不同活化剂对稳定态二氧化氯消毒效果的比较研究
作者:张 玮 侯秀丽 王淑凤
单位:山东省卫生防疫站,山东 济南 250014
关键词:稳定态二氧化氯;活化剂;盐酸;柠檬酸
疾病控制杂志990116
【摘要】 目的 比较盐酸和柠檬酸作为活化剂对稳定态二氧化氯的消毒效果。方法 以盐酸和柠檬酸作活化剂,评价稳定态二氧化氯的消毒效果。结果 当消毒剂为4.5 mg。L-1时,消毒2 min,对大肠杆菌的杀灭率分别为99.99%及78.00%,对金黄色葡萄球菌的杀灭率分别为99.99%及96.25%。当消毒剂为90 mg。L-1时,15 min对细菌芽孢的杀灭率分别为99.99%及97.00%。加10%小牛血清的菌悬液要达消毒效果,用盐酸活化只需180 mg。L-1作用5 min,而柠檬酸则需270 mg。L-1作用15 min。以盐酸为活化剂,二氧化氯200 mg。L-1,5 min即可灭活HBsAg;而柠檬酸则需400 mg。L-1。结论 作为稳定态二氧化氯的活化剂,盐酸明显地优于柠檬酸。
, http://www.100md.com
【中图分类号】 R187.1; R979.7 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)01-0039-03
Comparison of different acidic activator in the efficacy of disinfection of stable chlorine dioxide
Zhang Wei, Hou Xiuli, Wang Shufeng.
Shandong Provinical Public Health & Anti-Epidemic Station , Jinan 250014, China
【Abstract】 Objective To study which one has a better disinfecting effect on stable chlorine dioxide with hydrochloric-acid or citric-acid as activator. Methods Disinfecting effect was tested with the routine method in accordance with experiment disinfectant. Results The results showed that the efficacy of hydrochloric-acid as an activator excelled that of citric-acid as an activator. The outcomes demonstrated that the stable chlorine dioxide was activated by hydrochloric-acid and citric-acid respectively, the disinfectant containing 4.5 mg.L-1 available chlorine dioxide could kill 99.99% and 78.00% Escheritia. coli in 2 min contact time separately and the efficiency for staphylococcus. Aurreus were 99.99% and 96.25% respectively, the disinfectant solution containing 90 mg.L-1 available chlorine dioxide with 15 min contact time could kill 99.99% and 97.00% bacterial spores respectively when the suspension of the bacterial spores was mixed 10% calf serum and designed to reach the efficacy of disinfection only to need 15 min with 180 mg.L-1 chlorine dioxide which was activated by hydrochloric-acid, but with citric-acid would require 270 mg.L-1 in 15 min. When the stable chlorine dioxide was activated by hydrochloric-acid then the solution will contain 200 mg.L-1 available chlorine dioxide, which can lead to negative conversion for antigenicity of purified, HBsAg within 5 min by SPRLA method. If activated by citric-acid, would demand 400 mg.L-1 available chlorine dioxide.Conclusion As activators of stable chlorine dioxide, hydrochloric-acid was obviously better than citric-acid.
, 百拇医药
【Key words】 stable chlorine dioxide; activator; hydrochloricacid; citric-acid
在稳定条件下,二氧化氯杀菌作用弱,一旦加酸活化则杀菌效果迅猛出现。用不同活化剂活化稳定态二氧化氯的消毒效果不同。本文对盐酸与柠檬酸活化稳定态二氧化氯的消毒效果进行了比较。
1 材料与方法
1.1 试剂 稳定态二氧化氯,4%盐酸溶液,柠檬酸,5 g。L-1硫代硫酸钠磷酸盐缓冲液,HBsAg试剂盒(进口包被株)。
试验微生物 大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC 9372)。
1.2 方法
, http://www.100md.com
1.2.1 消毒剂的配制 稳定态二氧化氯分别用盐酸(1∶1)和固体柠檬酸(10∶1)活化。活化后的消毒液pH值分别为0.60及2.04,然后用无菌蒸馏水配制成所需浓度。
1.2.2 细菌悬液的制备 试验中使用的各种细菌悬液均按《消毒技术规范》[1]所规定方法制备。
1.2.3 定量杀菌试验 取消毒剂4.5 ml,加入0.5 ml菌悬液,作用不同时间后,取出1 ml样液,加9 ml含5 g。L-1硫代硫酸钠PBS,中和10 min,以PBS系列稀释,取1 ml稀释液以琼脂倾注法接种,每个稀释度接种2个平皿;37℃培养48 h,计数菌落。试验重复5次,计算其平均杀灭率,分析。每次试验设0.03 M磷酸盐缓冲液对照组。
1.2.4 有机物干扰试验 枯草杆菌黑色变种芽孢菌悬液中加入10%小牛血清,取0.5 ml,加消毒液4.5 ml。作用不同时间后,取出1 ml,加5 g。L-1硫代硫酸钠中和剂中和10 min后,进行适宜稀释。取后3个稀释度液体1 ml作琼脂倾注培养。每个稀释度接种2个平皿;37℃培养48 h,计数菌落。
, 百拇医药
1.2.5 HBsAg灭活试验 取纯化的HBsAg样品,按1∶4与消毒液混合,作用至预定时间,再加入等量中和剂溶液中和10 min。取样以SPRLA法检测HBsAg。以P/N≥2.1为阳性,<2.1为阴性。
2 结果
2.1 定量杀菌试验结果 在20℃条件下,经4%盐酸活化后二氧化氯溶液(简称消毒液)pH 0.60,经柠檬酸活化后的消毒液pH 2.04。
2.1.1 两种活化剂活化后的消毒液对大肠杆菌杀灭率的比较 经盐酸活化后的消毒液在二氧化氯为4.5 mg。L-1时,作用2 min的杀灭率达99.99%,作用5 min达100%;而经柠檬酸活化后的消毒液,在同一浓度下,作用2 min的杀灭率仅78.00%,5 min为99.94%,杀灭率达100%需二氧化氯9 mg。L-1作用5 min(表1)。
, 百拇医药
表1 两种活化剂活化后的消毒液对大肠杆菌杀灭率的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
2
5
10
4%HCl
, 百拇医药
4.5
99.9976
100.0000
100.0000
5.6×106
9.0
100.0000
100.0000
100.0000
18.0
100.0000
100.0000
, 百拇医药
100.0000
柠檬酸
4.5
78.0000
99.9366
99.9964
7.8×106
9.0
99.9987
100.0000
100.0000
18.0
, 百拇医药
100.0000
100.0000
100.0000
2.1.2 两种活化剂活化后的消毒液对金黄色葡萄球菌杀灭率的比较 经盐酸活化的消毒液,在二氧化氯为4.5 mg。L-1时,2 min杀灭率达99.990 3%,10 min达100%;而经柠檬酸活化的消毒液,4.5 mg。L-1时,2 min杀灭率只有96.251 6%,10 min才达到99.995 6%,杀灭率达100%需二氧化氯含量为18 mg。L-1(表2)。表2 两种活化剂活化后的消毒液对金黄色葡萄菌杀灭率的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
, 百拇医药
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
2
5
10
4%HCl
4.5
99.9903
99.9999
100.0000
, 百拇医药
5.3×106
9.0
99.9999
100.0000
100.0000
18.0
100.0000
100.0000
100.0000
柠檬酸
4.5
96.2516
, 百拇医药
99.9535
99.9956
5.1×106
9.0
99.9994
99.9998
99.9999
18.0
100.0000
100.0000
100.0000
2.1.3 两种活化剂活化后的消毒液对细菌芽孢杀灭率的比较 经盐酸活化后的消毒液,90 mg。L-1,5 min 杀灭率为96.093 5%,15 min杀灭率达99.99%以上,180 mg。L-1、10 min杀灭率达100%;而经柠檬酸活化的消毒液90 mg。L-1、5 min的杀灭率仅34.385 5%,需180 mg。L-1、15 min杀灭率才能达99.99%,20 min才能达100%(表3)。表3 两种活化剂活化后的消毒液对细菌芽孢杀灭率的比较 活化剂
, 百拇医药
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
5
10
15
20
4%HCl
, 百拇医药 90
96.0935
99.7909
99.9921
99.9993
5.3×106
135
99.8376
99.9959
99.9999
100.0000
180
, http://www.100md.com
99.9996
100.0000
100.0000
100.0000
柠檬酸
90
34.3355
78.6872
97.0028
99.7102
5.1×106
180
, http://www.100md.com
75.6704
99.7610
99.9993
100.0000
试验用细菌芽胞:枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)
2.2 有机物干扰试验 当菌悬液中加小牛血清后,用盐酸活化的消毒液为180 mg。L-1时,5 min杀灭率达99.99%,10 min达100%;而用柠檬酸活化的消毒液需270 mg。L-1、15 min杀灭率才能达到99.99%,20 min杀灭率仍未达100%(表4)。
表4 两种活化剂活化后的消毒液有机物干扰杀菌试验结果 活化剂
, 百拇医药
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
5
10
15
20
4%HCl
, 百拇医药 180
99.9961
100.00
100.00
100.00
4.7×106
柠檬酸
270
89.4637
99.5589
99.9985
99.9999
, 百拇医药
4.9×106
2.3 HBsAg破坏试验 用4%盐酸活化,消毒液200 mg。L-1, 5 min即可达到灭活效果;用柠檬酸活化,消毒液200 mg。L-1作用30 min仍为阳性,灭活HBsAg需400 mg。L-1(表5)。表5 两种活化剂活化后的消毒液对灭活HBsAg的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
HBsAg
含量
(μg。ml-1)
, 百拇医药
不同作用时间(min)灭活HBsAg结果
阳性
对照
5
10
15
30
4%HCl
100
10
+
+
+
, 百拇医药
+
+
200
10
-
-
-
-
-
400
10
-
-
-
, 百拇医药
-
-
柠檬酸
200
10
+
+
+
+
+
400
10
-
-
, 百拇医药
-
-
+
800
10
-
-
-
-
+
3 讨论
稳定态二氧化氯中的二氧化氯以亚氯酸盐形式存在,不游离,杀菌能力很弱。用于消毒、灭菌需于使用前加酸活化,释放出活性态二氧化氯才有杀菌作用[2]。自美国研制成功Anthium Dioxide以来,国外多以柠檬酸为活化剂[2]。用柠檬酸缓冲液(pH 4)活化,二氧化氯释放速度慢,活化不完全。梁增辉等[3]报道,稳定型二氧化氯的活化与pH有关,pH越低,溶液中活化二氧化氯越高,杀菌能力越强。本研究测定,以4%盐酸为活化剂,活化时pH 0.60,以柠檬酸活化时,pH 2.04。综上所述,以4%盐酸为稳定态二氧化氯消毒剂的活化剂明显优于柠檬酸。蒋兴锦等[4]报道,以草酸加三氯化铝、酒石酸加三氯化铝及柠檬酸加三氯化铝三组作为稳定型二氧化氯活化剂,测定结果,三组活化时pH值分别为<0.15、0.30、0.35;二氧化氯活化率分别为90.7%、90.2%、及71.8%。同样表明柠檬酸作为活化剂不理想。总之,盐酸是比柠檬酸更佳的稳定态二氧化氯活化剂。
, 百拇医药
作者简介:张 玮,男,36岁
参考文献
[1] 王云锋,王有森,白竟玉,等.消毒技术规范.北京:卫生部,1991.83~101.
[2] 黄志明主编.稳定性二氧化氯应用手册.上海:上海科学技术文献出版社,1993.6~9.
[3] 梁增辉,杨宗芬,王福玉,等.pH值对稳定型二氧化氯消毒剂活化影响的研究.中国消毒学杂志, 1990,7(1):1~5.
[4] 蒋兴锦,梁增辉,杨宗芬,等.稳定型二氧化氯活化剂的改进.中国消毒学杂志, 1990,7(2):105.
收稿日期 1998-12-16, http://www.100md.com
单位:山东省卫生防疫站,山东 济南 250014
关键词:稳定态二氧化氯;活化剂;盐酸;柠檬酸
疾病控制杂志990116
【摘要】 目的 比较盐酸和柠檬酸作为活化剂对稳定态二氧化氯的消毒效果。方法 以盐酸和柠檬酸作活化剂,评价稳定态二氧化氯的消毒效果。结果 当消毒剂为4.5 mg。L-1时,消毒2 min,对大肠杆菌的杀灭率分别为99.99%及78.00%,对金黄色葡萄球菌的杀灭率分别为99.99%及96.25%。当消毒剂为90 mg。L-1时,15 min对细菌芽孢的杀灭率分别为99.99%及97.00%。加10%小牛血清的菌悬液要达消毒效果,用盐酸活化只需180 mg。L-1作用5 min,而柠檬酸则需270 mg。L-1作用15 min。以盐酸为活化剂,二氧化氯200 mg。L-1,5 min即可灭活HBsAg;而柠檬酸则需400 mg。L-1。结论 作为稳定态二氧化氯的活化剂,盐酸明显地优于柠檬酸。
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【中图分类号】 R187.1; R979.7 【文献标识码】 A 【文章编号】 1008-6013(1999)01-0039-03
Comparison of different acidic activator in the efficacy of disinfection of stable chlorine dioxide
Zhang Wei, Hou Xiuli, Wang Shufeng.
Shandong Provinical Public Health & Anti-Epidemic Station , Jinan 250014, China
【Abstract】 Objective To study which one has a better disinfecting effect on stable chlorine dioxide with hydrochloric-acid or citric-acid as activator. Methods Disinfecting effect was tested with the routine method in accordance with experiment disinfectant. Results The results showed that the efficacy of hydrochloric-acid as an activator excelled that of citric-acid as an activator. The outcomes demonstrated that the stable chlorine dioxide was activated by hydrochloric-acid and citric-acid respectively, the disinfectant containing 4.5 mg.L-1 available chlorine dioxide could kill 99.99% and 78.00% Escheritia. coli in 2 min contact time separately and the efficiency for staphylococcus. Aurreus were 99.99% and 96.25% respectively, the disinfectant solution containing 90 mg.L-1 available chlorine dioxide with 15 min contact time could kill 99.99% and 97.00% bacterial spores respectively when the suspension of the bacterial spores was mixed 10% calf serum and designed to reach the efficacy of disinfection only to need 15 min with 180 mg.L-1 chlorine dioxide which was activated by hydrochloric-acid, but with citric-acid would require 270 mg.L-1 in 15 min. When the stable chlorine dioxide was activated by hydrochloric-acid then the solution will contain 200 mg.L-1 available chlorine dioxide, which can lead to negative conversion for antigenicity of purified, HBsAg within 5 min by SPRLA method. If activated by citric-acid, would demand 400 mg.L-1 available chlorine dioxide.Conclusion As activators of stable chlorine dioxide, hydrochloric-acid was obviously better than citric-acid.
, 百拇医药
【Key words】 stable chlorine dioxide; activator; hydrochloricacid; citric-acid
在稳定条件下,二氧化氯杀菌作用弱,一旦加酸活化则杀菌效果迅猛出现。用不同活化剂活化稳定态二氧化氯的消毒效果不同。本文对盐酸与柠檬酸活化稳定态二氧化氯的消毒效果进行了比较。
1 材料与方法
1.1 试剂 稳定态二氧化氯,4%盐酸溶液,柠檬酸,5 g。L-1硫代硫酸钠磷酸盐缓冲液,HBsAg试剂盒(进口包被株)。
试验微生物 大肠杆菌(8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC 9372)。
1.2 方法
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1.2.1 消毒剂的配制 稳定态二氧化氯分别用盐酸(1∶1)和固体柠檬酸(10∶1)活化。活化后的消毒液pH值分别为0.60及2.04,然后用无菌蒸馏水配制成所需浓度。
1.2.2 细菌悬液的制备 试验中使用的各种细菌悬液均按《消毒技术规范》[1]所规定方法制备。
1.2.3 定量杀菌试验 取消毒剂4.5 ml,加入0.5 ml菌悬液,作用不同时间后,取出1 ml样液,加9 ml含5 g。L-1硫代硫酸钠PBS,中和10 min,以PBS系列稀释,取1 ml稀释液以琼脂倾注法接种,每个稀释度接种2个平皿;37℃培养48 h,计数菌落。试验重复5次,计算其平均杀灭率,分析。每次试验设0.03 M磷酸盐缓冲液对照组。
1.2.4 有机物干扰试验 枯草杆菌黑色变种芽孢菌悬液中加入10%小牛血清,取0.5 ml,加消毒液4.5 ml。作用不同时间后,取出1 ml,加5 g。L-1硫代硫酸钠中和剂中和10 min后,进行适宜稀释。取后3个稀释度液体1 ml作琼脂倾注培养。每个稀释度接种2个平皿;37℃培养48 h,计数菌落。
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1.2.5 HBsAg灭活试验 取纯化的HBsAg样品,按1∶4与消毒液混合,作用至预定时间,再加入等量中和剂溶液中和10 min。取样以SPRLA法检测HBsAg。以P/N≥2.1为阳性,<2.1为阴性。
2 结果
2.1 定量杀菌试验结果 在20℃条件下,经4%盐酸活化后二氧化氯溶液(简称消毒液)pH 0.60,经柠檬酸活化后的消毒液pH 2.04。
2.1.1 两种活化剂活化后的消毒液对大肠杆菌杀灭率的比较 经盐酸活化后的消毒液在二氧化氯为4.5 mg。L-1时,作用2 min的杀灭率达99.99%,作用5 min达100%;而经柠檬酸活化后的消毒液,在同一浓度下,作用2 min的杀灭率仅78.00%,5 min为99.94%,杀灭率达100%需二氧化氯9 mg。L-1作用5 min(表1)。
, 百拇医药
表1 两种活化剂活化后的消毒液对大肠杆菌杀灭率的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
2
5
10
4%HCl
, 百拇医药
4.5
99.9976
100.0000
100.0000
5.6×106
9.0
100.0000
100.0000
100.0000
18.0
100.0000
100.0000
, 百拇医药
100.0000
柠檬酸
4.5
78.0000
99.9366
99.9964
7.8×106
9.0
99.9987
100.0000
100.0000
18.0
, 百拇医药
100.0000
100.0000
100.0000
2.1.2 两种活化剂活化后的消毒液对金黄色葡萄球菌杀灭率的比较 经盐酸活化的消毒液,在二氧化氯为4.5 mg。L-1时,2 min杀灭率达99.990 3%,10 min达100%;而经柠檬酸活化的消毒液,4.5 mg。L-1时,2 min杀灭率只有96.251 6%,10 min才达到99.995 6%,杀灭率达100%需二氧化氯含量为18 mg。L-1(表2)。表2 两种活化剂活化后的消毒液对金黄色葡萄菌杀灭率的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
, 百拇医药
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
2
5
10
4%HCl
4.5
99.9903
99.9999
100.0000
, 百拇医药
5.3×106
9.0
99.9999
100.0000
100.0000
18.0
100.0000
100.0000
100.0000
柠檬酸
4.5
96.2516
, 百拇医药
99.9535
99.9956
5.1×106
9.0
99.9994
99.9998
99.9999
18.0
100.0000
100.0000
100.0000
2.1.3 两种活化剂活化后的消毒液对细菌芽孢杀灭率的比较 经盐酸活化后的消毒液,90 mg。L-1,5 min 杀灭率为96.093 5%,15 min杀灭率达99.99%以上,180 mg。L-1、10 min杀灭率达100%;而经柠檬酸活化的消毒液90 mg。L-1、5 min的杀灭率仅34.385 5%,需180 mg。L-1、15 min杀灭率才能达99.99%,20 min才能达100%(表3)。表3 两种活化剂活化后的消毒液对细菌芽孢杀灭率的比较 活化剂
, 百拇医药
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
5
10
15
20
4%HCl
, 百拇医药 90
96.0935
99.7909
99.9921
99.9993
5.3×106
135
99.8376
99.9959
99.9999
100.0000
180
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99.9996
100.0000
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柠檬酸
90
34.3355
78.6872
97.0028
99.7102
5.1×106
180
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75.6704
99.7610
99.9993
100.0000
试验用细菌芽胞:枯草杆菌黑色变种芽胞(ATCC 9372)
2.2 有机物干扰试验 当菌悬液中加小牛血清后,用盐酸活化的消毒液为180 mg。L-1时,5 min杀灭率达99.99%,10 min达100%;而用柠檬酸活化的消毒液需270 mg。L-1、15 min杀灭率才能达到99.99%,20 min杀灭率仍未达100%(表4)。
表4 两种活化剂活化后的消毒液有机物干扰杀菌试验结果 活化剂
, 百拇医药
消毒液浓度
(mg。L-1)
不同作用时间(min)的杀灭率(%)
对照组回收
菌 量
(efu。ml-1)
5
10
15
20
4%HCl
, 百拇医药 180
99.9961
100.00
100.00
100.00
4.7×106
柠檬酸
270
89.4637
99.5589
99.9985
99.9999
, 百拇医药
4.9×106
2.3 HBsAg破坏试验 用4%盐酸活化,消毒液200 mg。L-1, 5 min即可达到灭活效果;用柠檬酸活化,消毒液200 mg。L-1作用30 min仍为阳性,灭活HBsAg需400 mg。L-1(表5)。表5 两种活化剂活化后的消毒液对灭活HBsAg的比较 活化剂
消毒液浓度
(mg。L-1)
HBsAg
含量
(μg。ml-1)
, 百拇医药
不同作用时间(min)灭活HBsAg结果
阳性
对照
5
10
15
30
4%HCl
100
10
+
+
+
, 百拇医药
+
+
200
10
-
-
-
-
-
400
10
-
-
-
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-
-
柠檬酸
200
10
+
+
+
+
+
400
10
-
-
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-
-
+
800
10
-
-
-
-
+
3 讨论
稳定态二氧化氯中的二氧化氯以亚氯酸盐形式存在,不游离,杀菌能力很弱。用于消毒、灭菌需于使用前加酸活化,释放出活性态二氧化氯才有杀菌作用[2]。自美国研制成功Anthium Dioxide以来,国外多以柠檬酸为活化剂[2]。用柠檬酸缓冲液(pH 4)活化,二氧化氯释放速度慢,活化不完全。梁增辉等[3]报道,稳定型二氧化氯的活化与pH有关,pH越低,溶液中活化二氧化氯越高,杀菌能力越强。本研究测定,以4%盐酸为活化剂,活化时pH 0.60,以柠檬酸活化时,pH 2.04。综上所述,以4%盐酸为稳定态二氧化氯消毒剂的活化剂明显优于柠檬酸。蒋兴锦等[4]报道,以草酸加三氯化铝、酒石酸加三氯化铝及柠檬酸加三氯化铝三组作为稳定型二氧化氯活化剂,测定结果,三组活化时pH值分别为<0.15、0.30、0.35;二氧化氯活化率分别为90.7%、90.2%、及71.8%。同样表明柠檬酸作为活化剂不理想。总之,盐酸是比柠檬酸更佳的稳定态二氧化氯活化剂。
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作者简介:张 玮,男,36岁
参考文献
[1] 王云锋,王有森,白竟玉,等.消毒技术规范.北京:卫生部,1991.83~101.
[2] 黄志明主编.稳定性二氧化氯应用手册.上海:上海科学技术文献出版社,1993.6~9.
[3] 梁增辉,杨宗芬,王福玉,等.pH值对稳定型二氧化氯消毒剂活化影响的研究.中国消毒学杂志, 1990,7(1):1~5.
[4] 蒋兴锦,梁增辉,杨宗芬,等.稳定型二氧化氯活化剂的改进.中国消毒学杂志, 1990,7(2):105.
收稿日期 1998-12-16, http://www.100md.com