阿司匹林与尼莫地平合用对大鼠颈动脉血栓形成的影响1
作者：胡香杰 吕爱刚 任亚军 张贵卿
单位：河南医科大学基础医学院药理教研室，河南郑州450052
关键词：阿司匹林；尼莫地平；血栓形成；血栓素B2；药物协同作用； 6酮-前列腺素F1α；总颈动脉
中国新药与临床杂志990108 摘要 目的：观察阿司匹林与尼莫地平合用对血栓形成的影响。方法：电刺激法形成大鼠颈动脉血栓，放免法栓测血浆凝血烷B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量。结果：合用后动脉血流阻塞时间显 著延长，Q值均大于1，且合用后血浆6-keto-PGF1α/TXB2比值也显著增加。结论： 阿司匹林与尼莫地平可协同抑制动脉血栓形成。
, 百拇医药
Effects of aspirin combined with nimodipine in
treating arterial thr ombosis in rats
HU Xiang-Jie L
Ai-Gang REN Ya-Jun ZHANG Gui-Qing
(Department of Pharmacology, He-nan Medical University, Zhengzhou HE -NAN 450052)
ABSTRACT AIM: To study the effect of combination of aspirin and nimodipine of arterial thrombosis in rat. METHODS: Thrombosis was made by el ectric stimulating carotid arteries. Serum contents of TXB2 and 6-keto-PGF 1α were detected by RIA. RESULTS: Combination treatment of Asp and Nim prolon ged the arterial occlusion time (OT) markedly, Q values were more th an 1, and the ratio of 6-keto-PGF1α/TXB2 increased. CONCLUSION: Combina tion treatment of aspirin and nimodipine yielded synergistic inhibition on throm bosis and improvement of 6-keto-PGF1α/TXB2 ratio.
, 百拇医药
KEY WORDS aspirin; nimodipine; thrombosis; thromboxane B 2; drug synergism; 6-ketoprostaglandin F1 alpha; common carotid artery
自70年代发现阿司匹林(aspirin, Asp)有抗血小板聚集作用以来已广泛应用于预防各种动脉血栓性疾病，如短暂性脑缺血发作、心肌梗死等，但长期使用会出现出血、溃疡等不良反应。尼莫地平(nimodipine, Nim)为双氢吡啶类钙通道阻滞剂之一，可选择性扩张脑 血管,增加脑血流量,同时也抑制血小板聚集,减少凝血烷A2(TXA2)的生成[1]。Asp与Nim合用对动脉血栓形成是否有协同抑制作用未见报道。我们通过电刺激 法研究2 药合用对动脉血栓形成的影响，同时，用放免法测定血浆中凝血烷B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量。
, http://www.100md.com
材料与方法
材料 Asp(山东新华制药厂，批号：9504241)，Nim(郑州化学制药厂，批号：9506012)，羧甲基纤维素钠(Na-CMC)上海化学试剂采购供应站分装，批号：910625， LR 规格，上海赛璐珞厂生产)，BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪(包头医学院心血管研究室 )，TXB2和6-keto-PGF1α放免药盒(苏州医学院血栓研究室)。
方法 Wistar大鼠，♂，298g±s 30g, 由河南医科大学实 验动物中心提供。连续4 d ig给予不同剂量的Asp, Nim及2药合用10mg/(kg.d), 用0.5%Na-CMC作血栓对照组，另设空白对照组，每组各10鼠。除空白对照组外，其余各组d 4 ig后1 h用20%乌拉坦麻醉(1g/kg,ip), 分离两侧颈总动脉，一侧穿线备用，另一侧颈动脉放置刺激电极和温控电极，按电刺激法[2]刺激颈动脉， 电流调至1.5 mA, 刺激时间为7 min, 观察阻塞时间(OT)，OT延长率按下式计算：
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OT延长率(%)=[(给药组OT-对照组OT)/对照组OT]×100%。
血栓形成后(仪器自动报警)即从对侧颈动脉插管放血，用2%Na2EDTA抗凝，血液与抗凝剂 之比为9∶1(vol/vol)，用放免法[3]栓测血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量 。实验数据均用
±s表示，组间比较采用t检验， 协同效应用Q值[4]：
EA,EB分 别 为2药单用时效应。Q<1为拮抗；Q=1为相加；Q >1为增强；Q≥1总称为协同。
结果
, 百拇医药
对电刺激颈动脉血栓形成的影响 Asp和Nim各组均显著性延长OT，合用后 OT进一步延长，合用组Q值均大于1，表明合用后抗血栓形成有协同作用 (表1)。
表1 阿司匹林(Asp)和尼莫地平(Nim)合用对 大鼠颈动 脉血栓形成以及对血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响(n=10) 组别
剂量(mg/kg)
阻塞时间(OT)(min)
OT延长率(%)
Q值
TXB2(mg/kg)
6-keto-PGF1α(mg/kg)
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6-keto-PGF1α/ TXB2
(%)
Q值
理论
实测
空白对照
/
/
/
/
/
101±32
91±36
, http://www.100md.com
89±21
/
血栓对照
/
14.1±0.9
/
/
/
497±147
34±18
8±4l
/
Asp
, http://www.100md.com
1.125
16.1±1.3c
/
16±6
/
438±97
37±17
9±3a
/
2.25
17.6±1.5c
/
, 百拇医药
25±9
/
385±70
43±13
12±5 a
/
4.5
19.7±1.1c
/
40±6
/
313±79
, http://www.100md.com 47±14
15±5c
/
Nim
4.5
15.9±1.1b
/
13±5
/
419±148
39±19
10±4a
, 百拇医药
/
9.0
17.1±1.2c
/
26±6
/
356±93
48±18
15±8b
/
18.0
18.7±1.3c
, 百拇医药
/
33±7
/
298±101
53±19
20±9c
/
Asp+Nim
1.125±4.5
18.9±1.1cfi
28±6
34±7
, http://www.100md.com
1.2
337±100
61±22
20±8cfi
1.1
2.25±9.0
20.9±1.1cfi
41±8
49±7
1.2
273±99
65±2 3
, 百拇医药
26±12cfi
1.0
4.5±18.0
22.3±1.0cfi
61±6
69±8
1.2
205±80
75± 27
37±12cfi
1.2
各组与血栓对照组相比：aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01。合用组与相应Asp单用组 相比：fP<0.01。合用组与相应Nim单用组相比：iP<0.01。血栓对照组与空白对照组相比：lP<0.01。
, 百拇医药
对血浆TXB2,6-keto-PGF1α含量的影响 与基础水平相比，血栓 模型组的6-keto-PGF1α/TXB2的比值明显下降，与对照组及各单用组比较，合用各 组的比值均显著提高，Q值均大于或等于1。结果见表1。
讨论
为了提高Asp的抗血栓作用，降低其不良反应的发生率，Asp联合应用其他抗动脉 血栓 药物成为人们研究的方向[5]。Nim自80年代开发上市以来，以往的研究主要集中在 脑血管及精神神经药理方面。近年来Nim对血小板功能的影响引起人们的注意[6] 。 本实验显示Asp与Nim按一定比例合用后可明显抑制血栓形成，显著提高血浆中6-K-PGF 1α/TXB2比值，具有协同作用，故可望在临床应用过程中可提高Asp的药效，减少Asp 剂量和不良反应。
, 百拇医药
Asp体内除抑制血小板TXA2生成外，还可通过中性粒细胞一氧化氮/环鸟苷酸(NO/cGMP) 介导 的途径增强抗血小板聚集作用[7]。DHPs除直接抑制Ca2+进入胞浆内，还可 通过抑制磷酸二酯酶而提高cAMP浓度，间接使胞浆Ca2+浓度保持在低水平。TXA2和 胞浆Ca2+均参与血小板激活的放大效应[8]，因此Asp与DHPs合用协同抑制血 小板的聚集的机制可能是多方面的。
1河南省1996年科技攻关项目基金资助，编号96120025
参考文献
[1]Juvela S, Kaste M, Hillbom M. Effects of nimodipine on platel et function in patients with subarachnoid hemorrhage. Stroke 1990; 21: 1283-8.
, http://www.100md.com
[2]覃建民(Qin JM), 李增(Li Z), 石山(Shi S). 实验性体内血检形成测定仪的研制 和使用. 中国药理学通报(ZHONGGUO YAOLIXUE TONGBAO) 1992；8：236.
[3]Wang ZY, Chen DC, He Y, Ruan CG, Zhang RW. Differential effects of new brevisc opine on arachidonic acid metabolisms in blood cells and in endothelial cells. A cta Pharmacol Sin 1993; 14: 148-51.
[4]曹颖林(Cao YL), 金和筠(Jin HJ)，王玉坤(Wang YK)，岳惠琴(Yue HQ). 阿司匹林与 潘 生丁伍用对血小板聚集和血栓形成的影响. 中华血液学杂志(Chin J Hematol) 1995; 16: 2 11-2.
, 百拇医药
[5]Greer IA, Walker JJ, Calder AA, Forbes CD. Aspirin with an adrenergic or a cal cium channel blocking agent as new combination therapy for arterial thrombosis. Lancet 1985; 1: 351-2.
[6]Li J, Wang Z. Effects of nimodipine on platelet aggregation and the activity o f enzymes in arachidonic acid metabolism. Proc CAMS and PUMC 1990; 5: 47-50.
[7]Lopez-Farre A, Caramelo C, Esteban A, et al. Effects of aspirin on platelet-neutrophil interactions: role of nitric oxide and endothelin-1. Circul ation 1995; 91: 2080-8.
[8]吴其厦(Wu QX). 血小板激活的放大和去敏感. 生理科学进展 1992；23：199-203.
1997年10月5日收稿 1998年2月4日接受, 百拇医药
单位：河南医科大学基础医学院药理教研室，河南郑州450052
关键词：阿司匹林；尼莫地平；血栓形成；血栓素B2；药物协同作用； 6酮-前列腺素F1α；总颈动脉
中国新药与临床杂志990108 摘要 目的：观察阿司匹林与尼莫地平合用对血栓形成的影响。方法：电刺激法形成大鼠颈动脉血栓，放免法栓测血浆凝血烷B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)含量。结果：合用后动脉血流阻塞时间显 著延长，Q值均大于1，且合用后血浆6-keto-PGF1α/TXB2比值也显著增加。结论： 阿司匹林与尼莫地平可协同抑制动脉血栓形成。
, 百拇医药
Effects of aspirin combined with nimodipine in
treating arterial thr ombosis in rats
HU Xiang-Jie L
Ai-Gang REN Ya-Jun ZHANG Gui-Qing(Department of Pharmacology, He-nan Medical University, Zhengzhou HE -NAN 450052)
ABSTRACT AIM: To study the effect of combination of aspirin and nimodipine of arterial thrombosis in rat. METHODS: Thrombosis was made by el ectric stimulating carotid arteries. Serum contents of TXB2 and 6-keto-PGF 1α were detected by RIA. RESULTS: Combination treatment of Asp and Nim prolon ged the arterial occlusion time (OT) markedly, Q values were more th an 1, and the ratio of 6-keto-PGF1α/TXB2 increased. CONCLUSION: Combina tion treatment of aspirin and nimodipine yielded synergistic inhibition on throm bosis and improvement of 6-keto-PGF1α/TXB2 ratio.
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KEY WORDS aspirin; nimodipine; thrombosis; thromboxane B 2; drug synergism; 6-ketoprostaglandin F1 alpha; common carotid artery
自70年代发现阿司匹林(aspirin, Asp)有抗血小板聚集作用以来已广泛应用于预防各种动脉血栓性疾病，如短暂性脑缺血发作、心肌梗死等，但长期使用会出现出血、溃疡等不良反应。尼莫地平(nimodipine, Nim)为双氢吡啶类钙通道阻滞剂之一，可选择性扩张脑 血管,增加脑血流量,同时也抑制血小板聚集,减少凝血烷A2(TXA2)的生成[1]。Asp与Nim合用对动脉血栓形成是否有协同抑制作用未见报道。我们通过电刺激 法研究2 药合用对动脉血栓形成的影响，同时，用放免法测定血浆中凝血烷B2(TXB2)和6-酮-前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)含量。
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材料与方法
材料 Asp(山东新华制药厂，批号：9504241)，Nim(郑州化学制药厂，批号：9506012)，羧甲基纤维素钠(Na-CMC)上海化学试剂采购供应站分装，批号：910625， LR 规格，上海赛璐珞厂生产)，BT87-3型实验性体内血栓形成测定仪(包头医学院心血管研究室 )，TXB2和6-keto-PGF1α放免药盒(苏州医学院血栓研究室)。
方法 Wistar大鼠，♂，298g±s 30g, 由河南医科大学实 验动物中心提供。连续4 d ig给予不同剂量的Asp, Nim及2药合用10mg/(kg.d), 用0.5%Na-CMC作血栓对照组，另设空白对照组，每组各10鼠。除空白对照组外，其余各组d 4 ig后1 h用20%乌拉坦麻醉(1g/kg,ip), 分离两侧颈总动脉，一侧穿线备用，另一侧颈动脉放置刺激电极和温控电极，按电刺激法[2]刺激颈动脉， 电流调至1.5 mA, 刺激时间为7 min, 观察阻塞时间(OT)，OT延长率按下式计算：
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OT延长率(%)=[(给药组OT-对照组OT)/对照组OT]×100%。
血栓形成后(仪器自动报警)即从对侧颈动脉插管放血，用2%Na2EDTA抗凝，血液与抗凝剂 之比为9∶1(vol/vol)，用放免法[3]栓测血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量 。实验数据均用
±s表示，组间比较采用t检验， 协同效应用Q值[4]：EA,EB分 别 为2药单用时效应。Q<1为拮抗；Q=1为相加；Q >1为增强；Q≥1总称为协同。
结果
, 百拇医药
对电刺激颈动脉血栓形成的影响 Asp和Nim各组均显著性延长OT，合用后 OT进一步延长，合用组Q值均大于1，表明合用后抗血栓形成有协同作用 (表1)。
表1 阿司匹林(Asp)和尼莫地平(Nim)合用对 大鼠颈动 脉血栓形成以及对血浆TXB2和6-keto-PGF1α含量的影响(n=10) 组别
剂量(mg/kg)
阻塞时间(OT)(min)
OT延长率(%)
Q值
TXB2(mg/kg)
6-keto-PGF1α(mg/kg)
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6-keto-PGF1α/ TXB2
(%)
Q值
理论
实测
空白对照
/
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101±32
91±36
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89±21
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血栓对照
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14.1±0.9
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497±147
34±18
8±4l
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Asp
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1.125
16.1±1.3c
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16±6
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438±97
37±17
9±3a
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2.25
17.6±1.5c
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, 百拇医药
25±9
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385±70
43±13
12±5 a
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4.5
19.7±1.1c
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40±6
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313±79
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Nim
4.5
15.9±1.1b
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13±5
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419±148
39±19
10±4a
, 百拇医药
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9.0
17.1±1.2c
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26±6
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356±93
48±18
15±8b
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18.0
18.7±1.3c
, 百拇医药
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33±7
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298±101
53±19
20±9c
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Asp+Nim
1.125±4.5
18.9±1.1cfi
28±6
34±7
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1.2
337±100
61±22
20±8cfi
1.1
2.25±9.0
20.9±1.1cfi
41±8
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1.2
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65±2 3
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26±12cfi
1.0
4.5±18.0
22.3±1.0cfi
61±6
69±8
1.2
205±80
75± 27
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1.2
各组与血栓对照组相比：aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01。合用组与相应Asp单用组 相比：fP<0.01。合用组与相应Nim单用组相比：iP<0.01。血栓对照组与空白对照组相比：lP<0.01。
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对血浆TXB2,6-keto-PGF1α含量的影响 与基础水平相比，血栓 模型组的6-keto-PGF1α/TXB2的比值明显下降，与对照组及各单用组比较，合用各 组的比值均显著提高，Q值均大于或等于1。结果见表1。
讨论
为了提高Asp的抗血栓作用，降低其不良反应的发生率，Asp联合应用其他抗动脉 血栓 药物成为人们研究的方向[5]。Nim自80年代开发上市以来，以往的研究主要集中在 脑血管及精神神经药理方面。近年来Nim对血小板功能的影响引起人们的注意[6] 。 本实验显示Asp与Nim按一定比例合用后可明显抑制血栓形成，显著提高血浆中6-K-PGF 1α/TXB2比值，具有协同作用，故可望在临床应用过程中可提高Asp的药效，减少Asp 剂量和不良反应。
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Asp体内除抑制血小板TXA2生成外，还可通过中性粒细胞一氧化氮/环鸟苷酸(NO/cGMP) 介导 的途径增强抗血小板聚集作用[7]。DHPs除直接抑制Ca2+进入胞浆内，还可 通过抑制磷酸二酯酶而提高cAMP浓度，间接使胞浆Ca2+浓度保持在低水平。TXA2和 胞浆Ca2+均参与血小板激活的放大效应[8]，因此Asp与DHPs合用协同抑制血 小板的聚集的机制可能是多方面的。
1河南省1996年科技攻关项目基金资助，编号96120025
参考文献
[1]Juvela S, Kaste M, Hillbom M. Effects of nimodipine on platel et function in patients with subarachnoid hemorrhage. Stroke 1990; 21: 1283-8.
, http://www.100md.com
[2]覃建民(Qin JM), 李增(Li Z), 石山(Shi S). 实验性体内血检形成测定仪的研制 和使用. 中国药理学通报(ZHONGGUO YAOLIXUE TONGBAO) 1992；8：236.
[3]Wang ZY, Chen DC, He Y, Ruan CG, Zhang RW. Differential effects of new brevisc opine on arachidonic acid metabolisms in blood cells and in endothelial cells. A cta Pharmacol Sin 1993; 14: 148-51.
[4]曹颖林(Cao YL), 金和筠(Jin HJ)，王玉坤(Wang YK)，岳惠琴(Yue HQ). 阿司匹林与 潘 生丁伍用对血小板聚集和血栓形成的影响. 中华血液学杂志(Chin J Hematol) 1995; 16: 2 11-2.
, 百拇医药
[5]Greer IA, Walker JJ, Calder AA, Forbes CD. Aspirin with an adrenergic or a cal cium channel blocking agent as new combination therapy for arterial thrombosis. Lancet 1985; 1: 351-2.
[6]Li J, Wang Z. Effects of nimodipine on platelet aggregation and the activity o f enzymes in arachidonic acid metabolism. Proc CAMS and PUMC 1990; 5: 47-50.
[7]Lopez-Farre A, Caramelo C, Esteban A, et al. Effects of aspirin on platelet-neutrophil interactions: role of nitric oxide and endothelin-1. Circul ation 1995; 91: 2080-8.
[8]吴其厦(Wu QX). 血小板激活的放大和去敏感. 生理科学进展 1992；23：199-203.
1997年10月5日收稿 1998年2月4日接受, 百拇医药