花生四烯酸的代谢产物在兔羊水栓塞中的作用*
作者：杨鉴 余艳红 潘石蕾 钟梅 周凤琴 潘志英
单位：杨鉴 余艳红 潘石蕾 钟梅 周凤琴 第一军医大学南方医院，510515；潘志英 从化市人民医院
关键词：栓塞；羊水；血栓素A2；依前列醇；白三烯C4；花生四烯酸类
现代妇产科进展990111 摘要 目的：研究不同性质的羊水注入兔血循环后血中花生四烯酸的代谢产物血栓素A2(TXA2)、前列环素I2(PGI2)和白三烯C4(LTC4)的变化。方法：新西兰孕兔29只，随机分为4组：兔原羊水、胎粪液、胎盘组织提取液和生理盐水，分别在注入前、注入后5min，、45min从兔耳动脉抽血2ml，用放射免疫分析(RIA)检测血中TXA2和PGI2的代谢物6-酮前列腺素(6-Keto-PGF1α)和血栓素B2(TXB2)，用酶联免疫法(EIA)检测LTC4。结果：注入胎粪液、胎盘组织提取液后6-Keto-PGF1α明显增加(P<0.01)，兔原羊水组轻度增加，但差异无显著性(P>0.05)；生理盐水组无明显变化(P>0.05)；除生理盐水组外，其余各组的TXB2和LTC4在注入后增加显著(P<0.01)；TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4的组间对比以胎盘组织提取液组增加显著(P<0.01)。结论：羊水进入兔血循环能刺激机体产生TXA2、LTC4和PGI2等花生四烯酸的代谢产物，在羊水栓塞的发生、发展过程中起重要作用。
, 百拇医药
The effect of arachidonic acid metabolites on pathogenesis of amniotic fluid embolism of rabbit.
Yang Jian,Yu Yanhong,Pan Shilei,et al.
Nanfang Hospital of the First Military University,510515.
Abstract Objective:To study the changes of arachidonic acid metabolites prostaglandin I2(PGI2),thromboxane A2(TXA2)and leukotriene C4(LTC4)in blood during experimental amniotic fluid embolism in rabbits.Methods:Twenty-nine New Zealand white rabbits in pregnant 25～31 day were divided into four groups at random:raw amniotic fluid(8 rabbits);cell-free filltrate of placental extract(8 rabbits);meconium-stained fluid(8 rabbits)and control NS(5 rabbits).The concentrations of TXB2 and 6-Keto-PGF1α in blood at different time(5min,45min)after injected the substances were measured.Results:The levels of 6-Keto-PGF1α were not elevated remarkable in groups of rabbit raw amniotic fluid and control NS(P>0.05)but the groups of meconium-stained fluid and cell-free filtrate of placenta increased obviously(P<0.05，P<0.01).The production of TXB2 and LTC4 increased except the group of NS(P<0.01).The levels of TXB2, 6-Keto-PGF1α and LTC4 in cell-free filtrate of placenta were higher than that of other groups(P<0.01).Conclusion:Amniotic fluid of different character stimulate the biosynthesis and release of arachidonic acid metabolites in body and it may play an important role in genesis and development of amniotic fluid embolism.
, 百拇医药
Key words Embolism,amniotic fluid;meabolites thromboxane A2;epoprostenol;leukotriene C4;Arachidonic acids
羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE)是指羊水进入母体血液循环后引起的一系列严重症状的综合征，迄今对其发病机理仍然不太清楚。近年，国内、外学者研究发现AFE与花生四烯酸的代谢产物(arachidonic acid metabolites)脂类介质密切相关〔1-3〕，我们用RIA和EIA检测了注入不同性质的羊水对TXA2、PGI2和白三烯C4(leukotriene C4，LTC4)的影响，探讨了其在AFE中的作用。
1 资料和方法
, http://www.100md.com
1.1 兔羊水栓塞模型的制备和分组
1.1.1 分组方法 新西兰孕兔29只，重3.1～4.4kg，胎龄25～31d。根据注入液体的性质不同随机分为4组：兔原羊水组8只、胎粪液组8只、胎盘组织提取液组8只、生理盐水组5只。
1.1.2 兔羊水收集方法 取妊娠25～31d的新西兰孕兔，用3%戊巴比妥1ml/kg耳静脉注射麻醉，行子宫次全切除术后关腹。术后穿刺抽取羊水。
1.1.3 胎粪液的制备 切开胎兔腹壁，取下胎兔大肠，轻轻挤压出胎粪，制成1%浓度的胎粪液。
1.1.4 胎盘组织提取液的制备 行子宫次全切除术后，取6g胎盘组织，用组织研磨器研磨成组织匀浆，加入12ml生理盐水，4000r/min离心30min， 取上清液(supernatant)即制备好的无细胞胎盘组织提取液，(经显微镜检查证实无细胞)。
, http://www.100md.com
1.1.5 兔羊水栓塞模型的制备 将制备好的注射液在兔清醒后以2.5ml/kg的剂量从兔耳静脉注入，分别在注入前、 后5min、45min从兔耳动脉抽血2ml加肝素抗凝，胎盘组织提取液组注入后迅速死亡，立即其取心脏血。所取血液标本3000r/min离心30min，取上清液冷藏于-70℃待检。
1.2 主要设备和试剂 125I-TXB2和125I-6-Keto-PGF1α药盒由苏州医学院血栓室提供，LTC4试剂盒由Cayman化学公司提供，C-18预处理柱由Waters公司提供。
1.3 检测方法
1.3.1 放射免疫法检测(RIA) 用RIA检测标本中TXA2和PGI2的稳定产物TXB2和6-Keto-PGF1α。标准曲线的相关系数均达0.99。
, 百拇医药
1.3.2 酶联免疫法检测(EIA) 根据试剂盒要求检测LTC4之前先纯化标本，然后严格按照药盒说明书操作，吸光度由第一军医大学免疫教研室提供的酶标仪测定。
1.4 统计学处理 采用t检验统计，各组间用方差分析统计。
2 结果
2.1 各组注入前、后血浆中6-Keto-PGF1α的测定结果 胎粪液组注入后5min与注入前无明显差异(P>0.05)，注入后45min血浆中浓度明显增加(P<0.01)；胎盘组织提取液组注入后明显上升(P<0.01)；兔原羊水组和对照组注入前和注入后5min、45min均无差异(P>0.05)，见表1。
2.2 各组注入前、后血浆中TXB2的测定结果 兔原羊水组注入前与注入后5min无差异(P>0.05)，注入后45min血浆含量上升(P<0.05)；胎粪液组和胎盘组织提取液组注入后5、45min都明显升高(P<0.01)；生理盐水组注入前、后无明显变化(P>0.05)，见表2。
, http://www.100md.com
2.3 各组注入前后血浆中LTC4的变化 除生理盐水组外，其余各组在注入实验液后5min、45min LTC4均上升(P<0.01)，见表3。
由检测结果可见，各组间对比，以注入胎盘组织提取液组血浆的TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4升 高最为明显(P<0.01)。
表1 各组注入前后血浆中6-Keto-PGF1α的含量(μg/L,
±s) 分组
n
注入前
注入后5min
, http://www.100md.com
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
40.5±31.1
33.9±17.9
41.4±16.5
33.1±6.2
, http://www.100md.com
35.4±33.5
41.7±18.8
360.5±117.6**
39.2±11.2
39.3±32.2
60.9±34.2*
39.9±6.6
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01表2 各组注入前后血浆中TXB2的浓度(μg/L,±s) 分组
n
, 百拇医药
注入前
注入后5min
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
297.1±145.1
292.2±148.4
, http://www.100md.com
338.4±238.4
323.6±141.2
284.1±172.2
392.2±139.3*
2076.4±765.5**
318.2±105.3
342.1±234.6*
610.9±320.0**
303.5±155.9
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01表3 各组注入前后血浆中LTC4的浓度(μg/L,±s) 分组
, http://www.100md.com
n
注入前
注入后5min
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
24.8±8.9
, http://www.100md.com
38.9±16.8
69.1±43.8
52.5±17.8
190.3±99.6*
87.1±75.7*
714.6±247.9**
52.5±21.1
262.1±105.7**
323.9±296.9**
55.7±32.5
, 百拇医药
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01
3 讨论
3.1 TXA2、PGI2和LTC4的生理和病理生理作用 TXA2、PGI2和LTC4属不饱和脂肪酸，是花生四烯酸的代谢物，TXA2和PGI2是一对作用截然相反的、生物活性很强的血管活性物质，前者促进血小板和白细胞聚集，强烈收缩血管和气管平滑肌；后者却能抑制血小板聚集并舒张血管平滑肌。妊娠后这两者的含量都有增加，两者之间维持着一种新的平衡，适应妊娠、分娩的生理过程。当机体受到各种有害刺激时，TXA2的释放增加，与肺动脉高压、内脏缺血、弥散性血管内凝血(DIC)有关；而PGI2的持续增高可能与休克时心血管的失代偿有关〔4〕。花生四烯酸在脂质氧化酶(lipid oxidase)的作用下生成LT类物质。当机体受到各种刺激，如抗原抗体效应，则会引起大量释放，导致支气管平滑肌强烈而持久地收缩，增加毛细血管的通透性，促进粘膜分泌等过敏性反应。
, http://www.100md.com
3.2 TXA2、PGI2和LTC4与羊水栓塞的关系 Masao用人羊水诱发兔AFE后测得肺白三烯C和D含量增加，用脂质氧化酶抑制剂AA861可减轻AFE的症状和降低患者的死亡率〔5〕。宋艳红等〔6〕报道用环氧酶抑制剂能减轻AFE样血浆对兔离体灌流肺的损害。这些实验明确地提出了花生四烯酸代谢物与AFE的关系。
本实验发现从兔耳静脉注入新鲜、自体原羊水不能引起兔死亡，且6-Keto-PGF1α升高不明显，这与Spence等〔7〕的报道一致。胎粪液组亦无兔死 亡，Clark等〔8〕报道，人发生AFE时清亮的羊水与胎粪污染的羊水在心衰、母体死亡、新生儿预后等方面差异并无显著性。胎盘组织提取液注入后，TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4显著增加，组间比较亦明显高于其它组，且注入胎盘组织提取液的兔迅速死亡。通过本实验表明，单纯羊水即使是胎粪污染了进入血循环似乎并非AFE致死的主要原因；无细胞的胎盘组织提取液迅速致兔死亡，一方面是因胎盘中含有大量促凝物质进入血循环后引起肺和全身广泛血栓形成〔7〕；另一方面可能是胎盘组织提取液中含有某种物质进入血循环后刺激机体产生过敏样反应，引起短时间释放大量生物活性物质，如LTC4、TXA2等，使机体出现严重的病理生理改变。由此表明进入母血循环的羊水能刺激机体产生大量的花生四烯酸的代谢产物，导致机体出现严重器官功能损害，参与AFE的发生。
, 百拇医药
参考文献
1.Martin RW.Amniotic fluid embolism.Clin Obstet Gynecol 1996;39:101
2.Clark SL.New concepts of amniotic fluid embolism:A review.Obstet Gynecol Surv 1990;45:360
3.Clark SL.Arachidonic acid metabolites and the pathophysiology of amniotic fluid embolism.Semi Reproductive Endocrino 1985;3:253
4.杨钢(主编).内分泌生理与病理生理学.天津：天津科技出版社 1994：820-843
, 百拇医药
5.Azegami M,Mori N.Amniotic fluid embolism and leukotrienes.Am J Obstet Gynecol 1986;155:1119
6.余艳红，金志魁.羊水栓塞样血浆对离体肺循环的影响.中华妇产科杂志 1997；32：134
7.Spence MR,Mason KG.Experimental amniotic fluid embolism in rabbits.Am J Obstet Gyencol 1974;119:1073
8.Clark SL,Hankins G,Dudley DA,et al.Amniotic fluid embolism:Analysis of the national registry.Am J Obstet Gynecol 1995,172:1158
(收稿日期1998-12-04), http://www.100md.com
单位：杨鉴 余艳红 潘石蕾 钟梅 周凤琴 第一军医大学南方医院，510515；潘志英 从化市人民医院
关键词：栓塞；羊水；血栓素A2；依前列醇；白三烯C4；花生四烯酸类
现代妇产科进展990111 摘要 目的：研究不同性质的羊水注入兔血循环后血中花生四烯酸的代谢产物血栓素A2(TXA2)、前列环素I2(PGI2)和白三烯C4(LTC4)的变化。方法：新西兰孕兔29只，随机分为4组：兔原羊水、胎粪液、胎盘组织提取液和生理盐水，分别在注入前、注入后5min，、45min从兔耳动脉抽血2ml，用放射免疫分析(RIA)检测血中TXA2和PGI2的代谢物6-酮前列腺素(6-Keto-PGF1α)和血栓素B2(TXB2)，用酶联免疫法(EIA)检测LTC4。结果：注入胎粪液、胎盘组织提取液后6-Keto-PGF1α明显增加(P<0.01)，兔原羊水组轻度增加，但差异无显著性(P>0.05)；生理盐水组无明显变化(P>0.05)；除生理盐水组外，其余各组的TXB2和LTC4在注入后增加显著(P<0.01)；TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4的组间对比以胎盘组织提取液组增加显著(P<0.01)。结论：羊水进入兔血循环能刺激机体产生TXA2、LTC4和PGI2等花生四烯酸的代谢产物，在羊水栓塞的发生、发展过程中起重要作用。
, 百拇医药
The effect of arachidonic acid metabolites on pathogenesis of amniotic fluid embolism of rabbit.
Yang Jian,Yu Yanhong,Pan Shilei,et al.
Nanfang Hospital of the First Military University,510515.
Abstract Objective:To study the changes of arachidonic acid metabolites prostaglandin I2(PGI2),thromboxane A2(TXA2)and leukotriene C4(LTC4)in blood during experimental amniotic fluid embolism in rabbits.Methods:Twenty-nine New Zealand white rabbits in pregnant 25～31 day were divided into four groups at random:raw amniotic fluid(8 rabbits);cell-free filltrate of placental extract(8 rabbits);meconium-stained fluid(8 rabbits)and control NS(5 rabbits).The concentrations of TXB2 and 6-Keto-PGF1α in blood at different time(5min,45min)after injected the substances were measured.Results:The levels of 6-Keto-PGF1α were not elevated remarkable in groups of rabbit raw amniotic fluid and control NS(P>0.05)but the groups of meconium-stained fluid and cell-free filtrate of placenta increased obviously(P<0.05，P<0.01).The production of TXB2 and LTC4 increased except the group of NS(P<0.01).The levels of TXB2, 6-Keto-PGF1α and LTC4 in cell-free filtrate of placenta were higher than that of other groups(P<0.01).Conclusion:Amniotic fluid of different character stimulate the biosynthesis and release of arachidonic acid metabolites in body and it may play an important role in genesis and development of amniotic fluid embolism.
, 百拇医药
Key words Embolism,amniotic fluid;meabolites thromboxane A2;epoprostenol;leukotriene C4;Arachidonic acids
羊水栓塞(amniotic fluid embolism,AFE)是指羊水进入母体血液循环后引起的一系列严重症状的综合征，迄今对其发病机理仍然不太清楚。近年，国内、外学者研究发现AFE与花生四烯酸的代谢产物(arachidonic acid metabolites)脂类介质密切相关〔1-3〕，我们用RIA和EIA检测了注入不同性质的羊水对TXA2、PGI2和白三烯C4(leukotriene C4，LTC4)的影响，探讨了其在AFE中的作用。
1 资料和方法
, http://www.100md.com
1.1 兔羊水栓塞模型的制备和分组
1.1.1 分组方法 新西兰孕兔29只，重3.1～4.4kg，胎龄25～31d。根据注入液体的性质不同随机分为4组：兔原羊水组8只、胎粪液组8只、胎盘组织提取液组8只、生理盐水组5只。
1.1.2 兔羊水收集方法 取妊娠25～31d的新西兰孕兔，用3%戊巴比妥1ml/kg耳静脉注射麻醉，行子宫次全切除术后关腹。术后穿刺抽取羊水。
1.1.3 胎粪液的制备 切开胎兔腹壁，取下胎兔大肠，轻轻挤压出胎粪，制成1%浓度的胎粪液。
1.1.4 胎盘组织提取液的制备 行子宫次全切除术后，取6g胎盘组织，用组织研磨器研磨成组织匀浆，加入12ml生理盐水，4000r/min离心30min， 取上清液(supernatant)即制备好的无细胞胎盘组织提取液，(经显微镜检查证实无细胞)。
, http://www.100md.com
1.1.5 兔羊水栓塞模型的制备 将制备好的注射液在兔清醒后以2.5ml/kg的剂量从兔耳静脉注入，分别在注入前、 后5min、45min从兔耳动脉抽血2ml加肝素抗凝，胎盘组织提取液组注入后迅速死亡，立即其取心脏血。所取血液标本3000r/min离心30min，取上清液冷藏于-70℃待检。
1.2 主要设备和试剂 125I-TXB2和125I-6-Keto-PGF1α药盒由苏州医学院血栓室提供，LTC4试剂盒由Cayman化学公司提供，C-18预处理柱由Waters公司提供。
1.3 检测方法
1.3.1 放射免疫法检测(RIA) 用RIA检测标本中TXA2和PGI2的稳定产物TXB2和6-Keto-PGF1α。标准曲线的相关系数均达0.99。
, 百拇医药
1.3.2 酶联免疫法检测(EIA) 根据试剂盒要求检测LTC4之前先纯化标本，然后严格按照药盒说明书操作，吸光度由第一军医大学免疫教研室提供的酶标仪测定。
1.4 统计学处理 采用t检验统计，各组间用方差分析统计。
2 结果
2.1 各组注入前、后血浆中6-Keto-PGF1α的测定结果 胎粪液组注入后5min与注入前无明显差异(P>0.05)，注入后45min血浆中浓度明显增加(P<0.01)；胎盘组织提取液组注入后明显上升(P<0.01)；兔原羊水组和对照组注入前和注入后5min、45min均无差异(P>0.05)，见表1。
2.2 各组注入前、后血浆中TXB2的测定结果 兔原羊水组注入前与注入后5min无差异(P>0.05)，注入后45min血浆含量上升(P<0.05)；胎粪液组和胎盘组织提取液组注入后5、45min都明显升高(P<0.01)；生理盐水组注入前、后无明显变化(P>0.05)，见表2。
, http://www.100md.com
2.3 各组注入前后血浆中LTC4的变化 除生理盐水组外，其余各组在注入实验液后5min、45min LTC4均上升(P<0.01)，见表3。
由检测结果可见，各组间对比，以注入胎盘组织提取液组血浆的TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4升 高最为明显(P<0.01)。
表1 各组注入前后血浆中6-Keto-PGF1α的含量(μg/L,
±s) 分组n
注入前
注入后5min
, http://www.100md.com
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
40.5±31.1
33.9±17.9
41.4±16.5
33.1±6.2
, http://www.100md.com
35.4±33.5
41.7±18.8
360.5±117.6**
39.2±11.2
39.3±32.2
60.9±34.2*
39.9±6.6
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01表2 各组注入前后血浆中TXB2的浓度(μg/L,
±s) 分组n
, 百拇医药
注入前
注入后5min
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
297.1±145.1
292.2±148.4
, http://www.100md.com
338.4±238.4
323.6±141.2
284.1±172.2
392.2±139.3*
2076.4±765.5**
318.2±105.3
342.1±234.6*
610.9±320.0**
303.5±155.9
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01表3 各组注入前后血浆中LTC4的浓度(μg/L,
±s) 分组, http://www.100md.com
n
注入前
注入后5min
注入后45min
兔原羊水组
胎粪液组
胎盘液组
生理盐水组
8
8
8
5
24.8±8.9
, http://www.100md.com
38.9±16.8
69.1±43.8
52.5±17.8
190.3±99.6*
87.1±75.7*
714.6±247.9**
52.5±21.1
262.1±105.7**
323.9±296.9**
55.7±32.5
, 百拇医药
vs注入前 *P<0.05 **P<0.01
3 讨论
3.1 TXA2、PGI2和LTC4的生理和病理生理作用 TXA2、PGI2和LTC4属不饱和脂肪酸，是花生四烯酸的代谢物，TXA2和PGI2是一对作用截然相反的、生物活性很强的血管活性物质，前者促进血小板和白细胞聚集，强烈收缩血管和气管平滑肌；后者却能抑制血小板聚集并舒张血管平滑肌。妊娠后这两者的含量都有增加，两者之间维持着一种新的平衡，适应妊娠、分娩的生理过程。当机体受到各种有害刺激时，TXA2的释放增加，与肺动脉高压、内脏缺血、弥散性血管内凝血(DIC)有关；而PGI2的持续增高可能与休克时心血管的失代偿有关〔4〕。花生四烯酸在脂质氧化酶(lipid oxidase)的作用下生成LT类物质。当机体受到各种刺激，如抗原抗体效应，则会引起大量释放，导致支气管平滑肌强烈而持久地收缩，增加毛细血管的通透性，促进粘膜分泌等过敏性反应。
, http://www.100md.com
3.2 TXA2、PGI2和LTC4与羊水栓塞的关系 Masao用人羊水诱发兔AFE后测得肺白三烯C和D含量增加，用脂质氧化酶抑制剂AA861可减轻AFE的症状和降低患者的死亡率〔5〕。宋艳红等〔6〕报道用环氧酶抑制剂能减轻AFE样血浆对兔离体灌流肺的损害。这些实验明确地提出了花生四烯酸代谢物与AFE的关系。
本实验发现从兔耳静脉注入新鲜、自体原羊水不能引起兔死亡，且6-Keto-PGF1α升高不明显，这与Spence等〔7〕的报道一致。胎粪液组亦无兔死 亡，Clark等〔8〕报道，人发生AFE时清亮的羊水与胎粪污染的羊水在心衰、母体死亡、新生儿预后等方面差异并无显著性。胎盘组织提取液注入后，TXB2、6-Keto-PGF1α和LTC4显著增加，组间比较亦明显高于其它组，且注入胎盘组织提取液的兔迅速死亡。通过本实验表明，单纯羊水即使是胎粪污染了进入血循环似乎并非AFE致死的主要原因；无细胞的胎盘组织提取液迅速致兔死亡，一方面是因胎盘中含有大量促凝物质进入血循环后引起肺和全身广泛血栓形成〔7〕；另一方面可能是胎盘组织提取液中含有某种物质进入血循环后刺激机体产生过敏样反应，引起短时间释放大量生物活性物质，如LTC4、TXA2等，使机体出现严重的病理生理改变。由此表明进入母血循环的羊水能刺激机体产生大量的花生四烯酸的代谢产物，导致机体出现严重器官功能损害，参与AFE的发生。
, 百拇医药
参考文献
1.Martin RW.Amniotic fluid embolism.Clin Obstet Gynecol 1996;39:101
2.Clark SL.New concepts of amniotic fluid embolism:A review.Obstet Gynecol Surv 1990;45:360
3.Clark SL.Arachidonic acid metabolites and the pathophysiology of amniotic fluid embolism.Semi Reproductive Endocrino 1985;3:253
4.杨钢(主编).内分泌生理与病理生理学.天津：天津科技出版社 1994：820-843
, 百拇医药
5.Azegami M,Mori N.Amniotic fluid embolism and leukotrienes.Am J Obstet Gynecol 1986;155:1119
6.余艳红，金志魁.羊水栓塞样血浆对离体肺循环的影响.中华妇产科杂志 1997；32：134
7.Spence MR,Mason KG.Experimental amniotic fluid embolism in rabbits.Am J Obstet Gyencol 1974;119:1073
8.Clark SL,Hankins G,Dudley DA,et al.Amniotic fluid embolism:Analysis of the national registry.Am J Obstet Gynecol 1995,172:1158
(收稿日期1998-12-04), http://www.100md.com