大蒜注射剂的细菌内毒素检查
作者：罗勤 郑萍 李竹
单位：第一军医大学附属南方医院药学部 广州 510515
关键词：大蒜注射剂；鲎试剂；内毒素检测
中国现代应用药学000228 摘要 目的：考察大蒜注射剂内毒素的鲎试剂检查法。方法：通过增强/抑制试验，经过最大有效稀释后，可消除大蒜注射剂对鲎 试剂的干扰。结果：大蒜注射剂经过20倍稀释后，可选用灵敏度为0.125 Eu/ml的鲎试剂对其进行内毒素检测，并用家兔热原检查法进行对照试验，结果一致。结论：大蒜注射剂的热原试验可以由内毒素检查法取代。
The bacterial endotoxins test of garlicin injection
Luo Qin(Luo Q),Zheng Ping(Zheng P),Li Zhu(Li Z)
, http://www.100md.com
(Pharmaco logy Department of Nanfang Hospital of The First Miltary Medical Uniersity,Guang zhou 510515)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the b acterial endotoxins test of garlicin injection using limulus lysate agent. METHOD:To find the maximum valid dilution(MVD) according to inhibition/enh ancement test.RESULTS and CONCLUSION:When the limulus lysate′s sens itivity(λ) is 0.125Eu/ml,the maximum valid dilution is 1∶20.The result of bact erial endotoxins test is the same as that of pyrogen test with healthy mature ra bbits.
, 百拇医药
KEY WORDS garlicin injection,lymulus lysate agent,bacterial endotoxins test
大蒜注射剂(Garlicin injection)系由百合科植物蒜( Allium sativum L)经蒸馏提取而制得的抗真菌药物。以其抗真菌特别是抗深部真菌感染效 果良好、价格低廉、毒副作用少而越来越受到医生患者的重视。按其制剂标准[1], 该制剂需经家兔之热原试验合格后方可使用于临床。我们利用鲎试剂与细菌内毒素的凝集反 应，通过与兔法的对照实验，探讨了大蒜注射剂应用鲎试剂进行细菌内毒素检测的可能性。 现予报导。
1 实验材料
大蒜注射剂(本院生产制剂 ，批号:981022,980422,970722,970812和981106，按95版药典经家兔热原实验符合规定，并 在临床应用中未发现热原反应，实验数据略)。
, 百拇医药
细菌内毒素工作标准品(批号:980325,规格 :10Eu/支，厦门鲎试剂厂)。鲎试剂(批号:980327,灵敏度分别为:0.25Eu/ml,0.125Eu/ml,厦 门鲎试剂厂)。细菌内毒素检查用水(厦门鲎试剂厂)。家兔(符合热原实验之规定)。小试管 、注射器(经除热原处理)。恒温水浴锅，震荡器。
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度(λ)的复核
参照中国药典[1],对各种规格的鲎试剂进行复核，结果与标示灵敏度相同。
2.2 样品的干扰实验
2.2.1 细菌内毒素限值的确定 按规定,在大蒜 注射剂的热原试验中，家兔的注射剂量(M)为2ml/kg,我们认为细菌内毒素的阈值K=5Eu/kg [2],因此对大蒜注射剂而言，其细菌内毒素理论限值L=K/M=5/2=2.5Eu/ml。
, 百拇医药
2.2.2 样品最大有效稀释倍数(Maximum Valid Dilution,MVD) 按公式L /λ计算，当选用灵敏度(λ)为0.25Eu/ml的鲎试剂时，供试品的MVD为10倍，故用内毒素检 查用水将大蒜注射剂稀释为1∶1,1∶5,1∶10,1∶20,1∶40和1∶80的系列溶液，分别取0.1m l与灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂0.1ml(注：用细菌内毒素检查用水复溶)按药典规定进行反应，结果见表1。
表1 样品对鲎试剂的增强试验 鲎试剂
样品批号
样品稀释倍数
1∶1
1∶5
1∶10
1∶20
, 百拇医药
1∶40
1∶80
980327
981022
+
+
-
-
-
-
λ=0.25Eu/ml
970422
-
, 百拇医药
-
-
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-
970722
-
-
-
-
-
-
970812
-
, http://www.100md.com
-
-
-
-
-
981106
-
-
-
-
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-
2.2.3 在2.2制得的样品稀释后的系列溶液中，按批号分别取0.1ml 复溶灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂。
, http://www.100md.com
2.2.4 用细菌内毒素检查用水将内毒素稀释成0.5Eu/ml,分别取 0.1ml与2.3中复溶后的鲎试剂按药典规定[1]进行试验，结果见表2。
表2 样品对鲎试剂的抑制试验 鲎试剂
内毒素
浓度
样品批号
样品稀释倍数
1∶1
1∶5
1∶10
1∶20
1∶40
, 百拇医药
1∶80
980327
2λ
981022
+
+
+
+
+
+
λ=0.25
(0.5
970722
, http://www.100md.com
-
-
+
+
+
+
Eu/ml
Eu/ml)
970422
-
-
+
+
+
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+
970812
-
-
+
+
+
+
981106
-
-
+
+
+
, 百拇医药
+
2.2.5 表1、2显示，当大蒜注射剂稀释10倍以后，其对鲎试剂的干 扰作用消失，而此时所对应的鲎试剂的灵敏度λ为0.25Eu/ml。在以下的试验中，我们将样 品稀释20倍，稀释20倍，选用灵敏度为0.125Eu/ml的鲎试剂进行试验。
2.2.6 另取5批大蒜注射剂，将其分别稀释10倍，分次复溶灵敏度为0.125Eu/ml的鲎试剂，同时将内毒素(10Eu/支)用无热原水稀释成0.5,0.25,0.125,0.06和0.03，按中国药典进行细菌内毒素试验，结果见表3。表3 有效稀释后样品对鲎试剂灵敏度的干扰试验 鲎试剂
供试剂批号
内毒素浓度
阴性管
λC
, 百拇医药
0.5
0.25
0.125
0.06
0.03
980327
981022
+
-
-
-
-
-
, 百拇医药
0.25
λ=0.25
970422
+
-
-
-
-
-
0.25
(Eu/ml)
970722
+
, 百拇医药
-
-
-
-
-
0.25
970812
+
-
-
-
-
-
0.25
, 百拇医药
981106
+
-
-
-
-
-
0.25
3 结果与讨论3.1 表2表明，样品对鲎试剂的干扰作用是抑制作用，并随样品浓度的降低而 减小，一般情况下，样品稀释20倍以后，其对鲎试剂的干扰作用消失。从表1中可以得出，5 批样品中只有一批其对鲎试剂的干扰作用是增强作用，稀释10倍以后，这种增强作用消失。 其它各批样品对鲎试剂均无增强作用。
3.2 表3证明，样品稀释20倍以后，在其干扰试验中,λC都在0.5 ～2λ之间，按药典规定可以认为样品对鲎试剂的无干扰。
3.3 经过近60批样品的反复验证(数据略)，大蒜注射剂经过20倍稀 释后，其热原试验可以由内毒素检查法取代，选用的鲎试剂的灵敏度以0.125Eu/ml为宜。建 议同时做样品阳性管试验。
参考文献
1，中国药典.二部.1995∶附录76.
2，夏振民.细菌内毒素限值.药物分析杂志，1995，15(3)∶ 54.
收稿日期：1998-12-21, 百拇医药
单位：第一军医大学附属南方医院药学部 广州 510515
关键词：大蒜注射剂；鲎试剂；内毒素检测
中国现代应用药学000228 摘要 目的：考察大蒜注射剂内毒素的鲎试剂检查法。方法：通过增强/抑制试验，经过最大有效稀释后，可消除大蒜注射剂对鲎 试剂的干扰。结果：大蒜注射剂经过20倍稀释后，可选用灵敏度为0.125 Eu/ml的鲎试剂对其进行内毒素检测，并用家兔热原检查法进行对照试验，结果一致。结论：大蒜注射剂的热原试验可以由内毒素检查法取代。
The bacterial endotoxins test of garlicin injection
Luo Qin(Luo Q),Zheng Ping(Zheng P),Li Zhu(Li Z)
, http://www.100md.com
(Pharmaco logy Department of Nanfang Hospital of The First Miltary Medical Uniersity,Guang zhou 510515)
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the b acterial endotoxins test of garlicin injection using limulus lysate agent. METHOD:To find the maximum valid dilution(MVD) according to inhibition/enh ancement test.RESULTS and CONCLUSION:When the limulus lysate′s sens itivity(λ) is 0.125Eu/ml,the maximum valid dilution is 1∶20.The result of bact erial endotoxins test is the same as that of pyrogen test with healthy mature ra bbits.
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KEY WORDS garlicin injection,lymulus lysate agent,bacterial endotoxins test
大蒜注射剂(Garlicin injection)系由百合科植物蒜( Allium sativum L)经蒸馏提取而制得的抗真菌药物。以其抗真菌特别是抗深部真菌感染效 果良好、价格低廉、毒副作用少而越来越受到医生患者的重视。按其制剂标准[1], 该制剂需经家兔之热原试验合格后方可使用于临床。我们利用鲎试剂与细菌内毒素的凝集反 应，通过与兔法的对照实验，探讨了大蒜注射剂应用鲎试剂进行细菌内毒素检测的可能性。 现予报导。
1 实验材料
大蒜注射剂(本院生产制剂 ，批号:981022,980422,970722,970812和981106，按95版药典经家兔热原实验符合规定，并 在临床应用中未发现热原反应，实验数据略)。
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细菌内毒素工作标准品(批号:980325,规格 :10Eu/支，厦门鲎试剂厂)。鲎试剂(批号:980327,灵敏度分别为:0.25Eu/ml,0.125Eu/ml,厦 门鲎试剂厂)。细菌内毒素检查用水(厦门鲎试剂厂)。家兔(符合热原实验之规定)。小试管 、注射器(经除热原处理)。恒温水浴锅，震荡器。
2 实验方法与结果
2.1 鲎试剂灵敏度(λ)的复核
参照中国药典[1],对各种规格的鲎试剂进行复核，结果与标示灵敏度相同。
2.2 样品的干扰实验
2.2.1 细菌内毒素限值的确定 按规定,在大蒜 注射剂的热原试验中，家兔的注射剂量(M)为2ml/kg,我们认为细菌内毒素的阈值K=5Eu/kg [2],因此对大蒜注射剂而言，其细菌内毒素理论限值L=K/M=5/2=2.5Eu/ml。
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2.2.2 样品最大有效稀释倍数(Maximum Valid Dilution,MVD) 按公式L /λ计算，当选用灵敏度(λ)为0.25Eu/ml的鲎试剂时，供试品的MVD为10倍，故用内毒素检 查用水将大蒜注射剂稀释为1∶1,1∶5,1∶10,1∶20,1∶40和1∶80的系列溶液，分别取0.1m l与灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂0.1ml(注：用细菌内毒素检查用水复溶)按药典规定进行反应，结果见表1。
表1 样品对鲎试剂的增强试验 鲎试剂
样品批号
样品稀释倍数
1∶1
1∶5
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1∶80
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2.2.3 在2.2制得的样品稀释后的系列溶液中，按批号分别取0.1ml 复溶灵敏度为0.25Eu/ml的鲎试剂。
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2.2.4 用细菌内毒素检查用水将内毒素稀释成0.5Eu/ml,分别取 0.1ml与2.3中复溶后的鲎试剂按药典规定[1]进行试验，结果见表2。
表2 样品对鲎试剂的抑制试验 鲎试剂
内毒素
浓度
样品批号
样品稀释倍数
1∶1
1∶5
1∶10
1∶20
1∶40
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1∶80
980327
2λ
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λ=0.25
(0.5
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Eu/ml
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2.2.5 表1、2显示，当大蒜注射剂稀释10倍以后，其对鲎试剂的干 扰作用消失，而此时所对应的鲎试剂的灵敏度λ为0.25Eu/ml。在以下的试验中，我们将样 品稀释20倍，稀释20倍，选用灵敏度为0.125Eu/ml的鲎试剂进行试验。
2.2.6 另取5批大蒜注射剂，将其分别稀释10倍，分次复溶灵敏度为0.125Eu/ml的鲎试剂，同时将内毒素(10Eu/支)用无热原水稀释成0.5,0.25,0.125,0.06和0.03，按中国药典进行细菌内毒素试验，结果见表3。表3 有效稀释后样品对鲎试剂灵敏度的干扰试验 鲎试剂
供试剂批号
内毒素浓度
阴性管
λC
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3 结果与讨论3.1 表2表明，样品对鲎试剂的干扰作用是抑制作用，并随样品浓度的降低而 减小，一般情况下，样品稀释20倍以后，其对鲎试剂的干扰作用消失。从表1中可以得出，5 批样品中只有一批其对鲎试剂的干扰作用是增强作用，稀释10倍以后，这种增强作用消失。 其它各批样品对鲎试剂均无增强作用。
3.2 表3证明，样品稀释20倍以后，在其干扰试验中,λC都在0.5 ～2λ之间，按药典规定可以认为样品对鲎试剂的无干扰。
3.3 经过近60批样品的反复验证(数据略)，大蒜注射剂经过20倍稀 释后，其热原试验可以由内毒素检查法取代，选用的鲎试剂的灵敏度以0.125Eu/ml为宜。建 议同时做样品阳性管试验。
参考文献
1，中国药典.二部.1995∶附录76.
2，夏振民.细菌内毒素限值.药物分析杂志，1995，15(3)∶ 54.
收稿日期：1998-12-21, 百拇医药