阿魏酸钠对小鼠急性肝损伤的保护作用
作者：计一平 胡晋红 刘涛 张顺民 蔡溱 刘厚佳 龚潇赟
单位：计一平(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；胡晋红(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；刘涛(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；张顺民(第二军医大学长海医院病理科)；蔡溱(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；刘厚佳(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433) 龚潇(药学院1996级实习生)
关键词：肝损伤，急性；阿魏酸钠
第二军医大学学报001039 [中图分类号] R 285.5 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0999-02
阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)是从当归、川芎等中药中提取的有效单体成分，临床 主要用于心脑血管疾病的预防与治疗。近年来，汪晖等[1,2]证明SF能拮抗对乙酰 氨基酚和乙醇所致的小鼠肝损伤。本实验研究SF对四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖( D-GalN)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 阿魏酸钠(成都亨达制药厂，批号991201)；联苯双脂(biphenyl dicarboxylate,BPD,上海天平制药厂，批号980903)；四氯化碳(宜兴市毅达化工厂)；橄 榄油(上海化学试剂站分装)；D-氨基半乳糖(重庆医科大学)；甲醛(苏州振兴化工 厂)；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD) 测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2 仪器 UV-2100分光光度计(日本岛津)；TRACE CB171半自动生化分析仪(上 海华亿仪器公司)。
1.3 动物及药物处理 昆明种小鼠70只，雌雄各半，体质量(22±2) g，将小鼠随 机分成7组，每组10只。A组为正常对照组，B组为CCl4模型组，C组为BPD+CCl4组，D组 为SF+CCl4组,E组为D-GalN模型组,F组为BPD+D-GalN组，G为SF+D-GalN组 。实验开始先灌胃2 d, 1次/d。A组，B组，E组灌生理盐水10 ml/kg；C组，F组灌BPD(200 m g/kg)；D组，G组灌SF(100 mg/kg)。实验第3天时，B组，C组，D组分别腹腔注射0.5% CCl4-橄榄油10 ml/kg 1次造模型，E，F，G组分别腹腔注射D-GalN 80 0 mg/kg 1次造模型，且以上各组灌胃改为2次/d，剂量同上。造模型后48 h将小鼠全部处死 。处死前15 h禁食，但不禁水，末次给药后1 h摘取小鼠眼球取血，分离血清后待测。取肝 组织左叶用10%甲醛固定作病理切片，右叶作肝匀浆。
, 百拇医药
1.4 血清ALT，AST活性的测定 采用ALT，AST测定试剂盒,在TRACE CB171半自动 生化分析仪上测定。
1.5 肝组织MDA含量的测定 用生理盐水制备10%肝细胞匀浆，用MDA测定试剂盒检 测。
1.6 肝组织SOD活性的测定 用生理盐水制备1%肝匀浆，考马斯亮蓝-G250测定肝 组织蛋白浓度，用SOD测定试剂盒检测其活力。
1.7 肝病理组织学观察 取肝左叶同一部位作病理组织切片，用常规石蜡切片，H -E染色，观察肝组织的病理变化。
1.8 统计学处理 数据以
±s表示，采用t检验。
2 结 果
, 百拇医药
2.1 血清ALT，AST活力的变化 两模型组(B组,E组) ALT，AST的活性均比A组(正 常组)明显升高(P<0.01)，C组和D组，F组和G组的ALT，AST活性分别较B组和E组有明显 的降低(P<0.01)，而C组和D组，F组和G组的ALT，AST活性无显著性差异(表1)。
表 1 阿魏酸钠对血清ALT，AST活性和肝组织中MDA含量，SOD活性的影响(n=10,±s) 组别
ALT(zB/U.L-1)
AST(zB/U.L-1)
MDA (cB/mmol.L-1)
, 百拇医药
SOD(zB/U.mg-1)
A
19.47± 4.92
31.28± 4.50
0.94±0.09
638.63±62.75
B
148.52±25.18**
151.24±20.23**
1.24±0.08**
, 百拇医药
44 4.40±52.11**
C
57.27± 6.62△△
40.86± 9.35△△
0.99±0. 11△△
548.84±61.85△△
D
60.11± 7.43△△
37.08± 8.25△△
0.94±0. 09△△
, 百拇医药
581.01±68.29△△
E
152.86±28.13**
150.00±21.09**
1.58±0.14**
428.07±77.70**
F
36.14± 8.34▲▲
43.39± 5.06▲▲
1.16± 0.07▲▲
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594.69±68.74▲▲
G
43.90± 8.85▲▲
46.80± 6.71▲▲
1.21±0 .07▲▲
585.81±67.89▲▲
A: 正常组; B: CCl4组; C: BPD+CCl4组; D: SF+ CCl4组; E: D-GalN组; F: BPD+D-GalN组; G: SF+D-GalN组;
**P<0.01 vs A组； △△ P<0.01 vs B组； ▲▲ P<0.01 vs E组
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2.2 肝组织MDA含量的变化 B组和E组的MDA含量较A组有显著升高(P<0.01)； C组和D组，F组和G组的MDA含量分别较B组和E组有明显的降低(P<0.01)；C组和D组，F组 和G组的MDA含量无显著性差异(表1)。
2.3 肝组织中SOD活性的变化 B组和E组中SOD活性均比A组明显降低(P<0.01) ；C组和D组，F组和G组的SOD活性分别较B组和E组有明显升高(P<0.01)；而C组和D组，F 组和G组的SOD活性基本相似(表1)。
2.4 肝组织的病理变化 在光镜下观察到A组肝小叶结构完整，肝细胞无明显病 变。B组和E组肝细胞普遍浊肿，部分呈气球样变、嗜酸性变和脂肪性变。C组、D组和F组 、G组肝细胞肿胀、坏死和炎性细胞浸润分别较B组和E组明显减轻。
3 讨 论
已知组织的过氧化损伤是肝损伤和肝纤维化形成中的重要机制之一。CCl4进入体内经肝酶 激活产生自由基和· CCl3，·CCl3和肝细胞内质网膜上的脂质起过 氧化反应，引起细胞膜结构和功能的损害[3]。D-GalN干扰肝细胞磷酸尿嘧啶 核苷的代谢，在细胞内与尿苷二磷酸葡萄糖(UDP)形成复合物，使UDP耗竭，最终导致肝细胞 坏死[4]。研究证明CCl4和D-GalN复制的肝损伤可模拟病毒性肝损伤，其表 观症状、肝功能检测指标、肝脏病理改变与病毒性肝炎具有相似性。杨新波等[5] 研究表明，以CCl4和D-GalN作为降酶药物研究模型，观察药效的最佳时间为24～48 h。本实验在给小鼠注射CCl4和D-GalN造模型48 h时，观察到药物SF能明显纠正肝损 伤所致ALT，AST活性的升高，能减轻急性肝损伤时的肝细胞肿胀，防止肝细胞坏死，减少炎 性细胞浸润。
, 百拇医药
MDA为脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死。SOD是超氧阴 离子自由基的清除剂，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应。自由基可诱发和增强机体内脂 质过氧化作用，导致细胞膜系统损伤及其功能丧失。本实验结果表明，SF对CCl4和D -GalN造成的小鼠实验性肝损伤具有保护作用，且其作用和传统的保肝药物BPD相似，能降 低实验性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性，明显升高肝组织匀浆中的SOD活性，而MDA的含量则 显著降低。说明SF可能通过抗脂质过氧化而提高肝细胞膜系统的稳定性，使肝细胞变性和坏 死减轻。SF具有保护肝细胞损伤的作用，其保护作用的具体环节和机制值得进一步研究。
[作者简介] 计一平(1966-),男(汉族),主管药师.
[参 考 文 献]
[1] 汪 晖,彭仁琇. 阿魏酸钠减轻对乙酰氨基酚致小鼠肝损[J].中国 药理学报,1994,15(1):81-83.
, http://www.100md.com
[2] 汪 晖,彭仁琇,王若琨,等.阿魏酸钠对乙醇所致小鼠肝脏抗氧化功能改变的 拮抗作用[J].药学学报,1997,32(7):511-514.
[3] Recknagel RO,Glende EA Jr, Dolak JA,et al. Mechanisms of carbon t etrachloride toxicity[J]. Pharmacol Ther,1989,43(1):139-154.
[4] 李仪奎 主编.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社,1991 .460-461.
[5] 杨新波,黄正明,曹文斌,等. CCl4,D-Gal,ANIT致小鼠肝损伤模型的实验 研究 [J].华人消化杂志,1998,6(1):19-20.
[收稿日期] 2000-06-05
[修回日期] 2000-08-08, 百拇医药
单位：计一平(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；胡晋红(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；刘涛(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；张顺民(第二军医大学长海医院病理科)；蔡溱(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433)；刘厚佳(第二军医大学长海医院药学部，上海 200433) 龚潇(药学院1996级实习生)
关键词：肝损伤，急性；阿魏酸钠
第二军医大学学报001039 [中图分类号] R 285.5 [文献标识码] B
[文章编号] 0258-879X(2000)10-0999-02
阿魏酸钠(sodium ferulate,SF)是从当归、川芎等中药中提取的有效单体成分，临床 主要用于心脑血管疾病的预防与治疗。近年来，汪晖等[1,2]证明SF能拮抗对乙酰 氨基酚和乙醇所致的小鼠肝损伤。本实验研究SF对四氯化碳(CCl4)和D-氨基半乳糖( D-GalN)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。
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1 材料和方法
1.1 药品和试剂 阿魏酸钠(成都亨达制药厂，批号991201)；联苯双脂(biphenyl dicarboxylate,BPD,上海天平制药厂，批号980903)；四氯化碳(宜兴市毅达化工厂)；橄 榄油(上海化学试剂站分装)；D-氨基半乳糖(重庆医科大学)；甲醛(苏州振兴化工 厂)；谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD) 测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.2 仪器 UV-2100分光光度计(日本岛津)；TRACE CB171半自动生化分析仪(上 海华亿仪器公司)。
1.3 动物及药物处理 昆明种小鼠70只，雌雄各半，体质量(22±2) g，将小鼠随 机分成7组，每组10只。A组为正常对照组，B组为CCl4模型组，C组为BPD+CCl4组，D组 为SF+CCl4组,E组为D-GalN模型组,F组为BPD+D-GalN组，G为SF+D-GalN组 。实验开始先灌胃2 d, 1次/d。A组，B组，E组灌生理盐水10 ml/kg；C组，F组灌BPD(200 m g/kg)；D组，G组灌SF(100 mg/kg)。实验第3天时，B组，C组，D组分别腹腔注射0.5% CCl4-橄榄油10 ml/kg 1次造模型，E，F，G组分别腹腔注射D-GalN 80 0 mg/kg 1次造模型，且以上各组灌胃改为2次/d，剂量同上。造模型后48 h将小鼠全部处死 。处死前15 h禁食，但不禁水，末次给药后1 h摘取小鼠眼球取血，分离血清后待测。取肝 组织左叶用10%甲醛固定作病理切片，右叶作肝匀浆。
, 百拇医药
1.4 血清ALT，AST活性的测定 采用ALT，AST测定试剂盒,在TRACE CB171半自动 生化分析仪上测定。
1.5 肝组织MDA含量的测定 用生理盐水制备10%肝细胞匀浆，用MDA测定试剂盒检 测。
1.6 肝组织SOD活性的测定 用生理盐水制备1%肝匀浆，考马斯亮蓝-G250测定肝 组织蛋白浓度，用SOD测定试剂盒检测其活力。
1.7 肝病理组织学观察 取肝左叶同一部位作病理组织切片，用常规石蜡切片，H -E染色，观察肝组织的病理变化。
1.8 统计学处理 数据以
±s表示，采用t检验。2 结 果
, 百拇医药
2.1 血清ALT，AST活力的变化 两模型组(B组,E组) ALT，AST的活性均比A组(正 常组)明显升高(P<0.01)，C组和D组，F组和G组的ALT，AST活性分别较B组和E组有明显 的降低(P<0.01)，而C组和D组，F组和G组的ALT，AST活性无显著性差异(表1)。
表 1 阿魏酸钠对血清ALT，AST活性和肝组织中MDA含量，SOD活性的影响(n=10,
±s) 组别ALT(zB/U.L-1)
AST(zB/U.L-1)
MDA (cB/mmol.L-1)
, 百拇医药
SOD(zB/U.mg-1)
A
19.47± 4.92
31.28± 4.50
0.94±0.09
638.63±62.75
B
148.52±25.18**
151.24±20.23**
1.24±0.08**
, 百拇医药
44 4.40±52.11**
C
57.27± 6.62△△
40.86± 9.35△△
0.99±0. 11△△
548.84±61.85△△
D
60.11± 7.43△△
37.08± 8.25△△
0.94±0. 09△△
, 百拇医药
581.01±68.29△△
E
152.86±28.13**
150.00±21.09**
1.58±0.14**
428.07±77.70**
F
36.14± 8.34▲▲
43.39± 5.06▲▲
1.16± 0.07▲▲
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594.69±68.74▲▲
G
43.90± 8.85▲▲
46.80± 6.71▲▲
1.21±0 .07▲▲
585.81±67.89▲▲
A: 正常组; B: CCl4组; C: BPD+CCl4组; D: SF+ CCl4组; E: D-GalN组; F: BPD+D-GalN组; G: SF+D-GalN组;
**P<0.01 vs A组； △△ P<0.01 vs B组； ▲▲ P<0.01 vs E组
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2.2 肝组织MDA含量的变化 B组和E组的MDA含量较A组有显著升高(P<0.01)； C组和D组，F组和G组的MDA含量分别较B组和E组有明显的降低(P<0.01)；C组和D组，F组 和G组的MDA含量无显著性差异(表1)。
2.3 肝组织中SOD活性的变化 B组和E组中SOD活性均比A组明显降低(P<0.01) ；C组和D组，F组和G组的SOD活性分别较B组和E组有明显升高(P<0.01)；而C组和D组，F 组和G组的SOD活性基本相似(表1)。
2.4 肝组织的病理变化 在光镜下观察到A组肝小叶结构完整，肝细胞无明显病 变。B组和E组肝细胞普遍浊肿，部分呈气球样变、嗜酸性变和脂肪性变。C组、D组和F组 、G组肝细胞肿胀、坏死和炎性细胞浸润分别较B组和E组明显减轻。
3 讨 论
已知组织的过氧化损伤是肝损伤和肝纤维化形成中的重要机制之一。CCl4进入体内经肝酶 激活产生自由基和· CCl3，·CCl3和肝细胞内质网膜上的脂质起过 氧化反应，引起细胞膜结构和功能的损害[3]。D-GalN干扰肝细胞磷酸尿嘧啶 核苷的代谢，在细胞内与尿苷二磷酸葡萄糖(UDP)形成复合物，使UDP耗竭，最终导致肝细胞 坏死[4]。研究证明CCl4和D-GalN复制的肝损伤可模拟病毒性肝损伤，其表 观症状、肝功能检测指标、肝脏病理改变与病毒性肝炎具有相似性。杨新波等[5] 研究表明，以CCl4和D-GalN作为降酶药物研究模型，观察药效的最佳时间为24～48 h。本实验在给小鼠注射CCl4和D-GalN造模型48 h时，观察到药物SF能明显纠正肝损 伤所致ALT，AST活性的升高，能减轻急性肝损伤时的肝细胞肿胀，防止肝细胞坏死，减少炎 性细胞浸润。
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MDA为脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死。SOD是超氧阴 离子自由基的清除剂，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应。自由基可诱发和增强机体内脂 质过氧化作用，导致细胞膜系统损伤及其功能丧失。本实验结果表明，SF对CCl4和D -GalN造成的小鼠实验性肝损伤具有保护作用，且其作用和传统的保肝药物BPD相似，能降 低实验性肝损伤小鼠血清ALT和AST活性，明显升高肝组织匀浆中的SOD活性，而MDA的含量则 显著降低。说明SF可能通过抗脂质过氧化而提高肝细胞膜系统的稳定性，使肝细胞变性和坏 死减轻。SF具有保护肝细胞损伤的作用，其保护作用的具体环节和机制值得进一步研究。
[作者简介] 计一平(1966-),男(汉族),主管药师.
[参 考 文 献]
[1] 汪 晖,彭仁琇. 阿魏酸钠减轻对乙酰氨基酚致小鼠肝损[J].中国 药理学报,1994,15(1):81-83.
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[2] 汪 晖,彭仁琇,王若琨,等.阿魏酸钠对乙醇所致小鼠肝脏抗氧化功能改变的 拮抗作用[J].药学学报,1997,32(7):511-514.
[3] Recknagel RO,Glende EA Jr, Dolak JA,et al. Mechanisms of carbon t etrachloride toxicity[J]. Pharmacol Ther,1989,43(1):139-154.
[4] 李仪奎 主编.中药药理实验方法学[M].上海：上海科学技术出版社,1991 .460-461.
[5] 杨新波,黄正明,曹文斌,等. CCl4,D-Gal,ANIT致小鼠肝损伤模型的实验 研究 [J].华人消化杂志,1998,6(1):19-20.
[收稿日期] 2000-06-05
[修回日期] 2000-08-08, 百拇医药