龙黄合剂
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26.5
虚寒胃痛冲剂
11.5
三九胃泰
11.0
气滞胃痛冲剂
10.5
四逆散
7.0
试验结果还显示，醇提龙黄合剂中之大黄、元胡、甘草、龙胆、槟榔最小抑菌浓度分别为2.5，5.0，5.0，10.0，20.0?g/?L，说明龙黄合剂单味药中大黄在体外对Hp抑制作用最强，即所需抑菌浓度最小.
2 临床研究
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2.1 对象 本研究选择经内镜检查证实的A期十二指肠溃疡患者128例，其中男104例，年龄18岁～70岁，中位年龄40岁，溃疡直径5?mm～15?mm，进入本研究组前2?wk内均未用抗Hp治疗药物，全部病例经各种检查证实无肝、胆、胰疾病，均未服用过非类固醇抗炎药；于内镜检查时，均于胃窦部距幽门口3?cm处，胃体大弯中部各取胃粘膜一块，经快速尿素酶法及病理切片MB染色法检测Hp均为阳性；并于胃窦大、小弯及前后壁各取胃粘膜一块做病理组织学检查证实均伴发慢性胃窦炎.
2.2 方法 将128例随机分为3组，经统计学处理3组的性别、年龄、病程、溃疡及伴发胃窦炎情况无差异性. A组：42例，服龙黄合剂，10?mL,3次/?d，饭前服，连服4?wk. B组：40例，雷尼替丁，300?mg，1次/?d，睡前服，连服4?wk；呋喃唑酮，0.1?g，3次/?d，饭后服，连服2?wk. C组：46例，口服龙黄合剂，雷尼替丁，呋喃唑酮，用法、用量及时间同前，疗程中停服其他任何药物，治疗前及停药后分别查血、尿常规、ALT、BUN、Gr并观察记录疗程中各种副反应(将副反应分为3级，Ⅰ级，副反应轻，不影响服药及工作，Ⅱ级：有副反应，不影响继续服药但对工作有一定影响，Ⅲ级：副反应较重，必须全休或停药)，疗程结束后立即做内镜观察溃疡愈合情况，同时于胃窦部取活检观察病理组织学变化，另外于停药4?wk后再做内镜，取胃粘膜用快速尿素酶法及切片MB染色法检测Hp根除情况，对81例患者(A组24例，B组20例，C组37例)于停药1?a后进行随访，观察溃疡复发情况.
, 百拇医药
统计学处理 采用两样本率比较的χ2检验，检验标准均取(P<0.05)为显著性差异.
2.3 结果 判定标准：①十二指肠溃疡：治愈：内镜检查直观所见原溃疡消失，即进入S期；好转：仍可见有溃疡，但其面积缩小>50%；无效：仍可见溃疡但其面积缩小<50%/?内镜直观与治疗前无变化. ②慢性胃窦炎：以胃粘膜活检病理组织学检查固有膜内有无中性白细胞浸润分为活动性炎症和非活动性炎症及粘膜层内炎细胞浸润程度分为轻、中、重3级，治疗前后变化为标准，分为好转：疗后由活动性转为非活动性/?胃窦炎症减轻一级；无效：上述两种病理组织学检查均无变化. ③Hp根除：经治疗停药4?wk后复查Hp，两种方法均为阴性者定为根除. 十二指肠溃疡疗效：C组治疗后溃疡愈合率优于A组及B组，但经统计学处理无显著差异(P>0.05，表3).
表3 龙黄合剂治疗十二指肠溃疡的疗效比较
分组
, 百拇医药
治 愈
好 转
无 效
n
%
n
%
n
%
A组
28
66.7
10
23.8
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4
9.5
B组
27
67.5
9
22.5
4
10.0
C组
40
87.0
6
13.0
, 百拇医药
0
0.0
P>0.05.
慢性胃窦炎胃粘膜治疗后病理检查组织学变化：以C组治疗后好转者最多，A组好转者也较多，A及C组疗效均优于B组(P<0.01，表4).
表4 龙黄合剂治疗慢性胃窦炎的疗效比较
分组
好 转
无 效
n
%
n
, 百拇医药 %
A组
24
57.1
18
42.9
B组
15
37.5
25
62.5
C组
38
82.6
, 百拇医药
8
17.4
P<0.01.
Hp根除率：A组为45.2%(19/?24)，B组为37.5%(15/?40)，C组为84.8%(39/?46)；C组根除率明显优于A组及B组(P<0.01). 停药1?a后溃疡复发率：A组37.5%(9/?24)，B组50.0%(10/?20)，C组13.5%(5/?37)，C组明显低于A组及B组(P<0.05及0.01). 副反应发生率：A组为7.1%(3/?42)，B组19.5%(8/?41)，C组为13.0%(6/?46)，3组相比无明显差异(P>0.05)；主要副作用为腹泻6例，便秘2例，恶心呕吐8例，皮疹1例，在17例出现副反应者中，Ⅰ级者12例，Ⅱ级者4例，Ⅲ级者仅1例，发生Ⅲ级副反应之1例为B组患者，表现为较重皮疹.
3 讨论
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目前公认Hp是慢性活动性胃炎的病原菌，是消化性溃疡的重要致病因子，根除Hp与慢性活动性胃炎、消化性溃疡的疗效及复发密切相关. 进而提出了各种各样的西药联合治疗方案，其中有些治疗方案对Hp的根除率虽可达80%～90%，但价格昂贵，不完全适合我国国情，难以推广；与此同时我国广大中医药工作者也对Hp及相关性疾病，依据中医药理论进行了多方面研究，如对Hp有抑制作用的中药筛选、症型与Hp的关系等，并按辨证论治的理论对Hp相关性胃炎、消化性溃疡提出了不少治疗方案，虽取得了一定效果，但对Hp的根除率尚不够理想.
多年来，我们根据中、西医理论，特别把在体外有抑制Hp作用的中药制成龙黄合剂，合用西药治疗Hp阳性的消化性溃疡、慢性胃炎，取得了较理想疗效，且价格低廉，广大患者乐于接受；为进一步证实和探讨龙黄合剂的治疗效果及其作用机制，我们对其做了进一步实验研究与临床应用研究. 结果证明，龙黄合剂中大黄、元胡、甘草对抑制Hp作用最好，龙胆、槟榔次之，白芨则无作用；龙黄合剂优于其中任何单味中药的抑Hp作用，并优于市场上出售的虚寒胃痛冲剂、三九胃泰、气滞胃痛冲剂、四逆散等中成药抑Hp效果；临床上应用其治疗Hp阳性十二指肠溃疡的Hp根除率也显示：单服龙黄合剂者及龙黄合剂加西药者均高于单用西药治疗者；龙黄合剂+西药组治疗十二指肠溃疡愈合率似高于单服龙黄合剂组及单服西药组，虽经统计学处理差别不显著(P>0.05)，但停药1?a后溃疡之复发率显示，龙黄合剂+西药组显著低于其他两组；尤其胃窦粘膜炎症病理好转率明显高于服西药组；这些研究结果科学地证实了我们多年采用龙黄合剂+西药的良好效果是可靠的，有根据的.
, 百拇医药
根据上述结果，我们认为龙黄合剂所以对Hp阳性十二指肠溃疡及其伴发的慢性胃窦炎有较好的疗效，首先是由于其配伍合理，方中大黄为君药，具有清热解毒、活血化瘀、健脾利湿、消积利气之作用；龙胆为臣药，可清热利湿、疏利肝胆、健胃消胀；槟榔、元胡还有活血化瘀理气止痛之作用，白芨具有止血生肌之力共为佐药，甘草甘平解痉止痛可调和诸药，为其使药. 如此配伍之合剂体现胃腑以降为和，以通为用的治疗原则，主要对血瘀症有较好疗效，正与危北海所提出的“根据当今理论血瘀症是脏腑失调结果”观点相一致，虽然当前中医对消化性溃疡、慢性胃炎辨证分型尚不十分统一，但在临床实践中我们发现：消化性溃疡活动期，都伴有活动性胃炎，内镜下胃窦粘膜多见充血、出血点、渗血、糜烂、溃疡覆盖厚苔，周边充血水肿，表面可有渗血及血痂，按中医辨证属“热症”表现，这种“热症”可兼血瘀、脾虚、气滞湿阻；粘膜暗红或苍白、粘膜增生、肠化所致的粘膜隆起及粗糙颗粒感，血流变学改变等这些均属于血瘀症. Hp阳性的慢性胃炎，病理检查多为固有膜中性白细胞浸润的活动性胃炎. 这些又说明龙黄合剂对绝大多数消化性溃疡及伴有的慢性活动性胃炎的治疗是符合中医辨证施治原则的，特别是在本合剂中重用大黄以其为君药，而大黄除在抑菌实验中有抑制Hp作用外，还可清热燥湿、活血化瘀、健脾益胃、消积导滞、泄中寓补、推陈出新、不忌虚证. 这就使本方剂治疗不仅限于“热症”、“血瘀”，而对中医辨证属于其他类型的消化性溃疡、慢性活动性胃炎也有一定作用；综上所述配伍合理，符合辨症施治原则是疗效好的重要原因. 本研究证明，无论是龙黄合剂的单味药及水提，醇提龙黄合剂在体外都有较强的抑制Hp作用，和西药合并使用可增强单用西药的抑酸作用，并提高Hp根除率，减低了十二指肠溃疡复发率；尤其是可提高单纯用西药很难得到的胃窦炎症病理好转率，而单纯西药联合用药虽抗Hp效果良好，但组织形态修复较慢，症状缓解欠佳；以中药为主适当配合西药，可使Hp相关疾病逆转率增高，复发减少且减少联合用药副作用[1]. 这可能是龙黄合剂+西药比单用龙黄合剂及单用西药好的原因.
, 百拇医药
根据现代药理学研究，本中西医结合方法治疗Hp阳性的十二指肠溃疡及慢性胃炎的主要作用机制可能为：①Hp根除及抗炎作用，Hp的根除促进溃疡愈合，减低了复发率，利于炎的消除[2，3]. ②增强粘膜保护作用，促进胃粘膜PGE2生成[4，5]，促进胃粘膜血流及粘液分泌，改善局部微循环，抑制胃酸分泌及类脂质蓄积，降低游离酸及蛋白酶作用，加强胃粘膜屏障作用. ③通过双相调节作用[5]抑制Hp感染局部的免疫反应，防止Hp对粘膜损伤造成炎症及已形成炎症继续加重；同时可提高整体免疫功能，促进溃疡愈合及炎症好转. ④促进胃肠功能协调[4]，利于胃酸及胃蛋白酶之消除，消除腹胀，增进食欲，改善临床症状. ⑤抗氧化作用，防止氧自由基对胃粘膜损害[4]. 总之，龙黄合剂合用呋喃唑酮及雷尼替丁服用简便，副作用小，价格便宜适合我国国情，是非常值得推广的一种方法.
4 参考文献
, http://www.100md.com
1 张琳，彭国珍，郑晓光，李大健. 幽门螺杆菌相关疾病100例研究. 新消化病学杂志，1995；3(特刊3号)：14
2 Axon AT. Helicobacter pylori therapy: effect on peptic ulcer disease. J Gastroenterol Hepatol, 1991;6(2):131-137
3 贾博琦. 关于胃、十二指肠溃疡病时幽门螺杆菌的根除. 中华消化杂志，1995；15(增刊)：1-2
4 胡文启，杨成春. 中药治疗慢性胃炎作用机理研究进展. 新消化病学杂志，1996；4(4)：222-223
5 宋希仁. 大黄治疗幽门弯曲菌阳性的消化性溃疡的临床观察. 中医杂志，1991；32(5)：25-27, 百拇医药
单位：
关键词：十二指肠溃疡/药物疗法；螺杆菌感染/药物疗法；螺杆菌，幽门/药物作用；大黄/治疗应用；龙胆/治疗应用
华人消化杂志980928Experimental and clinical study of Long-Huang mixture on the inhibition of Helicobacter pylori
HAN Yu-Shan, QI Bo-Zhen, HUANG Pei, ZHANG Shu-Qin and LANG Zuo-Huan
Department of Gastroenterology, Tianjin Second Central Hospital, Tianjin 300120, China
, http://www.100md.com
Subject headings duodenal ulcer/drug therapy; Helicobacter infections/drug therapy; Helicobacter pylori/drug effects; Rheum Palmatum/therapeutic use; Gentiana Scabra/therapeutic use
Abstract
AIM To investigate the extrasomatic inhibition of Long-Huang mixture (mixture gentianae rheum, MGR) on Helicobacter pylori (Hp) and its clinical effect on Hp-positive duodenal ulcer patients.
METHODS The paper diffusion and the agar dilution methods were used in the extrasomatic inhibition test of Hp with MGR alone and in combination with other drugs. Duodenal ulcer patients, identified as Hp-positive, were randomized into 3 groups, i.e. the MGR group (group A, n=42), the ranitidine + furazolidone group (group B, n=40) and the MGR +ranitidine + furazolidone group (group C, n=46) to observe their Hp eradication rate, ulcer healing rate, pathological improvement rate of the gastric antrum mucosa and the incidences of side effects.
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RESULTS MGR had a rather better extrasomatic inhibition effect on Hp. In group C the Hp eradication rate was 84.8%; the pathological improvement rate of the gastric autrum mucosa was 65.3%, while the incidences of side effects was 13.0%; all of which were better than those in group A (45.2%， 37.5%，57.1%，7.1%) and group B (37.5%，50.0%，37.5%，19.5%). Statistical analysis revealed that there were significant or highly significant difference in the results (P<0.05 or <0.01). The ulcer healing rate was 100.0% (group C)， 90.0% (group A) and 90.5% (group B).
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CONCLUSION MGR has a better inhibition effect on Hp. MGR + ranitidine + furazolidone can improve the eradication rate, reduce ulcer recurrence and side effects. Because of its low cost, MGR suits the China market and worthy of recommendation for clinical use.
摘 要
目的 探讨龙黄合剂体外抑Hp作用，及对Hp阳性十二指肠溃疡的疗效.
方法 采用纸片扩散法和琼脂稀释法，对龙黄合剂中单味中药及复合制剂进行体外抑Hp实验，并与部分中成药抑Hp效果对比. 将128例Hp阳性十二指肠溃疡随机分成龙黄合剂组(A组)，雷尼替丁+呋喃唑酮组(B组)及龙黄合剂+呋喃唑酮+雷尼替丁(C组)3组进行治疗，观察各组溃疡愈合率，复发率,Hp根除率，胃窦粘膜病理好转率，药物副反应发生率.
, 百拇医药
结果 龙黄合剂有较好体外抑Hp作用. C组Hp根除率为84.8%，溃疡1?a复发率13.5%，胃窦粘膜炎症病理好转率为65.3%，副反应发生率为13.0%，均优于A组(45.2%，37.5%，57.1%，7.1%)及B组(37.5%，50.0%，37.5%，19.5%)，统计学处理有显著或极显著差异(P<0.05或0.01). 3组溃疡愈合有效率分别为C组100.0%，A组90.0%，B组90.5%，统计学处理无显著差异(P>0.05).
结论 体外试验证明龙黄合剂对Hp有较好抑制作用，龙黄合剂+雷尼替丁+呋喃唑酮用于Hp阳性的十二指肠溃疡治疗，可提高Hp根除率，减少复发率，副作用小，价格低廉，服用方便，适合国情，值得推广.
0 引言
龙黄合剂为我院研制的以大黄为君药的制剂，经体外抑Hp实验证实其对Hp有较强杀灭作用. 在临床和西药合用可增强抑酸及杀灭Hp作用，从而提高十二指肠溃疡愈合率，降低溃疡复发率. 对伴发的慢性胃窦炎的粘膜有较好修复作用，是值得进一步开发研究的中西医结合治疗Hp阳性十二指肠溃疡及伴发胃窦炎的有效方法. 现将体外抑Hp实验及临床应用情况报道如下.
, 百拇医药
1 实验研究
1.1 材料 幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, Hp)菌株：内镜检查时，将所取尿素酶试验Hp阳性之组织块立即接种于改良Skirrow平坦培养基上(100?mL/?L羊血Skirrow琼脂培养基)，在微氧(50?mL/?L O2,100?mL/?L CO2，850?mL/?L N2)环境下置于35℃恒温箱培养3?d～4?d；待培养基上出现透明针尖样浸润，稍隆起园形菌落后进行菌种鉴定，包括：菌落涂片，革兰染色阴性；光镜下查见海鸥状/?豆点状/?S状弯曲/?短杆菌；生物化学检测葡萄糖试验阴性，尿素酶试验阳性，触酶试验阳性，氧化酶试验阳性，醋酸铅纸片试验H2S阴性，硝酸盐还原试验阴性；于需氧/?厌氧条件下培养均不见繁殖，生长，即肯定为Hp备用. 龙黄合剂及对照液：①龙黄合剂，包括大黄300?g，龙胆100?g，白芨150?g，元胡100?g，槟榔150?g，甘草100?g，其中大黄照流浸膏项下的渗漉法(1995中国药典规定)用600?mL/?L乙醇作溶剂、浸渍24?h后进行渗漉，收集初漉液备用，续漉液浓缩后并入初漉液中，回收乙醇后备用；其他五味药加水煎煮2次(第1次2?h，第2次1.5?h)，将2次煎液合并、滤过、滤液减压浓缩至相对密度为1.15(60℃)的清膏，与大黄渗漉液合并，用400?g/?L氢氧化钠溶液将pH 调节至7.0，加水至1000?mL，放置24?h，取上清液滤过、灌装、压盖、灭菌即制成棕色液体备用(天津医科大学临床药理基地临床药理研究室对龙黄合剂进行急性毒性研究结论：小鼠口服LD50>128?mg/?kg，表明该制剂无毒性，又经天津市药品检验所检测其相对密度、最低装量、微生物限度及活螨等项指标均符合规定)；②对照液用氯化钠加水装于无菌瓶中，流通蒸气灭菌制成50?g/?L NaCl备用；龙黄合剂及50?g/?L NaCl均按1∶1比例配制(即1?mL药液中分别含龙黄合剂中药材及氯化钠均为1?g. 试验用药敏纸片：选用定性滤纸直径6.5?mm，厚1?mm，吸液量30?μL/?片.
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1.2 方法 药敏试验：将培养成的Hp制成1个麦氏单位浓度悬液，均匀涂布在培养基上，再将含不同药物的纸片分别贴于该培养基上，在微氧环境下培养3?d～4?d后，取出培养基，测量其抑菌环直径；最小抑菌浓度(MIC)试验：采用固体稀释法，将上述药敏试验用药物稀释成不同浓度制成培养基，再将1个麦氏单位的Hp悬液接种于培养基上，在35℃恒温箱中微氧环境下培养3?d～4?d，观察Hp生长情况，计算最低抑菌浓度.
1.3 结果 体外抑菌试验结果证明，龙黄合剂醇提液及水提液对Hp抑菌环最大，分别为26.5?mm及23.0?mm；龙黄合剂中除白芨外其他五味中药也有较好的抑制Hp生长作用(表1)而50?g/?L氯化钠对Hp生长则无任何抑制作用.
表1 龙黄合剂中单味中药对Hp体外抑菌情况
(mm) 中药
醇提液抑菌环直径
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水提液抑菌环直径
大黄
24.0
19.0
元胡
23.0
17.0
甘草
19.0
17.0
龙胆
14.0
10.5
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槟榔
15.0
9.0
白芨
0.0
0.0
另外还用龙黄合剂醇提液，与市场上出售的一些中成药做了体外抑Hp试验比较. 结果证明，龙黄合剂体外抑菌试验明显优于其他一些中成药(表2).
表2 龙黄合剂与一些中成药对Hp体外抑菌作用比较
(mm) 药名
抑菌环直径
龙黄合剂
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26.5
虚寒胃痛冲剂
11.5
三九胃泰
11.0
气滞胃痛冲剂
10.5
四逆散
7.0
试验结果还显示，醇提龙黄合剂中之大黄、元胡、甘草、龙胆、槟榔最小抑菌浓度分别为2.5，5.0，5.0，10.0，20.0?g/?L，说明龙黄合剂单味药中大黄在体外对Hp抑制作用最强，即所需抑菌浓度最小.
2 临床研究
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2.1 对象 本研究选择经内镜检查证实的A期十二指肠溃疡患者128例，其中男104例，年龄18岁～70岁，中位年龄40岁，溃疡直径5?mm～15?mm，进入本研究组前2?wk内均未用抗Hp治疗药物，全部病例经各种检查证实无肝、胆、胰疾病，均未服用过非类固醇抗炎药；于内镜检查时，均于胃窦部距幽门口3?cm处，胃体大弯中部各取胃粘膜一块，经快速尿素酶法及病理切片MB染色法检测Hp均为阳性；并于胃窦大、小弯及前后壁各取胃粘膜一块做病理组织学检查证实均伴发慢性胃窦炎.
2.2 方法 将128例随机分为3组，经统计学处理3组的性别、年龄、病程、溃疡及伴发胃窦炎情况无差异性. A组：42例，服龙黄合剂，10?mL,3次/?d，饭前服，连服4?wk. B组：40例，雷尼替丁，300?mg，1次/?d，睡前服，连服4?wk；呋喃唑酮，0.1?g，3次/?d，饭后服，连服2?wk. C组：46例，口服龙黄合剂，雷尼替丁，呋喃唑酮，用法、用量及时间同前，疗程中停服其他任何药物，治疗前及停药后分别查血、尿常规、ALT、BUN、Gr并观察记录疗程中各种副反应(将副反应分为3级，Ⅰ级，副反应轻，不影响服药及工作，Ⅱ级：有副反应，不影响继续服药但对工作有一定影响，Ⅲ级：副反应较重，必须全休或停药)，疗程结束后立即做内镜观察溃疡愈合情况，同时于胃窦部取活检观察病理组织学变化，另外于停药4?wk后再做内镜，取胃粘膜用快速尿素酶法及切片MB染色法检测Hp根除情况，对81例患者(A组24例，B组20例，C组37例)于停药1?a后进行随访，观察溃疡复发情况.
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统计学处理 采用两样本率比较的χ2检验，检验标准均取(P<0.05)为显著性差异.
2.3 结果 判定标准：①十二指肠溃疡：治愈：内镜检查直观所见原溃疡消失，即进入S期；好转：仍可见有溃疡，但其面积缩小>50%；无效：仍可见溃疡但其面积缩小<50%/?内镜直观与治疗前无变化. ②慢性胃窦炎：以胃粘膜活检病理组织学检查固有膜内有无中性白细胞浸润分为活动性炎症和非活动性炎症及粘膜层内炎细胞浸润程度分为轻、中、重3级，治疗前后变化为标准，分为好转：疗后由活动性转为非活动性/?胃窦炎症减轻一级；无效：上述两种病理组织学检查均无变化. ③Hp根除：经治疗停药4?wk后复查Hp，两种方法均为阴性者定为根除. 十二指肠溃疡疗效：C组治疗后溃疡愈合率优于A组及B组，但经统计学处理无显著差异(P>0.05，表3).
表3 龙黄合剂治疗十二指肠溃疡的疗效比较
分组
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治 愈
好 转
无 效
n
%
n
%
n
%
A组
28
66.7
10
23.8
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4
9.5
B组
27
67.5
9
22.5
4
10.0
C组
40
87.0
6
13.0
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0
0.0
P>0.05.
慢性胃窦炎胃粘膜治疗后病理检查组织学变化：以C组治疗后好转者最多，A组好转者也较多，A及C组疗效均优于B组(P<0.01，表4).
表4 龙黄合剂治疗慢性胃窦炎的疗效比较
分组
好 转
无 效
n
%
n
, 百拇医药 %
A组
24
57.1
18
42.9
B组
15
37.5
25
62.5
C组
38
82.6
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8
17.4
P<0.01.
Hp根除率：A组为45.2%(19/?24)，B组为37.5%(15/?40)，C组为84.8%(39/?46)；C组根除率明显优于A组及B组(P<0.01). 停药1?a后溃疡复发率：A组37.5%(9/?24)，B组50.0%(10/?20)，C组13.5%(5/?37)，C组明显低于A组及B组(P<0.05及0.01). 副反应发生率：A组为7.1%(3/?42)，B组19.5%(8/?41)，C组为13.0%(6/?46)，3组相比无明显差异(P>0.05)；主要副作用为腹泻6例，便秘2例，恶心呕吐8例，皮疹1例，在17例出现副反应者中，Ⅰ级者12例，Ⅱ级者4例，Ⅲ级者仅1例，发生Ⅲ级副反应之1例为B组患者，表现为较重皮疹.
3 讨论
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目前公认Hp是慢性活动性胃炎的病原菌，是消化性溃疡的重要致病因子，根除Hp与慢性活动性胃炎、消化性溃疡的疗效及复发密切相关. 进而提出了各种各样的西药联合治疗方案，其中有些治疗方案对Hp的根除率虽可达80%～90%，但价格昂贵，不完全适合我国国情，难以推广；与此同时我国广大中医药工作者也对Hp及相关性疾病，依据中医药理论进行了多方面研究，如对Hp有抑制作用的中药筛选、症型与Hp的关系等，并按辨证论治的理论对Hp相关性胃炎、消化性溃疡提出了不少治疗方案，虽取得了一定效果，但对Hp的根除率尚不够理想.
多年来，我们根据中、西医理论，特别把在体外有抑制Hp作用的中药制成龙黄合剂，合用西药治疗Hp阳性的消化性溃疡、慢性胃炎，取得了较理想疗效，且价格低廉，广大患者乐于接受；为进一步证实和探讨龙黄合剂的治疗效果及其作用机制，我们对其做了进一步实验研究与临床应用研究. 结果证明，龙黄合剂中大黄、元胡、甘草对抑制Hp作用最好，龙胆、槟榔次之，白芨则无作用；龙黄合剂优于其中任何单味中药的抑Hp作用，并优于市场上出售的虚寒胃痛冲剂、三九胃泰、气滞胃痛冲剂、四逆散等中成药抑Hp效果；临床上应用其治疗Hp阳性十二指肠溃疡的Hp根除率也显示：单服龙黄合剂者及龙黄合剂加西药者均高于单用西药治疗者；龙黄合剂+西药组治疗十二指肠溃疡愈合率似高于单服龙黄合剂组及单服西药组，虽经统计学处理差别不显著(P>0.05)，但停药1?a后溃疡之复发率显示，龙黄合剂+西药组显著低于其他两组；尤其胃窦粘膜炎症病理好转率明显高于服西药组；这些研究结果科学地证实了我们多年采用龙黄合剂+西药的良好效果是可靠的，有根据的.
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根据上述结果，我们认为龙黄合剂所以对Hp阳性十二指肠溃疡及其伴发的慢性胃窦炎有较好的疗效，首先是由于其配伍合理，方中大黄为君药，具有清热解毒、活血化瘀、健脾利湿、消积利气之作用；龙胆为臣药，可清热利湿、疏利肝胆、健胃消胀；槟榔、元胡还有活血化瘀理气止痛之作用，白芨具有止血生肌之力共为佐药，甘草甘平解痉止痛可调和诸药，为其使药. 如此配伍之合剂体现胃腑以降为和，以通为用的治疗原则，主要对血瘀症有较好疗效，正与危北海所提出的“根据当今理论血瘀症是脏腑失调结果”观点相一致，虽然当前中医对消化性溃疡、慢性胃炎辨证分型尚不十分统一，但在临床实践中我们发现：消化性溃疡活动期，都伴有活动性胃炎，内镜下胃窦粘膜多见充血、出血点、渗血、糜烂、溃疡覆盖厚苔，周边充血水肿，表面可有渗血及血痂，按中医辨证属“热症”表现，这种“热症”可兼血瘀、脾虚、气滞湿阻；粘膜暗红或苍白、粘膜增生、肠化所致的粘膜隆起及粗糙颗粒感，血流变学改变等这些均属于血瘀症. Hp阳性的慢性胃炎，病理检查多为固有膜中性白细胞浸润的活动性胃炎. 这些又说明龙黄合剂对绝大多数消化性溃疡及伴有的慢性活动性胃炎的治疗是符合中医辨证施治原则的，特别是在本合剂中重用大黄以其为君药，而大黄除在抑菌实验中有抑制Hp作用外，还可清热燥湿、活血化瘀、健脾益胃、消积导滞、泄中寓补、推陈出新、不忌虚证. 这就使本方剂治疗不仅限于“热症”、“血瘀”，而对中医辨证属于其他类型的消化性溃疡、慢性活动性胃炎也有一定作用；综上所述配伍合理，符合辨症施治原则是疗效好的重要原因. 本研究证明，无论是龙黄合剂的单味药及水提，醇提龙黄合剂在体外都有较强的抑制Hp作用，和西药合并使用可增强单用西药的抑酸作用，并提高Hp根除率，减低了十二指肠溃疡复发率；尤其是可提高单纯用西药很难得到的胃窦炎症病理好转率，而单纯西药联合用药虽抗Hp效果良好，但组织形态修复较慢，症状缓解欠佳；以中药为主适当配合西药，可使Hp相关疾病逆转率增高，复发减少且减少联合用药副作用[1]. 这可能是龙黄合剂+西药比单用龙黄合剂及单用西药好的原因.
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根据现代药理学研究，本中西医结合方法治疗Hp阳性的十二指肠溃疡及慢性胃炎的主要作用机制可能为：①Hp根除及抗炎作用，Hp的根除促进溃疡愈合，减低了复发率，利于炎的消除[2，3]. ②增强粘膜保护作用，促进胃粘膜PGE2生成[4，5]，促进胃粘膜血流及粘液分泌，改善局部微循环，抑制胃酸分泌及类脂质蓄积，降低游离酸及蛋白酶作用，加强胃粘膜屏障作用. ③通过双相调节作用[5]抑制Hp感染局部的免疫反应，防止Hp对粘膜损伤造成炎症及已形成炎症继续加重；同时可提高整体免疫功能，促进溃疡愈合及炎症好转. ④促进胃肠功能协调[4]，利于胃酸及胃蛋白酶之消除，消除腹胀，增进食欲，改善临床症状. ⑤抗氧化作用，防止氧自由基对胃粘膜损害[4]. 总之，龙黄合剂合用呋喃唑酮及雷尼替丁服用简便，副作用小，价格便宜适合我国国情，是非常值得推广的一种方法.
4 参考文献
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1 张琳，彭国珍，郑晓光，李大健. 幽门螺杆菌相关疾病100例研究. 新消化病学杂志，1995；3(特刊3号)：14
2 Axon AT. Helicobacter pylori therapy: effect on peptic ulcer disease. J Gastroenterol Hepatol, 1991;6(2):131-137
3 贾博琦. 关于胃、十二指肠溃疡病时幽门螺杆菌的根除. 中华消化杂志，1995；15(增刊)：1-2
4 胡文启，杨成春. 中药治疗慢性胃炎作用机理研究进展. 新消化病学杂志，1996；4(4)：222-223
5 宋希仁. 大黄治疗幽门弯曲菌阳性的消化性溃疡的临床观察. 中医杂志，1991；32(5)：25-27, 百拇医药