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编号:10287034
层粘蛋白及其受体、增殖细胞核抗原与肝细胞癌肿瘤生物学特性的关系
http://www.100md.com 《中国病理生理杂志》 2000年第5期
     作者:房淑彬 史良会 刘中金 李涛 胡骥琼 黄文斌

    单位:房淑彬 史良会 刘中金 李涛 胡骥琼 (皖南医学院弋矶山医院普外科, 安徽 芜湖 241001);黄文斌(皖南医学院病理教研室)

    关键词:肝细胞瘤;层粘连蛋白;免疫组织化学

    中国病理生理杂志000526

    [摘 要] 目的:探讨层粘蛋白(LN)、层粘蛋白受体(LN-R)及增殖细胞核抗原(PCNA)与原发性肝细胞癌(HCC)恶性程度的关系。方法:采用SABC法分别检测42例肝细胞癌及癌旁组织中LN、LN-R及PCNA的表达情况。结果:LN、LN-R及PCNA在肝细胞癌中的表达均显著高于癌旁组织(P<0.05),且与肝细胞癌Edmondson分级呈正相关;浸润型(IHCC)生长、有转移、肿瘤直径>3 cm者LN、LN-R及PCNA的表达高,而膨胀型(EHCC)生长、无转移、肿瘤直径≤3 cm者多表达较低;在高增殖指数组LN、LN-R表达高于低增殖指数组(P<0.05)。结论:细胞内LN、LN-R及PCNA可作为评判肝细胞癌恶性程度及临床预后的良好指标。
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    [中图分类号] R735.7 [文献标识码] A

    [文章编号] 1000-4718(2000)05-0468-02

    [MeSH] Hepatoma; Laminin; Immuno-histochemistry

    层粘蛋白(laminin,LN)是细胞外基质中的重要成分。LN与其受体(laminin receptor, LN-R)结合能调节细胞的生长、分化、增殖和扩散,它们的表达与肿瘤的进展有很大的关系。但胞内LN及LN-R与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)恶性程度的关系研究不多。本研究拟采用免疫组化方法观察LN、LN-R及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)在肝细胞癌及癌旁组织的表达情况,以探讨其与癌细胞的增殖程度的关系,以及在HCC转移中的可能作用。
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    材 料 和 方 法

    一、材料

    手术切除的HCC标本42例,男性34例,女性8例,年龄为23~72岁。所有患者术前均未受过放疗和化疗。根据Edmondson-Steiner组织学分级标准[1],42例中,Ⅱ级12例,Ⅲ级21例,Ⅳ级9例。按Kojiro等[2]的肝癌巨体分型标准,42例中膨胀型(expansionary hepatocellular carcinoma, EHCC)17例,浸润型(infiltrative hepatocellular carcinoma, IHCC)25例。肿瘤大小(2个以上的以直径相加计)≤3 cm者5例,3~5 cm者8例,>5 cm者29例。经影象学检查发现有肝外脏器转移和(或)经病理检查发现门静脉癌栓或肝门淋巴结内有癌细胞者32例,另10例无转移。每例标本均有癌和癌旁肝组织。

    手术切除的标本均用中性福尔马林固定,常规石蜡包埋,连续4 μm厚切片,行HE和免疫组织化学染色。
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    二、方法

    鼠抗LN、LN-R、PCNA抗体及SABC试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司,采用免疫组化SABC法。以已知阳性片作阳性对照,PBS液代替一抗作阴性对照。以出现明显棕黄色物、染色强度高于背景非特异性染色者为阳性。高倍镜下(×400)随机选择5个视野,计数每1000个肿瘤和非肿瘤细胞(避开坏死区和组织切缘)的阳性细胞数,作为该例阳性染色的分值。

    三、统计方法

    数据以±s表示,采用t检验,秩和检验及秩相关检验处理。

    表1 LN、LN-R及PCNA在肝癌和癌旁组织的表达

    Tab 1 Expression of LN, LN-R and PCNA in HCC and its pericancerous tissues(±s, n=42)
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    Staining scores

    LN

    LN-R

    PCNA

    Cancer tissues

    457.86±124.42*

    565.48±125.51**

    540.11±255.12**

    Pericancerous tissues

    217.47±113.56
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    128.11±98.63

    246.75±92.40

    P<0.05,vs **P<0.01, vs pericancerous tissues结 果

    一、LN、LN-R及PCNA在肝癌及癌旁组织的表达(见表1)

    LN阳性物质主要定位于细胞浆,呈颗粒状,在癌组织中LN阳性染色分值明显多于癌旁组织(P<0.05);在癌组织中LN-R阳性物质主要位于细胞膜和胞浆,呈颗粒状,在癌旁组织中,偶见几个散在阳性细胞,两者差异极显著(P<0.01);PCNA定位于细胞核,呈颗粒状。在癌组织中大部分细胞呈阳性表达,在癌旁组织中,阳性细胞数明显少,绝大多数呈散在分布。两处表达也具有极显著差异(P<0.01)。

    二、LN、LN-R及PCNA的表达与临床病理参数之间的关系
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    在转移组LN、LN-R及PCNA分值明显高于未转移组(P<0.01)。LN、LN-R及PCNA表达与HCC的不同生长方式、有无转移有关,IHCC、有转移组中其分值均显著高于EHCC、无转移组(P<0.05)。瘤体大小不同其表达也有差异,直径≤3 cm者LN、LN-R及PCNA分值明显低于>3 cm者(P<0.05),而直径在3~5 cm和>5 cm者其差异不显著(P>0.05)。LN、LN-R及PCNA表达与Edmodson分级均呈正相关(r=0.391,P<0.05)。

    三、LN、LN-R与PCNA之间的关系

    参照Ng等[3]关于PCNA高低增殖指数标准,PCNA分值>200为高增殖指数,而<200为低增殖指数。高增殖指数型LN、LN-R表达明显高于低增殖指数型(P<0.01)。

    讨 论

, 百拇医药     LN主要位于细胞外基质的基膜中。但正常肝组织中的肝窦无基膜结构,肝窦壁无LN表达。肝癌细胞胞内LN可能为肝癌细胞自身合成的。本资料中IHCC、有转移者的胞内LN表达明显高于EHCC、无转移者,表明癌细胞合成LN、胞浆内阳性LN染色可能预示癌细胞高转移潜能。LN的作用是通过细胞膜上的LN-R而发挥,不同转移潜能肿瘤细胞表面LN-R数目不同[4],高转移瘤细胞比低转移瘤细胞LN-R表达水平高。本组中,癌细胞胞膜及胞浆均存在LN-R的阳性染色,且有转移、低分化、IHCC组LN-R表达高于无转移、高分化、EHCC组。可见LN-R可作为评价肿瘤恶性程度的一个指标。

    PCNA合成和表达与细胞增殖状态相关,可作为判断细胞增殖状况的标记物[4]。有研究表明[5],肝癌直径<3 cm,DNA含量以二倍体为主,细胞增殖较缓慢,而直径>3 cm的肝癌,DNA含量以多倍体为主,细胞生长增殖较快。本组中PCNA分值在肿瘤直径≤3 cm组明显低于>3 cm组。本资料还显示,PCNA表达与Edmondson分级、肿瘤生长方式及有无转移均有关。可见PCNA能反映癌细胞的生物学行为。LN促进癌细胞的增殖与否迄今尚未取得一致性结论。
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    [参 考 文 献]

    [1] Grigioni WF, Derrico A, Bacci F, et al. Primary liver neoplasms: evaluation of proliferative index using MoAb Ki-67[J]. J Pathol, 1989, 158:23~29.

    [2] Kojiro M, Nakashima T, 著(杨榕译).肝细胞癌的病理学[M].In: Okuda K, Ishak KG. eds.肝脏肿瘤. 上海:上海科技出版社,1991.82~106.

    [3] Ng IOL, Path MRC, Lai ECS, et al. Prognostic significance of proliferating cell nuclear antigen expression in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer, 1994,73:2268~2274.

    [4] Mecham RP. Laminin receptor. Annu Rev Cell Biol, 1991, 7:71~78.

    [5] 李伟道.原发性肝癌诊断、分型和分期标准的修订意见[J].中国普外基础与临床杂志,1996,6(4):233~234.

    [收稿日期] 2000-02-25 [修回日期] 2000-04-17

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