HPLC法测定健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量
作者：郭社民
单位：河南省濮阳市药品检验所 457000
关键词：色谱法，高效液相；氨基比林；咖啡因
中国药师000218
摘 要 目的： 建立高效液相色谱法测定健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量。方法： 采用Spherisorb C18柱， 以0.025 mol*L-1磷酸(用三乙胺调节pH至3.0)-乙腈(86∶14)为流动相， 流速为0.8 ml。min-1， 检测波长273 nm。结果： 氨基比林和咖啡因分别在90～210 μg。ml-1和18～42 μg。ml-1的范围内呈良好的线性关系， 平均回收率分别为100.3%(RSD=0.8%)和99.8%(RSD=0.9%)。结论： 该方法灵敏、快速、准确。
, http://www.100md.com
Determination of Amidopyrine and Caffeine in Jiannao Mixture by HPLC
Guo Shemin
(Henan Province Puyang City Institute for Drug Control, 457000, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To establish a HPLC method for the determination of amidopyrin and caffeine in Jiannao mixture. Methods: The HPLC system consisted of Spherisorb C18 column, as mobile phase of 0.025 mol。L-1 phosphoric acid (adjust to pH 3.0 with triethylamine): acetonitrile (86∶14) mixture, 0.8 ml。min-1 of flow rate, wave length for determining at 273 nm. Results: The linear range of amidopyrin and caffeine, of which the linear relationship was good, was 90～210 μg。ml-1 and 18～24 μg。ml-1, respectively. The average recovery of amidopyrine and caffeine was 100.3% (RSD=0.8%) and 99.8% (RSD=0.9%)， respectively. Conclusions: The method was proved to be sensitive, rapid and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC； Amidopyrine; Caffeine▲
健脑合剂是医院常用的口服制剂， 用于调节中枢神经兴奋与抑制过程的平衡， 治疗因中枢神经机能失调而引起的精神抑郁、头痛等疾病， 临床疗效很好。处方： 氨基比林15 g、溴化钾30 g、咖啡因3 g、加蒸馏水至1 000 ml。为了建立含量测定方法， 试用高效液相色谱法同时测定健脑合剂中主药氨基比林和咖啡因的含量， 结果满意， 可用于控制其质量。
1 仪器与材料
LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津)； TCQ-250型超声清洗机(上海医疗设备二厂)； 氨基比林、咖啡因对照品(中国药品生物制品检定所)； 健脑合剂(濮阳市人民医院制剂室)； 磷酸、三乙胺(分析纯)； 乙腈(色谱纯)。
2 方法与结果
, http://www.100md.com
2.1 色谱条件 色谱柱 Spherisorb C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)； 流动相 0.025 mol.L-1磷酸(用三乙胺调节pH至3.0)一乙腈(86∶14)， 使用前用0.45 μm滤膜抽滤， 超声脱气； 流速 0.8 ml.min-1； 柱温 室温； 检测波长273 nm。在此条件下， 以咖啡因峰测定的理论塔板数为5 000， 氨基比林峰与咖啡因峰的分离度为4.5， 色谱图见图1。
图 1 液相色谱图
A. 空白溶液 B. 对照品溶液 C. 样品溶液
1. 氨基比林峰 2. 咖啡因峰
, 百拇医药 2.2 线性关系考察 精密称取氨基比林和咖啡因对照品适量， 加热水适量溶解， 冷却至室温， 加水稀释制成每1 ml含氨基比林750 μg、咖啡因150 μg的溶液， 然后精密吸取该溶液3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml分别置25 ml量瓶中， 加流动相稀释至刻度， 摇匀， 得系列标准液溶。分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪， 依法[1]测定， 记录色谱图， 以浓度X(μg.ml-1)为横坐标， 峰面积积分值Y为纵坐标， 进行线性回归， 得回归方程为：
Y氨基比林=1.064×104X-0.20, r=0.999 9
Y咖啡因=2.084×104X+0.30,r=0.999 8
结果表明： 氨基比林在90～210 μg.ml-1， 咖啡因在18～42 μg.ml-1范围内线性关系良好。
, http://www.100md.com
2.3 空白试验 按处方量制备不含氨基比林和咖啡因的模拟健脑合剂样品， 按样品测定方法进行测定， 结果表明其它成分不干扰氨基比林、咖啡因的测定。
2.4 重复性试验 按照样品测定方法， 对同一批样品重复测定5次， 计算含量， 氨基比林为99.8%， RSD=1.2%； 咖啡因为99.6%， RSD=1.3%。
2.5 回收率试验 按处方比例精密称取各成分， 制备健脑合剂， 按样品测定方法测定， 计算平均回收率(n=6)， 氨基比林回收率为100.3%， RSD=0.8%； 咖啡因回收率为99.8%， RSD=0.9%。
2.6 样品测定 对照品溶液的制备： 精密称取氨基比林、咖啡因对照品各适量， 加热水适量溶解， 冷却至室温， 加流动相制成每1 ml, 约含氨基比林150 μg， 咖啡因30 μg的溶液， 即得。
, 百拇医药 供试品溶液的制备： 精密量取样品2 ml， 置200 ml量瓶中， 加流动相稀释至刻度， 摇匀， 即得。
精密吸取上述溶液各10 μl分别注入高效液相色谱仪， 依法测定， 按外标法计算含量， 结果见表1。
表 1 样品测定结果(标示量%， n=3) 批 号
氨基比林
咖啡因
980412
98.9
99.3
980618
99.6
, 百拇医药
99.5
980709
100.3
99.9
981026
99.7
99.2
981207
100.0
100.3
3 讨论
3.1 检测波长选择 在190～400 nm波长范围内， 对氨基比林、咖啡因对照品溶液进行紫外光谱扫描， 实验结果表明， 氨基比林在224nm，261 nm波长处有最大吸收， 咖啡因在273 nm波长处有最大吸收， 由于咖啡因含量较低， 紫外吸收较弱， 故选用273 nm为检测波长， 以提高咖啡因的检测灵敏度。
3.2 采用高效液相色谱法同时分离和测定健脑合剂中二主药的含量， 方法简便、快速、准确， 可以用来控制该制剂的质量。■
参考文献
[1]中国药典. 1995版. 二部. 附录. 25
收稿日期：1999-10-13
修稿日期：2000-02-28, http://www.100md.com
单位：河南省濮阳市药品检验所 457000
关键词：色谱法，高效液相；氨基比林；咖啡因
中国药师000218
摘 要 目的： 建立高效液相色谱法测定健脑合剂中氨基比林和咖啡因的含量。方法： 采用Spherisorb C18柱， 以0.025 mol*L-1磷酸(用三乙胺调节pH至3.0)-乙腈(86∶14)为流动相， 流速为0.8 ml。min-1， 检测波长273 nm。结果： 氨基比林和咖啡因分别在90～210 μg。ml-1和18～42 μg。ml-1的范围内呈良好的线性关系， 平均回收率分别为100.3%(RSD=0.8%)和99.8%(RSD=0.9%)。结论： 该方法灵敏、快速、准确。
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Determination of Amidopyrine and Caffeine in Jiannao Mixture by HPLC
Guo Shemin
(Henan Province Puyang City Institute for Drug Control, 457000, P.R.China)
ABSTRACT Objective: To establish a HPLC method for the determination of amidopyrin and caffeine in Jiannao mixture. Methods: The HPLC system consisted of Spherisorb C18 column, as mobile phase of 0.025 mol。L-1 phosphoric acid (adjust to pH 3.0 with triethylamine): acetonitrile (86∶14) mixture, 0.8 ml。min-1 of flow rate, wave length for determining at 273 nm. Results: The linear range of amidopyrin and caffeine, of which the linear relationship was good, was 90～210 μg。ml-1 and 18～24 μg。ml-1, respectively. The average recovery of amidopyrine and caffeine was 100.3% (RSD=0.8%) and 99.8% (RSD=0.9%)， respectively. Conclusions: The method was proved to be sensitive, rapid and accurate.
, 百拇医药
KEY WORDS HPLC； Amidopyrine; Caffeine▲
健脑合剂是医院常用的口服制剂， 用于调节中枢神经兴奋与抑制过程的平衡， 治疗因中枢神经机能失调而引起的精神抑郁、头痛等疾病， 临床疗效很好。处方： 氨基比林15 g、溴化钾30 g、咖啡因3 g、加蒸馏水至1 000 ml。为了建立含量测定方法， 试用高效液相色谱法同时测定健脑合剂中主药氨基比林和咖啡因的含量， 结果满意， 可用于控制其质量。
1 仪器与材料
LC-6A高效液相色谱仪(日本岛津)； TCQ-250型超声清洗机(上海医疗设备二厂)； 氨基比林、咖啡因对照品(中国药品生物制品检定所)； 健脑合剂(濮阳市人民医院制剂室)； 磷酸、三乙胺(分析纯)； 乙腈(色谱纯)。
2 方法与结果
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2.1 色谱条件 色谱柱 Spherisorb C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)； 流动相 0.025 mol.L-1磷酸(用三乙胺调节pH至3.0)一乙腈(86∶14)， 使用前用0.45 μm滤膜抽滤， 超声脱气； 流速 0.8 ml.min-1； 柱温 室温； 检测波长273 nm。在此条件下， 以咖啡因峰测定的理论塔板数为5 000， 氨基比林峰与咖啡因峰的分离度为4.5， 色谱图见图1。
图 1 液相色谱图
A. 空白溶液 B. 对照品溶液 C. 样品溶液
1. 氨基比林峰 2. 咖啡因峰
, 百拇医药 2.2 线性关系考察 精密称取氨基比林和咖啡因对照品适量， 加热水适量溶解， 冷却至室温， 加水稀释制成每1 ml含氨基比林750 μg、咖啡因150 μg的溶液， 然后精密吸取该溶液3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml分别置25 ml量瓶中， 加流动相稀释至刻度， 摇匀， 得系列标准液溶。分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪， 依法[1]测定， 记录色谱图， 以浓度X(μg.ml-1)为横坐标， 峰面积积分值Y为纵坐标， 进行线性回归， 得回归方程为：
Y氨基比林=1.064×104X-0.20, r=0.999 9
Y咖啡因=2.084×104X+0.30,r=0.999 8
结果表明： 氨基比林在90～210 μg.ml-1， 咖啡因在18～42 μg.ml-1范围内线性关系良好。
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2.3 空白试验 按处方量制备不含氨基比林和咖啡因的模拟健脑合剂样品， 按样品测定方法进行测定， 结果表明其它成分不干扰氨基比林、咖啡因的测定。
2.4 重复性试验 按照样品测定方法， 对同一批样品重复测定5次， 计算含量， 氨基比林为99.8%， RSD=1.2%； 咖啡因为99.6%， RSD=1.3%。
2.5 回收率试验 按处方比例精密称取各成分， 制备健脑合剂， 按样品测定方法测定， 计算平均回收率(n=6)， 氨基比林回收率为100.3%， RSD=0.8%； 咖啡因回收率为99.8%， RSD=0.9%。
2.6 样品测定 对照品溶液的制备： 精密称取氨基比林、咖啡因对照品各适量， 加热水适量溶解， 冷却至室温， 加流动相制成每1 ml, 约含氨基比林150 μg， 咖啡因30 μg的溶液， 即得。
, 百拇医药 供试品溶液的制备： 精密量取样品2 ml， 置200 ml量瓶中， 加流动相稀释至刻度， 摇匀， 即得。
精密吸取上述溶液各10 μl分别注入高效液相色谱仪， 依法测定， 按外标法计算含量， 结果见表1。
表 1 样品测定结果(标示量%， n=3) 批 号
氨基比林
咖啡因
980412
98.9
99.3
980618
99.6
, 百拇医药
99.5
980709
100.3
99.9
981026
99.7
99.2
981207
100.0
100.3
3 讨论
3.1 检测波长选择 在190～400 nm波长范围内， 对氨基比林、咖啡因对照品溶液进行紫外光谱扫描， 实验结果表明， 氨基比林在224nm，261 nm波长处有最大吸收， 咖啡因在273 nm波长处有最大吸收， 由于咖啡因含量较低， 紫外吸收较弱， 故选用273 nm为检测波长， 以提高咖啡因的检测灵敏度。
3.2 采用高效液相色谱法同时分离和测定健脑合剂中二主药的含量， 方法简便、快速、准确， 可以用来控制该制剂的质量。■
参考文献
[1]中国药典. 1995版. 二部. 附录. 25
收稿日期：1999-10-13
修稿日期：2000-02-28, http://www.100md.com