甲状腺球蛋白抗体的IgG亚型与抗原结合的研究
作者：滕卫平 AP Weetman
单位：(中国医科大学附属第一医院内分泌教研室*)滕卫平；(英国剑桥大学临床医学院内科)AP Weetman
关键词：
中华医学杂志910630
甲状腺球蛋白抗体(TGA)是自身免疫性甲状腺疾病病人血清中的一种常见自身抗体。它主要由IgG1、IgG2和IgG4组成，少部分为IgA和IgM。其抗原——甲状腺球蛋白(Tg)的每个单体具有3个抗原决定簇与TGA结合[Clin Exp Immunol 1980;41:252]。我们制备了桥本氏甲状腺炎病人血清的IgG亚型抗体，应用竞争性酶联免疫吸咐试验(ELISA)和免疫沉淀两种方法，观察其与Tg结合的情况。
材料和方法：血清来源于9例桥本氏甲状腺炎病人。应用鼠抗人IgG亚型的单克隆抗体包裹琼脂糖凝胶-CL4B凝胶柱。200μl血清通过凝胶柱后，洗脱液中仅含一种IgG亚型(纯度大于99%)。再用ELISA方法证实血清没有IgA和IgM型TGA存在。(1)ELISA方法：Tg(20μg/ml)包裹酶标板过液(4℃)。加入1：500稀释的某IgG亚型5μl，再加入与其竞争的另一种IgG亚型50μl。对照则加入吐温-磷酸盐缓冲液(PBS-T)50μl(0.01mmol/L PBS，PH7.4，吐温20 0.01%)。室温孵育1小时。经PBS-T冲洗后，与第二抗体反应，1：1000的鼠抗人IgG亚型单克隆抗体100μl，室温孵育2小时。经冲洗后再加入碱性磷酸酶标记的抗鼠IgG及底物。结果用自动免疫酶标测定仪检测。(2)竞争性免疫沉淀方法：以125I标记的Tg(5×104cpm)为抗原，加样的设计同ELISA方法。血清与125I-Tg室温孵育5个小时，与鼠抗人IgG亚型单克隆抗体(1：2500)孵育16小时，4℃。最后用100μl包裹着抗鼠IgG的纤维素混悬液，分离其结合成游离的部分。用γ计数器计数沉淀率。
, http://www.100md.com
结果：竞争性ELISA结果显示，IgG4亚型与Tg的结合明显地被同体的IgG1和IgG2亚型抑制。(8例病人中7例抑制，两者P<0.005)。同样，IgG4亚型也抑制IgG2亚型与Tg的结合，抑制率为24±20%(P<0.005)。IgG1亚型与Tg的结合也被IgG2和IgG4亚型抑制，抑制率分别为30±24%和24±22%。(两者P<0.02)。竞争性免疫沉淀的结果显示：9例中8例病人的IgG4亚型的结合均被IgG1和IgG2亚型抑制(IgG1P<0.005；IgG2 P<0.001)。8例病人中的7例的IgG2亚型的结合被同体的IgG1亚型抑制(P<0.002)，9例病人的IgG2亚型的结合全部被IgG4亚型抑制(P<0.005)。IgG1和IgG4也抑制了IgG2亚型的结合，抑制率分别为23±14%和21±8%。我们还观察了IgG1和IgG2抑制IgG4与Tg结合的浓度稀释曲线，发现IgG4的结合率与IgG1和IgG2的浓度度呈现负相关的关系。
, 百拇医药
讨论：近些年来的研究表明：抗原的性质决定抗体为何种IgG亚型。碳水化合物抗原刺激往往产生IgG2和IgG4亚型为主的抗体。长期的受到某种抗原的刺激，则产生以IgG4为主的抗体，桥本氏甲状腺炎属于后一种情况。我们的结果显示，桥本氏甲状腺炎病人的TGA中的IgG亚型，在与Tg结合时，竞争性地与3个抗原决定簇结合，没有IgG亚型特异的抗原决定簇存在。这与Fukuma等的一项研究结果相反[Immunol 1989;67:129]。他们研究了两种TGA，一种是从人-鼠杂交瘤获得的IgG2单克隆抗体，另一种是一位桥本氏甲状腺炎病人未经纯化的IgG4抗体。他们认为两种IgG亚型有其特定的抗原决定簇。但是，绝大多数的TGA是多克隆的，我们从9例桥本氏甲状腺炎病人TGA中获得了这种抗体的IgG亚型与Tg结合时的特定方式，即不同的IgG亚型共同享用Tg表面的3个抗原决定簇，它们之间的结合呈现竞争抑制型。, http://www.100md.com
单位：(中国医科大学附属第一医院内分泌教研室*)滕卫平；(英国剑桥大学临床医学院内科)AP Weetman
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中华医学杂志910630
甲状腺球蛋白抗体(TGA)是自身免疫性甲状腺疾病病人血清中的一种常见自身抗体。它主要由IgG1、IgG2和IgG4组成，少部分为IgA和IgM。其抗原——甲状腺球蛋白(Tg)的每个单体具有3个抗原决定簇与TGA结合[Clin Exp Immunol 1980;41:252]。我们制备了桥本氏甲状腺炎病人血清的IgG亚型抗体，应用竞争性酶联免疫吸咐试验(ELISA)和免疫沉淀两种方法，观察其与Tg结合的情况。
材料和方法：血清来源于9例桥本氏甲状腺炎病人。应用鼠抗人IgG亚型的单克隆抗体包裹琼脂糖凝胶-CL4B凝胶柱。200μl血清通过凝胶柱后，洗脱液中仅含一种IgG亚型(纯度大于99%)。再用ELISA方法证实血清没有IgA和IgM型TGA存在。(1)ELISA方法：Tg(20μg/ml)包裹酶标板过液(4℃)。加入1：500稀释的某IgG亚型5μl，再加入与其竞争的另一种IgG亚型50μl。对照则加入吐温-磷酸盐缓冲液(PBS-T)50μl(0.01mmol/L PBS，PH7.4，吐温20 0.01%)。室温孵育1小时。经PBS-T冲洗后，与第二抗体反应，1：1000的鼠抗人IgG亚型单克隆抗体100μl，室温孵育2小时。经冲洗后再加入碱性磷酸酶标记的抗鼠IgG及底物。结果用自动免疫酶标测定仪检测。(2)竞争性免疫沉淀方法：以125I标记的Tg(5×104cpm)为抗原，加样的设计同ELISA方法。血清与125I-Tg室温孵育5个小时，与鼠抗人IgG亚型单克隆抗体(1：2500)孵育16小时，4℃。最后用100μl包裹着抗鼠IgG的纤维素混悬液，分离其结合成游离的部分。用γ计数器计数沉淀率。
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结果：竞争性ELISA结果显示，IgG4亚型与Tg的结合明显地被同体的IgG1和IgG2亚型抑制。(8例病人中7例抑制，两者P<0.005)。同样，IgG4亚型也抑制IgG2亚型与Tg的结合，抑制率为24±20%(P<0.005)。IgG1亚型与Tg的结合也被IgG2和IgG4亚型抑制，抑制率分别为30±24%和24±22%。(两者P<0.02)。竞争性免疫沉淀的结果显示：9例中8例病人的IgG4亚型的结合均被IgG1和IgG2亚型抑制(IgG1P<0.005；IgG2 P<0.001)。8例病人中的7例的IgG2亚型的结合被同体的IgG1亚型抑制(P<0.002)，9例病人的IgG2亚型的结合全部被IgG4亚型抑制(P<0.005)。IgG1和IgG4也抑制了IgG2亚型的结合，抑制率分别为23±14%和21±8%。我们还观察了IgG1和IgG2抑制IgG4与Tg结合的浓度稀释曲线，发现IgG4的结合率与IgG1和IgG2的浓度度呈现负相关的关系。
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讨论：近些年来的研究表明：抗原的性质决定抗体为何种IgG亚型。碳水化合物抗原刺激往往产生IgG2和IgG4亚型为主的抗体。长期的受到某种抗原的刺激，则产生以IgG4为主的抗体，桥本氏甲状腺炎属于后一种情况。我们的结果显示，桥本氏甲状腺炎病人的TGA中的IgG亚型，在与Tg结合时，竞争性地与3个抗原决定簇结合，没有IgG亚型特异的抗原决定簇存在。这与Fukuma等的一项研究结果相反[Immunol 1989;67:129]。他们研究了两种TGA，一种是从人-鼠杂交瘤获得的IgG2单克隆抗体，另一种是一位桥本氏甲状腺炎病人未经纯化的IgG4抗体。他们认为两种IgG亚型有其特定的抗原决定簇。但是，绝大多数的TGA是多克隆的，我们从9例桥本氏甲状腺炎病人TGA中获得了这种抗体的IgG亚型与Tg结合时的特定方式，即不同的IgG亚型共同享用Tg表面的3个抗原决定簇，它们之间的结合呈现竞争抑制型。, http://www.100md.com