不同药物对人肺巨细胞癌PGCL3细胞表面表达的血小板免疫相关抗原的影响
作者：张培彤 裴迎霞 祁鑫 朴炳奎
单位：张培彤 裴迎霞 祁 鑫 朴炳奎 中国中医研究院广安门医院(北京 100053)
关键词：川芎嗪；丹参酮ⅡA；水蛭素；凝血酶；血小板免疫；相关抗原
990515 摘 要 利用铺有Matrigel的Boyden小室观察抗CD9、抗CD42a、抗CD 63、抗TS P抗体对PGCL3细胞侵袭作用的影响；采用流式细胞术观察2.5、10、20 mg/L的川芎嗪、丹 参酮ⅡA和50、500、1 000 U/L的水蛭素和凝血酶对PGCL3细胞膜表面CD9、CD42a、CD 63、TSP表达的影响，观察川芎嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素和凝血酶对人肺巨细胞癌PGCL 3细胞表面血小板免疫相关抗原CD9、CD42a、CD63和TSP表达的影响，部分阐述各种药物对 肿瘤粘附和侵袭影响的不同作用机制。结果抗CD9抗体明显增加PGCL3细胞的侵袭，而抗CD 42a、抗CD63、抗TSP抗体不同程度减少PGCL3细胞的侵袭。川芎嗪可使CD9+、CD42a+ 、TSP+细胞的数目减少，PGCL3细胞表面CD9的表达减少；丹参酮ⅡA使CD9的表达 有所增加，CD63和CD42a的表达有所下降，CD42a+、TSP+的细胞数目下降；水蛭素使CD9 、CD63和CD42a的表达有所减弱，CD42a+、CD63+细胞的比例下降；凝血酶使CD9和CD42a 的表达有所减弱，并使CD42a+的细胞数目减少。提示川芎嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素 和凝血酶对PGCL3细胞表面表达的血小板免疫相关抗原CD9、CD42a、CD63、TSP的不同影响 可能与它们对PGCL3细胞粘附和侵袭的不同作用有关。
, 百拇医药
Effects of Certain Drugs on the Expression of Antigens
on Human Pulmonary Giant Cell Carcinoma
Zhang Peitong, Pei Yingxia, Qi Xin, et al.
(Guang′anmen Hospit al, Academy of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100053)
Abstract Effects of tetramethylpyrazine(Ⅰ), tanshinone ⅡA(Ⅱ)， hirudin(Ⅲ) and thrombin(Ⅳ) on the expression of CD9, CD24a, CD63 a nd TSP on human pulmonary giant cell carcinoma (PGCL3) were investigated by Boy den Chamber covered with Matrigel with the aid of flow cytometry. Results showe d that anti-CD9 antibody significantly augmented, while the other three antibod ies (anti CD42a,anti CD63 and anti TSP), impaired the invasive potentials of PGC L3.Ⅰ decreased the expression of CD9 and the number of CD9+, CD42a+ and TS P+ cells; Ⅱ increased the expression of CD9, but decreased the expression of CD63 and CD42a as well as the number of CD42a+and TSP+cells;Ⅲ decreased bo th the expression of CD9, CD63 and CD42a and the number of CD42a+ and CD63+ cells; and Ⅳ decreased the expression of CD9, CD42a and the number of CD42a+ cells. The different effects of these drugs on the expression of antigens immun ologically related to platelet on PGCL3 cell surface may be related to their di fferent influential actions on the adhesion and invasion of PGCL3 cells.
, 百拇医药
Key words tetramethylpyrazine tanshinone ⅡA hirudin thrombin flow cytometry antigen immunologically related to platelet adhesio n and invasion
血小板与恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关，血小板表达的粘附蛋白和肿瘤细胞表面表达的血 小板免疫相关抗原起着重要作用。已发现在11种人肿瘤细胞表面均表达CD9、CD42a、 CD63、TSP等4种血小板免疫相关抗原。我们试图观察不同浓度活血药单体川芎嗪、水蛭素、 丹参酮ⅡA以及凝血酶对PGCL3细胞表面表达的CD9、CD42a、CD63、TSP的影响，阐 述它们对PGCL3细胞侵袭能力影响的机制。
1 材料
PGCL3(人肺巨细胞癌细胞系，在裸鼠体内具高转移能力[1])细胞来自北京医科大学 病 理学系，培养在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中。NIH 3T3细胞来自北京医科大学病 理学系，培养在含15%胎牛血清的DMEM培养基中，待细胞铺满瓶底80%时更换固定体积的新 培养液，24 h后收集培养上清备用。RPMI 1640和DMEM培养基来自GIBCO；新生牛血清来自杭 州四季青生物工程材料研究所；Matrigel来自北京医科大学细胞生物学系；直径12 mm、孔 径8 μm 的微孔聚碳膜(Polycarbonate filter)(Millipore)；抗TSP抗体(P10，IgG1) 、抗C D42a抗体(SZ1，IgG2a)、抗CD9抗体(ALB6，IgG1)、抗CD63抗体(CLBGran/12,IgG1)、IgG1(6 79.1Mc7)和IgG2a(U7.27)做同型对照，IgG1 FITC(679.1Mc7)、IgG1 PE(679.1Mc7)、Ig G2a FITC(U7.27)、CD9 FITC(ALB6，IgG1)、TSP PE(P10,IgG1)、CD42a FITC(SZ1,IgG2a) 、CD63 FITC(CLBGran/12,IgG1),以上单抗来自法国Immunotech。牛血清白蛋白Sigma。FACS ort流式细胞仪为美国BD公司产品。
, 百拇医药
2 方法
2.1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响：用0.02%EDTANa2消化PGCL3细胞，用 无血清PRMI 1640洗2遍，将NIH 3T3细胞培养上清液作为化学趋化物加入Boyden小室下室， 在上、下室之间加入多孔聚碳膜，该膜预先铺好Matrigel 0.05 mg,在每个小室上室加入1 .2×105个细胞。细胞用0.2 g/L单克隆抗体在室温处理20 min后加入小室上室，对照组 采用IgG1或IgG2a作同型对照。在37℃、5% CO2中孵育6 h。反应结束后擦去膜上未穿过 细 胞，将膜以甲醇固定，Gimsa染色，显微镜下观察并计数全部细胞，每组细胞设3个平行样本 ，重复2次。穿膜抑制率的计算公式如下：
2.2 不同药物对PGCL3细胞所表达血小板免疫相关抗原的影响：PGCL3细胞用0.02%E DTANa2消化，以D-Hanks液(pH7.4)吹打收集细胞，以0.5%的PBA(PBS牛血清白蛋 白) 洗2遍，复悬于0.5%PBA溶液中。将PGCL3细胞分别以终浓度为2.5、10、20 mg/L的川芎嗪 和丹参酮ⅡA，100、500、1 000 U/L的凝血酶和水蛭素或相应溶媒在室温处理20 mi n后加入小室上室，在37℃、5% CO2中孵育。以0.5% PBA洗2遍，复悬于0.5%的PBA溶 液中。以CD42a FITC、TSP PE、CD9 FITC、CD63 FITC按常规方法标记染色，对照管采用IgG 1 FITC、IgG2a FITC或IgG1 PE。细胞终浓度为108～109个/L，抗体浓度为0.2 g/L。 在室温暗处标记反应30 min后，以0.5%PBA洗1遍，用终浓度0.1%PFA固定，置4℃冰箱贮 存待测，上机前过200目尼龙筛网，每个试验重复2～3次，每个样品收集104个细胞。
, http://www.100md.com
2.3 流式细胞仪测试条件：FSC电压E-1，增益6.14，线性；SSC电压320，增益1.00， 线性；FL1电压400，对数；FL2电压340，对数；激光功率15 mW，激发光波长488 nm。校正 机器后，先以前向角和侧向角散射光形成的散点图设定收集门，以固定条件收集样本。每个 样品管收集104个肿瘤细胞后进行分析。采用Macintosh Quadra 650计算机和Cell Quest 软件收集处理样品数据。
3 结果
3.1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响：利用Boyden小室的单抗阻断研究显示，抗C D9单抗处理PGCL3细胞导致细胞侵袭能力的明显增强，而以抗CD42a、TSP和CD63抗体处理 的PGCL3细胞侵袭能力有不同程度下降，见图1。
, 百拇医药 图1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响
3.2 不同药物对PGCL3细胞所表达血小板免疫相关抗原的影响：川芎嗪可使CD9+、CD4 2a+、TSP+细胞的数目减少，还可使PGCL3细胞表面CD9的表达下降，但它对CD42a和TS P的表达影响不大，川芎嗪对CD63没有明显影响。丹参酮ⅡA使CD9的表达有所上升， C D63的表达有所下降，但对二者阳性的细胞数目无明显影响。丹参酮ⅡA可使CD42a + 、TSP+的细胞数目下降，减弱CD42a的表达，对TSP的表达无明显影响。水蛭素在较大剂量 时才使CD9的表达有所减弱，可使CD42a+、CD63+细胞的比例下降，并使CD63和CD42a的 表达有所减弱。水蛭素对TSP无明显影响。凝血酶使CD9的表达有所减弱，还使CD42a+的细 胞数目减少，表达有所下降，它对CD63和TSP的表达均无明显影响(见表1、2)。
, 百拇医药
表1 不同药物对PGCL3细胞膜表面不同抗原表达的影响 药物
剂量
CD9
CD42a
CD63
TSP
(mg/L)
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
, 百拇医药
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
川芎嗪
溶媒对照
9250
38.68
5388
16.47
5945
20.87
3990
11.21
, 百拇医药
2.5
9216
29.93
3 947
17.64
6 645
25.02
3 522
12.04
10
8 624
30.43
3 928
, http://www.100md.com
17.66
6 222
21.90
2 995
10.45
20
8 460
29.88
2 715
14.33
6 023
23.13
2 676
, http://www.100md.com
11. 39
丹参酮ⅡA
溶媒对照
9 235
31.71
3 924
17.41
6367
23.06
3467
12.26
2.5
9050
, 百拇医药
30.49
1455
15.00
5917
21.84
3004
12.09
10
9195
33.91
1131
13.39
5687
, http://www.100md.com
21.13
2288
11.77
20
9334
39.39
2432
13.81
6072
21.54
2873
10.71
表2 不同药物对PGCL3细胞膜表面不同抗原表达 的影响 药物
, http://www.100md.com
剂量
CD9
CD42a
CD63
TSP
(U/L)
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
, http://www.100md.com
平均荧光
水蛭素
溶媒对照
9 131
32.17
4 946
18.00
6 248
22.21
3 764
13.26
50
9 007
, http://www.100md.com
32.34
4 281
16.10
5 380
17.59
3 979
13.26
500
9 055
31.87
3 819
14.03
5 030
, 百拇医药
19.79
3846
12.46
1 000
8850
27.61
3611
15.64
4716
18.28
3830
12.36
凝血酶
, http://www.100md.com
溶媒对照
9131
32.17
4946
20.05
6248
22.21
3764
13.26
50
9159
31.23
4501
, 百拇医药
18.00
6669
21.07
3468
12.82
500
9095
29.30
3513
16.12
6313
21.69
3922
, http://www.100md.com
12.41
1000
8832
27.77
3087
15.12
6600
21.80
3397
12.58
4 讨论 我们在11种人肿瘤细胞表面均发现有血小板免疫相关抗原CC9、CD42a、CD63和TSP的表达。C D9、CD42a、CD63和TSP通过与宿主细胞和宿主体内的生物活性物质(包括血小板、内皮细胞 和内皮下基质)的粘附受体与配基的相互识别与结合，对肿瘤细胞的运动、粘附和播散起着 不同的作用。CD9对肿瘤的转移有抑制作用[2～4]，CD42a和TSP[5，6]的 高表达对肿瘤的转移有促进作用，但对CD63的看法尚不一致[2，7，8]。川芎嗪、 丹参酮ⅡA、水蛭素、凝血酶对CD9、CD42a、CD63和TSP影响的真正意义还不清楚。
, 百拇医药
我们在PGCL3细胞对铺有纤维粘连蛋白的细胞培养板的粘附实验中发现，川芎嗪、水蛭素 、凝血酶均有促进PGCL3细胞粘附的作用，丹参酮ⅡA对这个过程有较为明显的抑制 作用。在Boyden小室的实验中，凝血酶仍然表现出对PGCL3细胞和与血小板相互作用后PGCL3 细胞侵袭的促进作用，而川芎嗪、丹参酮ⅡA和水蛭素则对此显示了抑制作用。川芎 嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素分别对CD42a、TSP不同程度的削弱作用可能是对肿 瘤细 胞与血小板在肿瘤侵袭转移过程中相互协同作用进行抑制的机制之一。这个改变也可以用来 解释削弱PGCL3细胞对内皮和内皮下基质粘附的机制。川芎嗪对CD9的明显抑制作用和丹参酮 ⅡA对CD9表达的增强很可能会影响到肿瘤细胞的运动和粘附过程，也许可以用来解 释两种药物不同的作用机制，值得进一步探讨。丹参酮ⅡA和水蛭素对CD63的轻度抑 制作用可能与其抑制肿瘤细胞侵袭和转移的能力有关；凝血酶使CD9表达的减弱与其促进肿 瘤细胞的侵袭和转移可能有直接关系，凝血酶对CD42a表达的减弱可能出自其使血小板CD42a 减少的同一原理[9]，对肿瘤细胞的侵袭有促进作用。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 吴秉铨，等.中华肿瘤杂志，1985，7(5)：324
2 Wright M D, et al. Immunol Today, 1994, 15:588
3 Ikeyama S, et al. J Exp Med, 1993, 177:1231
4 Miyake M, et al. Cancer Res, 1996,56：1244
5 Walz-D A. Cancer Metastasis Rev, 1992,11:313
6 Incardona F, et al. Cancer Res, 1995,55:166
7 Metzelaar M J, et al. J Biol Chem, 1991,266:3239
8 Demetrick D J, et al. J Nat Cancer Inst, 1992,84:422
9 Michelson A D, et al. Blood, 1991,77:770
(1998-08-11收稿), 百拇医药
单位：张培彤 裴迎霞 祁 鑫 朴炳奎 中国中医研究院广安门医院(北京 100053)
关键词：川芎嗪；丹参酮ⅡA；水蛭素；凝血酶；血小板免疫；相关抗原
990515 摘 要 利用铺有Matrigel的Boyden小室观察抗CD9、抗CD42a、抗CD 63、抗TS P抗体对PGCL3细胞侵袭作用的影响；采用流式细胞术观察2.5、10、20 mg/L的川芎嗪、丹 参酮ⅡA和50、500、1 000 U/L的水蛭素和凝血酶对PGCL3细胞膜表面CD9、CD42a、CD 63、TSP表达的影响，观察川芎嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素和凝血酶对人肺巨细胞癌PGCL 3细胞表面血小板免疫相关抗原CD9、CD42a、CD63和TSP表达的影响，部分阐述各种药物对 肿瘤粘附和侵袭影响的不同作用机制。结果抗CD9抗体明显增加PGCL3细胞的侵袭，而抗CD 42a、抗CD63、抗TSP抗体不同程度减少PGCL3细胞的侵袭。川芎嗪可使CD9+、CD42a+ 、TSP+细胞的数目减少，PGCL3细胞表面CD9的表达减少；丹参酮ⅡA使CD9的表达 有所增加，CD63和CD42a的表达有所下降，CD42a+、TSP+的细胞数目下降；水蛭素使CD9 、CD63和CD42a的表达有所减弱，CD42a+、CD63+细胞的比例下降；凝血酶使CD9和CD42a 的表达有所减弱，并使CD42a+的细胞数目减少。提示川芎嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素 和凝血酶对PGCL3细胞表面表达的血小板免疫相关抗原CD9、CD42a、CD63、TSP的不同影响 可能与它们对PGCL3细胞粘附和侵袭的不同作用有关。
, 百拇医药
Effects of Certain Drugs on the Expression of Antigens
on Human Pulmonary Giant Cell Carcinoma
Zhang Peitong, Pei Yingxia, Qi Xin, et al.
(Guang′anmen Hospit al, Academy of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100053)
Abstract Effects of tetramethylpyrazine(Ⅰ), tanshinone ⅡA(Ⅱ)， hirudin(Ⅲ) and thrombin(Ⅳ) on the expression of CD9, CD24a, CD63 a nd TSP on human pulmonary giant cell carcinoma (PGCL3) were investigated by Boy den Chamber covered with Matrigel with the aid of flow cytometry. Results showe d that anti-CD9 antibody significantly augmented, while the other three antibod ies (anti CD42a,anti CD63 and anti TSP), impaired the invasive potentials of PGC L3.Ⅰ decreased the expression of CD9 and the number of CD9+, CD42a+ and TS P+ cells; Ⅱ increased the expression of CD9, but decreased the expression of CD63 and CD42a as well as the number of CD42a+and TSP+cells;Ⅲ decreased bo th the expression of CD9, CD63 and CD42a and the number of CD42a+ and CD63+ cells; and Ⅳ decreased the expression of CD9, CD42a and the number of CD42a+ cells. The different effects of these drugs on the expression of antigens immun ologically related to platelet on PGCL3 cell surface may be related to their di fferent influential actions on the adhesion and invasion of PGCL3 cells.
, 百拇医药
Key words tetramethylpyrazine tanshinone ⅡA hirudin thrombin flow cytometry antigen immunologically related to platelet adhesio n and invasion
血小板与恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关，血小板表达的粘附蛋白和肿瘤细胞表面表达的血 小板免疫相关抗原起着重要作用。已发现在11种人肿瘤细胞表面均表达CD9、CD42a、 CD63、TSP等4种血小板免疫相关抗原。我们试图观察不同浓度活血药单体川芎嗪、水蛭素、 丹参酮ⅡA以及凝血酶对PGCL3细胞表面表达的CD9、CD42a、CD63、TSP的影响，阐 述它们对PGCL3细胞侵袭能力影响的机制。
1 材料
PGCL3(人肺巨细胞癌细胞系，在裸鼠体内具高转移能力[1])细胞来自北京医科大学 病 理学系，培养在含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中。NIH 3T3细胞来自北京医科大学病 理学系，培养在含15%胎牛血清的DMEM培养基中，待细胞铺满瓶底80%时更换固定体积的新 培养液，24 h后收集培养上清备用。RPMI 1640和DMEM培养基来自GIBCO；新生牛血清来自杭 州四季青生物工程材料研究所；Matrigel来自北京医科大学细胞生物学系；直径12 mm、孔 径8 μm 的微孔聚碳膜(Polycarbonate filter)(Millipore)；抗TSP抗体(P10，IgG1) 、抗C D42a抗体(SZ1，IgG2a)、抗CD9抗体(ALB6，IgG1)、抗CD63抗体(CLBGran/12,IgG1)、IgG1(6 79.1Mc7)和IgG2a(U7.27)做同型对照，IgG1 FITC(679.1Mc7)、IgG1 PE(679.1Mc7)、Ig G2a FITC(U7.27)、CD9 FITC(ALB6，IgG1)、TSP PE(P10,IgG1)、CD42a FITC(SZ1,IgG2a) 、CD63 FITC(CLBGran/12,IgG1),以上单抗来自法国Immunotech。牛血清白蛋白Sigma。FACS ort流式细胞仪为美国BD公司产品。
, 百拇医药
2 方法
2.1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响：用0.02%EDTANa2消化PGCL3细胞，用 无血清PRMI 1640洗2遍，将NIH 3T3细胞培养上清液作为化学趋化物加入Boyden小室下室， 在上、下室之间加入多孔聚碳膜，该膜预先铺好Matrigel 0.05 mg,在每个小室上室加入1 .2×105个细胞。细胞用0.2 g/L单克隆抗体在室温处理20 min后加入小室上室，对照组 采用IgG1或IgG2a作同型对照。在37℃、5% CO2中孵育6 h。反应结束后擦去膜上未穿过 细 胞，将膜以甲醇固定，Gimsa染色，显微镜下观察并计数全部细胞，每组细胞设3个平行样本 ，重复2次。穿膜抑制率的计算公式如下：
2.2 不同药物对PGCL3细胞所表达血小板免疫相关抗原的影响：PGCL3细胞用0.02%E DTANa2消化，以D-Hanks液(pH7.4)吹打收集细胞，以0.5%的PBA(PBS牛血清白蛋 白) 洗2遍，复悬于0.5%PBA溶液中。将PGCL3细胞分别以终浓度为2.5、10、20 mg/L的川芎嗪 和丹参酮ⅡA，100、500、1 000 U/L的凝血酶和水蛭素或相应溶媒在室温处理20 mi n后加入小室上室，在37℃、5% CO2中孵育。以0.5% PBA洗2遍，复悬于0.5%的PBA溶 液中。以CD42a FITC、TSP PE、CD9 FITC、CD63 FITC按常规方法标记染色，对照管采用IgG 1 FITC、IgG2a FITC或IgG1 PE。细胞终浓度为108～109个/L，抗体浓度为0.2 g/L。 在室温暗处标记反应30 min后，以0.5%PBA洗1遍，用终浓度0.1%PFA固定，置4℃冰箱贮 存待测，上机前过200目尼龙筛网，每个试验重复2～3次，每个样品收集104个细胞。
, http://www.100md.com
2.3 流式细胞仪测试条件：FSC电压E-1，增益6.14，线性；SSC电压320，增益1.00， 线性；FL1电压400，对数；FL2电压340，对数；激光功率15 mW，激发光波长488 nm。校正 机器后，先以前向角和侧向角散射光形成的散点图设定收集门，以固定条件收集样本。每个 样品管收集104个肿瘤细胞后进行分析。采用Macintosh Quadra 650计算机和Cell Quest 软件收集处理样品数据。
3 结果
3.1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响：利用Boyden小室的单抗阻断研究显示，抗C D9单抗处理PGCL3细胞导致细胞侵袭能力的明显增强，而以抗CD42a、TSP和CD63抗体处理 的PGCL3细胞侵袭能力有不同程度下降，见图1。
, 百拇医药 图1 不同抗体对PGCL3细胞侵袭能力的影响
3.2 不同药物对PGCL3细胞所表达血小板免疫相关抗原的影响：川芎嗪可使CD9+、CD4 2a+、TSP+细胞的数目减少，还可使PGCL3细胞表面CD9的表达下降，但它对CD42a和TS P的表达影响不大，川芎嗪对CD63没有明显影响。丹参酮ⅡA使CD9的表达有所上升， C D63的表达有所下降，但对二者阳性的细胞数目无明显影响。丹参酮ⅡA可使CD42a + 、TSP+的细胞数目下降，减弱CD42a的表达，对TSP的表达无明显影响。水蛭素在较大剂量 时才使CD9的表达有所减弱，可使CD42a+、CD63+细胞的比例下降，并使CD63和CD42a的 表达有所减弱。水蛭素对TSP无明显影响。凝血酶使CD9的表达有所减弱，还使CD42a+的细 胞数目减少，表达有所下降，它对CD63和TSP的表达均无明显影响(见表1、2)。
, 百拇医药
表1 不同药物对PGCL3细胞膜表面不同抗原表达的影响 药物
剂量
CD9
CD42a
CD63
TSP
(mg/L)
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
, 百拇医药
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
川芎嗪
溶媒对照
9250
38.68
5388
16.47
5945
20.87
3990
11.21
, 百拇医药
2.5
9216
29.93
3 947
17.64
6 645
25.02
3 522
12.04
10
8 624
30.43
3 928
, http://www.100md.com
17.66
6 222
21.90
2 995
10.45
20
8 460
29.88
2 715
14.33
6 023
23.13
2 676
, http://www.100md.com
11. 39
丹参酮ⅡA
溶媒对照
9 235
31.71
3 924
17.41
6367
23.06
3467
12.26
2.5
9050
, 百拇医药
30.49
1455
15.00
5917
21.84
3004
12.09
10
9195
33.91
1131
13.39
5687
, http://www.100md.com
21.13
2288
11.77
20
9334
39.39
2432
13.81
6072
21.54
2873
10.71
表2 不同药物对PGCL3细胞膜表面不同抗原表达 的影响 药物
, http://www.100md.com
剂量
CD9
CD42a
CD63
TSP
(U/L)
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
平均荧光
阳性细胞
, http://www.100md.com
平均荧光
水蛭素
溶媒对照
9 131
32.17
4 946
18.00
6 248
22.21
3 764
13.26
50
9 007
, http://www.100md.com
32.34
4 281
16.10
5 380
17.59
3 979
13.26
500
9 055
31.87
3 819
14.03
5 030
, 百拇医药
19.79
3846
12.46
1 000
8850
27.61
3611
15.64
4716
18.28
3830
12.36
凝血酶
, http://www.100md.com
溶媒对照
9131
32.17
4946
20.05
6248
22.21
3764
13.26
50
9159
31.23
4501
, 百拇医药
18.00
6669
21.07
3468
12.82
500
9095
29.30
3513
16.12
6313
21.69
3922
, http://www.100md.com
12.41
1000
8832
27.77
3087
15.12
6600
21.80
3397
12.58
4 讨论 我们在11种人肿瘤细胞表面均发现有血小板免疫相关抗原CC9、CD42a、CD63和TSP的表达。C D9、CD42a、CD63和TSP通过与宿主细胞和宿主体内的生物活性物质(包括血小板、内皮细胞 和内皮下基质)的粘附受体与配基的相互识别与结合，对肿瘤细胞的运动、粘附和播散起着 不同的作用。CD9对肿瘤的转移有抑制作用[2～4]，CD42a和TSP[5，6]的 高表达对肿瘤的转移有促进作用，但对CD63的看法尚不一致[2，7，8]。川芎嗪、 丹参酮ⅡA、水蛭素、凝血酶对CD9、CD42a、CD63和TSP影响的真正意义还不清楚。
, 百拇医药
我们在PGCL3细胞对铺有纤维粘连蛋白的细胞培养板的粘附实验中发现，川芎嗪、水蛭素 、凝血酶均有促进PGCL3细胞粘附的作用，丹参酮ⅡA对这个过程有较为明显的抑制 作用。在Boyden小室的实验中，凝血酶仍然表现出对PGCL3细胞和与血小板相互作用后PGCL3 细胞侵袭的促进作用，而川芎嗪、丹参酮ⅡA和水蛭素则对此显示了抑制作用。川芎 嗪、丹参酮ⅡA、水蛭素分别对CD42a、TSP不同程度的削弱作用可能是对肿 瘤细 胞与血小板在肿瘤侵袭转移过程中相互协同作用进行抑制的机制之一。这个改变也可以用来 解释削弱PGCL3细胞对内皮和内皮下基质粘附的机制。川芎嗪对CD9的明显抑制作用和丹参酮 ⅡA对CD9表达的增强很可能会影响到肿瘤细胞的运动和粘附过程，也许可以用来解 释两种药物不同的作用机制，值得进一步探讨。丹参酮ⅡA和水蛭素对CD63的轻度抑 制作用可能与其抑制肿瘤细胞侵袭和转移的能力有关；凝血酶使CD9表达的减弱与其促进肿 瘤细胞的侵袭和转移可能有直接关系，凝血酶对CD42a表达的减弱可能出自其使血小板CD42a 减少的同一原理[9]，对肿瘤细胞的侵袭有促进作用。
, http://www.100md.com
参 考 文 献
1 吴秉铨，等.中华肿瘤杂志，1985，7(5)：324
2 Wright M D, et al. Immunol Today, 1994, 15:588
3 Ikeyama S, et al. J Exp Med, 1993, 177:1231
4 Miyake M, et al. Cancer Res, 1996,56：1244
5 Walz-D A. Cancer Metastasis Rev, 1992,11:313
6 Incardona F, et al. Cancer Res, 1995,55:166
7 Metzelaar M J, et al. J Biol Chem, 1991,266:3239
8 Demetrick D J, et al. J Nat Cancer Inst, 1992,84:422
9 Michelson A D, et al. Blood, 1991,77:770
(1998-08-11收稿), 百拇医药