从恐吓孕鼠对子鼠行为学的影响看老年期痴呆的病因
作者：胡汉波 王米渠 廖方正
单位：胡汉波 王米渠 廖方正(成都中医药大学 基础医学院,四川 成都 610075)
关键词：肾；老年性痴呆；情绪；行为医学
成都中医药大学学报990104 摘 要：观察轻度恐吓孕鼠对子鼠老年期学习、记忆反应能力的影响。方法：用猫不同程度恐吓孕鼠，造成“恐伤肾”的母鼠模型，对其轻度恐吓组和对照组子鼠在成年期和老年期，经过学习训练后，分别于次日和当日下午用25～45v电压给MG-2型Y迷津通电，电网中间放一无电跳台，进行逃离电网的跳台试验。结果：①两组成年期子鼠跳台试验结果相似；②老年期子鼠轻度恐吓组上跳台的时间为35.81s,明显长于对照组的16.81s。结论：即使轻度恐吓孕鼠也会损害子鼠老年期的逃生行为反应速度。提示此损伤与中医“肾”和老年性痴呆的关系可能具有重要意义。
中图分类号：RR228;R749.16 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(1999)01-0008-03
, 百拇医药
From the View of the Affection on Praxiological Changes
of Filial Generation Mice by Terroring Pregnant Mother Mice
to Consider the Etiopathogenesis of Senile Dementia
HU Hanbo, WANG Miqu, LIAO Fangzheng (胡汉波，等)
Basic Medicine College, Chengdu University of TCM (Chengdu, 610075,China)
SUMMARY：The learning and memory reaction of adult stage and sensescence filial generation mice by terroring pregnant mother mice were observed. The results showed that silight terroring pregnant mother mice could affected the learning and memory mechanism of sensescence filial generation mice. It was suggested that the etiopathogenesis of senile dementia probably occured in association with kidney in TCM.
, 百拇医药
KEY WORDS：Kidney; Senile dementia; Terroring; Praxiology
中医认为“肾藏志”、“在志为恐”，故而“恐伤肾”。“恐伤肾”引起小鼠垂体——性腺轴的形态改变已为现代中西医结合病理学研究所证实[1]。中医还认为：“肾者，作强之官，伎巧出焉”(《素问.灵兰秘典论》)，“肾为先天之本”，因此先天的不足将影响后天行为动作的发育和表现。中医又认为，“肾主骨生髓，髓充于脑”，肾亏是老年性呆病的主要原因[2，3]。根据上述中医认识，本课题在国内外首次探讨不同程度恐吓孕鼠对子鼠的行为学影响。本文主要报道轻度恐吓孕鼠对子鼠90日龄期和193日龄期行为学研究跳台试验的结果及由此产生的对老年期痴呆病因的思考。
1 材料和方法
1.1 动物
, http://www.100md.com
(1)昆明种封闭群小鼠，全价颗粒饲料喂养，购自卫生部成都生物制品研究所。
(2)家猫，4月龄雄性，土猫一只，凶狠善叫，鲜活小鼠喂养。
1.2 方法
(1)恐伤肾模型塑造：采用沈氏报道的猫吓鼠方法制造恐伤肾的自然模型[1]。
(2)亲代小白鼠分组及处理：小鼠在校动物中心实验室条件下驯化饲养四周，将雌鼠、雄鼠各随机分为4组，每组雌鼠12只，雄鼠6只，随机配对同居4日后，取出雄鼠。4组雌鼠分别为正常空白对照组、重度恐吓组、中度恐吓组和轻度恐吓组[8]。
(3)子代鼠分组及处理：交配后19天，母鼠陆续产仔，对随机交配后20日生产的1/3新生鼠处死，进行形态和免疫学等指标的测试，另外2/3的子鼠饲养一至数周后进行行为学测试。部分鼠相同条件饲养至成年期(90天±3天)和老年期(180天±3天)进行跳台试验研究。
, 百拇医药
(4)跳台试验：用申江电机厂生产的MG-2型Y迷津，在迷津的电网上通电，电网中央置一直径4cm，高2cm圆形的橡皮塞作为跳台。
成年期子鼠25只，雌性22g±3g，测试前一日教习子鼠从电网跳上跳台以躲避电击，电压20～30v，教会为止。正式测试时将子鼠放在通电25v电压的电网上，子鼠为逃避电击爬上跳台。观察小白鼠上下跳台的情况，记录子鼠从放入电网中央至四脚均离开电网，爬上跳台的时间(称上跳台时间)和电网通电2h内子鼠在跳台上停留的时间总和。结果用华西医科大学编制的PEMS统计软件进行统计学处理。
同两组鼠继续饲养4月后，成为进入老年期的子鼠，它们对30v电压多无反应，故预试时逐渐调升电压至45v，于实验当日上午教习2次，下午正式测试。将子鼠放在45v电压的电网上，记录鼠从电网到上跳台的时间，两组交替进行，连续两轮测试。每组处理方法完全相同。
两阶段鼠的学习和测试均为对照与恐吓组鼠依次交替进行，以减少测试时间不同可能造成的误差。
, 百拇医药
2 结果
2.1 成年期子鼠跳台试验结果(见表1)
表1 成年期子鼠从电网上跳台时间和在跳台上停留时间(s，
±s) 组 别
鼠日龄
性别
n
上跳台时间
跳台停留时间
对照组
90±3
♀
, http://www.100md.com
9
59.67±58.84
59.67±43.71
轻度恐吓组
90±3
♀
8
51.25±63.59
44.75±33.61
*与对照组比较 P>0.05。
2.2 老年期子鼠跳台试验的结果(见表2)
表2 老年期子鼠跳台试验从电网上跳台的时间(s，±s) 分 组
, 百拇医药
鼠日龄
性别
n
第一轮上跳台时间
第二轮上跳台时间
二轮合计
对照组
193±3
♀
8
19.50±7.05
14.13±6.83
16.81±7.25*
, 百拇医药
轻度恐吓组
193±3
♀
8
31.88±18.78
41.00±34.39
35.81±26.08*
*与对照组比较 P<0.05。
3 讨论
随着人类平均寿命的延长和人口老龄化的出现，痴呆对人类健康的危害变得日益突出和严重，已成为仅次于心脑血管病和癌症的第四大死亡原因。引起痴呆的疾病主要有阿尔茨海默病和多发性脑梗塞，然而目前对阿尔茨海默病和多发性脑梗塞防治的最大困难仍然是病因未明[10]。
, 百拇医药
中医认为人类生命的起源本之于肾，生长发育的动力来源于肾，衰老的成因归宿于肾。肾为先天之本。肾藏精，主骨生髓，上通于脑。脑为元阳(神)之府，是人体精髓和神明高度凝聚之所，人的视、听、嗅、感觉及思维记忆等皆出于脑。脑的这些功能又都在脑髓的充实下才能发挥。《灵枢.海论》说：“脑为髓之海”，“髓海有余，则轻劲有力，自过其度；髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧。”而髓海的充实又依赖于肾气的温煦、充养，“肾精不足，则志气衰，不能上通于心，故迷惑善忘也”(《医方集解》)。人在青春发育期，耳聪目明，体健神清，何也？肾气充之故也。《素问.上古天真论》云：“女子七岁，肾气盛，齿更发长……七七任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通……丈夫八岁，肾气实，发长齿更……八八天癸竭，精少，肾脏衰，形体皆极，则齿发去。”本病皆因时至老年，肾气已衰，精髓乏源，脑失所养，再加上其它因素诱发而成。王清任亦云：“高年乏记性者，脑髓渐空”。可见肾亏是导致老年痴呆病的根本原因。因此中医临床对老年呆病的防治，把补肾放在重要位置，认为“只有从补肾论治，固肾之本，才能维持机体的正常功能，使气血旺盛，肾精充足，神明之府得以充实，而防止脑衰老的发生。”[2]我们对1996年和1997年发表的与老年性痴呆有关的437篇论文进行分析，发现在中医临床治疗及疗效观察的论文中，大多都把肾亏与痴呆的关系放在重要位置，治疗组方上多以补肾活血法或补肾活血化瘀祛痰法来收治病人[3，4]。我们也曾按补肾活血法组方用黄精、熟地、丹参、远志等组成的脑力康制剂治疗老年痴呆病，结果在量表积分和中医临床观察指标的变化上，治疗前后都有明显改善[3]。我们在大鼠动物实验研究中也取得了明显疗效。现代中药药理学的研究也发现不少补肾中药如刺五加、五味子、鹿茸等有改善神经细胞代谢和功能的作用[4，5]。
, 百拇医药
近3年来，我们以中医基本理论“肾为先天之本”、“肾为作强之官”、“肾在志为恐，恐则伤肾”的思想为指导，在国家自然科学基金资助项目“‘肾为先天之本’的遗传行为研究”中，用猫恐吓刺激母代孕鼠的自然方法造模，对子代鼠进行多项指标的动态观察，发现：①中、重度恐吓孕鼠可引起新生子鼠脑内神经细胞减少、神经细胞胞浆空泡样变性，线粒体肿胀变形、肌质网扩张[6]。②中、重度恐吓组新生期、90日龄和小于90日龄子鼠饥饿时巷道取食速度、学习后逃离电网速度等行为活动能力明显差于轻度恐吓组、正常对照组和金匮肾气丸补肾反证组[7，8]。③在90及90龄前的研究中，轻度恐吓组与正常对照组子鼠的行为学反应及脑细胞形态上的差异均无统计学意义。
逃离电击区、走向安全区，是动物适应环境的本能反应，经过学习训练后的小白鼠，这种逃离电击区的快慢以及它们在安全区停留的时间的长短，可以反映小白鼠的记忆能力，从而间接反映其保护自身的生存能力[9]。本文主要报道的是在实验中，当我们无意中将其中两组各8只子鼠同等条件饲养到193日龄进行行为学测试时，意外发现在成年期上台时间与正常对照组无明显差异的两组子鼠到老年期这种差异就明显表现出来，从电网上到跳台的时间轻度恐吓组为35.81秒，是正常对照组的2.2倍，反应明显迟钝(见表2)[9]。我们的这些研究结果再次提示：痴呆(尤其是老年性痴呆)与中医的“肾”有着密切的联系。相信探讨这种联系对中医“肾”与神经生长发育和损伤关系的研究以及中医补肾活血法治疗老年性痴呆病的研究均具有十分重要的意义。
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570848)
作者简介：胡汉波，女，1962年11月生；医学硕士，副教授；中西医结合(基础)专业；研究方向：情绪行为与时间医学。
参考文献
[1]沈雁，匡调元，张伟荣等.“恐伤肾”的实验研究，中国医药学报，1991，(1)，13-16
[2]何华 . 补肾活血化痰法治疗老年性痴呆初探. 实用中西医结合杂志, 1997，10(13)：12
[3]廖方正，李青.脑力康对老年痴呆病的疗效观察. 成都中医药大学学报, 1996，(1)：20
[4]马怡，徐秋萍.中药抗成年后痴呆的实验药理研究情况.中国实验方剂学杂志, 1997，(1)：24，39
, http://www.100md.com
[5]黄丽萍，黄敬耀.中药抗老年性痴呆作用研究进展.江西中医学院学报, 1997，(1)：53
[6]王米渠，曾祥国，马向东等. 恐伤肾造模对子代鼠脑超微结构的观察.成都中医药大学学报, 1996，(4)：37
[7]王米渠，胡光月，马向东等.“恐伤肾”对子鼠作强行为的遗传学研究. 上海中医药杂志, 1997，(7)：42
[8]胡汉波，王米渠，余曙光等.恐吓孕鼠对子鼠成年期和成年后行为学影响的跳台实验研究 .中国行为医学杂志，1998，(2)：83
[9]李德明. 婴鼠Y迷津吸乳分辩学习行为的发展与脑生长和旋转行为关系的实验研究，心理学报，1988，(4)：411
[10]彭剑.阿尔茨海默病治疗方法的研究进展.国外医学*合成药生化制剂分册.1997，(3)：160
(收稿日期：1998-12-16), 百拇医药
单位：胡汉波 王米渠 廖方正(成都中医药大学 基础医学院,四川 成都 610075)
关键词：肾；老年性痴呆；情绪；行为医学
成都中医药大学学报990104 摘 要：观察轻度恐吓孕鼠对子鼠老年期学习、记忆反应能力的影响。方法：用猫不同程度恐吓孕鼠，造成“恐伤肾”的母鼠模型，对其轻度恐吓组和对照组子鼠在成年期和老年期，经过学习训练后，分别于次日和当日下午用25～45v电压给MG-2型Y迷津通电，电网中间放一无电跳台，进行逃离电网的跳台试验。结果：①两组成年期子鼠跳台试验结果相似；②老年期子鼠轻度恐吓组上跳台的时间为35.81s,明显长于对照组的16.81s。结论：即使轻度恐吓孕鼠也会损害子鼠老年期的逃生行为反应速度。提示此损伤与中医“肾”和老年性痴呆的关系可能具有重要意义。
中图分类号：RR228;R749.16 文献标识码：A 文章编号：1004-0668(1999)01-0008-03
, 百拇医药
From the View of the Affection on Praxiological Changes
of Filial Generation Mice by Terroring Pregnant Mother Mice
to Consider the Etiopathogenesis of Senile Dementia
HU Hanbo, WANG Miqu, LIAO Fangzheng (胡汉波，等)
Basic Medicine College, Chengdu University of TCM (Chengdu, 610075,China)
SUMMARY：The learning and memory reaction of adult stage and sensescence filial generation mice by terroring pregnant mother mice were observed. The results showed that silight terroring pregnant mother mice could affected the learning and memory mechanism of sensescence filial generation mice. It was suggested that the etiopathogenesis of senile dementia probably occured in association with kidney in TCM.
, 百拇医药
KEY WORDS：Kidney; Senile dementia; Terroring; Praxiology
中医认为“肾藏志”、“在志为恐”，故而“恐伤肾”。“恐伤肾”引起小鼠垂体——性腺轴的形态改变已为现代中西医结合病理学研究所证实[1]。中医还认为：“肾者，作强之官，伎巧出焉”(《素问.灵兰秘典论》)，“肾为先天之本”，因此先天的不足将影响后天行为动作的发育和表现。中医又认为，“肾主骨生髓，髓充于脑”，肾亏是老年性呆病的主要原因[2，3]。根据上述中医认识，本课题在国内外首次探讨不同程度恐吓孕鼠对子鼠的行为学影响。本文主要报道轻度恐吓孕鼠对子鼠90日龄期和193日龄期行为学研究跳台试验的结果及由此产生的对老年期痴呆病因的思考。
1 材料和方法
1.1 动物
, http://www.100md.com
(1)昆明种封闭群小鼠，全价颗粒饲料喂养，购自卫生部成都生物制品研究所。
(2)家猫，4月龄雄性，土猫一只，凶狠善叫，鲜活小鼠喂养。
1.2 方法
(1)恐伤肾模型塑造：采用沈氏报道的猫吓鼠方法制造恐伤肾的自然模型[1]。
(2)亲代小白鼠分组及处理：小鼠在校动物中心实验室条件下驯化饲养四周，将雌鼠、雄鼠各随机分为4组，每组雌鼠12只，雄鼠6只，随机配对同居4日后，取出雄鼠。4组雌鼠分别为正常空白对照组、重度恐吓组、中度恐吓组和轻度恐吓组[8]。
(3)子代鼠分组及处理：交配后19天，母鼠陆续产仔，对随机交配后20日生产的1/3新生鼠处死，进行形态和免疫学等指标的测试，另外2/3的子鼠饲养一至数周后进行行为学测试。部分鼠相同条件饲养至成年期(90天±3天)和老年期(180天±3天)进行跳台试验研究。
, 百拇医药
(4)跳台试验：用申江电机厂生产的MG-2型Y迷津，在迷津的电网上通电，电网中央置一直径4cm，高2cm圆形的橡皮塞作为跳台。
成年期子鼠25只，雌性22g±3g，测试前一日教习子鼠从电网跳上跳台以躲避电击，电压20～30v，教会为止。正式测试时将子鼠放在通电25v电压的电网上，子鼠为逃避电击爬上跳台。观察小白鼠上下跳台的情况，记录子鼠从放入电网中央至四脚均离开电网，爬上跳台的时间(称上跳台时间)和电网通电2h内子鼠在跳台上停留的时间总和。结果用华西医科大学编制的PEMS统计软件进行统计学处理。
同两组鼠继续饲养4月后，成为进入老年期的子鼠，它们对30v电压多无反应，故预试时逐渐调升电压至45v，于实验当日上午教习2次，下午正式测试。将子鼠放在45v电压的电网上，记录鼠从电网到上跳台的时间，两组交替进行，连续两轮测试。每组处理方法完全相同。
两阶段鼠的学习和测试均为对照与恐吓组鼠依次交替进行，以减少测试时间不同可能造成的误差。
, 百拇医药
2 结果
2.1 成年期子鼠跳台试验结果(见表1)
表1 成年期子鼠从电网上跳台时间和在跳台上停留时间(s，
±s) 组 别鼠日龄
性别
n
上跳台时间
跳台停留时间
对照组
90±3
♀
, http://www.100md.com
9
59.67±58.84
59.67±43.71
轻度恐吓组
90±3
♀
8
51.25±63.59
44.75±33.61
*与对照组比较 P>0.05。
2.2 老年期子鼠跳台试验的结果(见表2)
表2 老年期子鼠跳台试验从电网上跳台的时间(s，
±s) 分 组, 百拇医药
鼠日龄
性别
n
第一轮上跳台时间
第二轮上跳台时间
二轮合计
对照组
193±3
♀
8
19.50±7.05
14.13±6.83
16.81±7.25*
, 百拇医药
轻度恐吓组
193±3
♀
8
31.88±18.78
41.00±34.39
35.81±26.08*
*与对照组比较 P<0.05。
3 讨论
随着人类平均寿命的延长和人口老龄化的出现，痴呆对人类健康的危害变得日益突出和严重，已成为仅次于心脑血管病和癌症的第四大死亡原因。引起痴呆的疾病主要有阿尔茨海默病和多发性脑梗塞，然而目前对阿尔茨海默病和多发性脑梗塞防治的最大困难仍然是病因未明[10]。
, 百拇医药
中医认为人类生命的起源本之于肾，生长发育的动力来源于肾，衰老的成因归宿于肾。肾为先天之本。肾藏精，主骨生髓，上通于脑。脑为元阳(神)之府，是人体精髓和神明高度凝聚之所，人的视、听、嗅、感觉及思维记忆等皆出于脑。脑的这些功能又都在脑髓的充实下才能发挥。《灵枢.海论》说：“脑为髓之海”，“髓海有余，则轻劲有力，自过其度；髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧。”而髓海的充实又依赖于肾气的温煦、充养，“肾精不足，则志气衰，不能上通于心，故迷惑善忘也”(《医方集解》)。人在青春发育期，耳聪目明，体健神清，何也？肾气充之故也。《素问.上古天真论》云：“女子七岁，肾气盛，齿更发长……七七任脉虚，太冲脉衰少，天癸竭，地道不通……丈夫八岁，肾气实，发长齿更……八八天癸竭，精少，肾脏衰，形体皆极，则齿发去。”本病皆因时至老年，肾气已衰，精髓乏源，脑失所养，再加上其它因素诱发而成。王清任亦云：“高年乏记性者，脑髓渐空”。可见肾亏是导致老年痴呆病的根本原因。因此中医临床对老年呆病的防治，把补肾放在重要位置，认为“只有从补肾论治，固肾之本，才能维持机体的正常功能，使气血旺盛，肾精充足，神明之府得以充实，而防止脑衰老的发生。”[2]我们对1996年和1997年发表的与老年性痴呆有关的437篇论文进行分析，发现在中医临床治疗及疗效观察的论文中，大多都把肾亏与痴呆的关系放在重要位置，治疗组方上多以补肾活血法或补肾活血化瘀祛痰法来收治病人[3，4]。我们也曾按补肾活血法组方用黄精、熟地、丹参、远志等组成的脑力康制剂治疗老年痴呆病，结果在量表积分和中医临床观察指标的变化上，治疗前后都有明显改善[3]。我们在大鼠动物实验研究中也取得了明显疗效。现代中药药理学的研究也发现不少补肾中药如刺五加、五味子、鹿茸等有改善神经细胞代谢和功能的作用[4，5]。
, 百拇医药
近3年来，我们以中医基本理论“肾为先天之本”、“肾为作强之官”、“肾在志为恐，恐则伤肾”的思想为指导，在国家自然科学基金资助项目“‘肾为先天之本’的遗传行为研究”中，用猫恐吓刺激母代孕鼠的自然方法造模，对子代鼠进行多项指标的动态观察，发现：①中、重度恐吓孕鼠可引起新生子鼠脑内神经细胞减少、神经细胞胞浆空泡样变性，线粒体肿胀变形、肌质网扩张[6]。②中、重度恐吓组新生期、90日龄和小于90日龄子鼠饥饿时巷道取食速度、学习后逃离电网速度等行为活动能力明显差于轻度恐吓组、正常对照组和金匮肾气丸补肾反证组[7，8]。③在90及90龄前的研究中，轻度恐吓组与正常对照组子鼠的行为学反应及脑细胞形态上的差异均无统计学意义。
逃离电击区、走向安全区，是动物适应环境的本能反应，经过学习训练后的小白鼠，这种逃离电击区的快慢以及它们在安全区停留的时间的长短，可以反映小白鼠的记忆能力，从而间接反映其保护自身的生存能力[9]。本文主要报道的是在实验中，当我们无意中将其中两组各8只子鼠同等条件饲养到193日龄进行行为学测试时，意外发现在成年期上台时间与正常对照组无明显差异的两组子鼠到老年期这种差异就明显表现出来，从电网上到跳台的时间轻度恐吓组为35.81秒，是正常对照组的2.2倍，反应明显迟钝(见表2)[9]。我们的这些研究结果再次提示：痴呆(尤其是老年性痴呆)与中医的“肾”有着密切的联系。相信探讨这种联系对中医“肾”与神经生长发育和损伤关系的研究以及中医补肾活血法治疗老年性痴呆病的研究均具有十分重要的意义。
, 百拇医药
基金项目：国家自然科学基金资助项目(39570848)
作者简介：胡汉波，女，1962年11月生；医学硕士，副教授；中西医结合(基础)专业；研究方向：情绪行为与时间医学。
参考文献
[1]沈雁，匡调元，张伟荣等.“恐伤肾”的实验研究，中国医药学报，1991，(1)，13-16
[2]何华 . 补肾活血化痰法治疗老年性痴呆初探. 实用中西医结合杂志, 1997，10(13)：12
[3]廖方正，李青.脑力康对老年痴呆病的疗效观察. 成都中医药大学学报, 1996，(1)：20
[4]马怡，徐秋萍.中药抗成年后痴呆的实验药理研究情况.中国实验方剂学杂志, 1997，(1)：24，39
, http://www.100md.com
[5]黄丽萍，黄敬耀.中药抗老年性痴呆作用研究进展.江西中医学院学报, 1997，(1)：53
[6]王米渠，曾祥国，马向东等. 恐伤肾造模对子代鼠脑超微结构的观察.成都中医药大学学报, 1996，(4)：37
[7]王米渠，胡光月，马向东等.“恐伤肾”对子鼠作强行为的遗传学研究. 上海中医药杂志, 1997，(7)：42
[8]胡汉波，王米渠，余曙光等.恐吓孕鼠对子鼠成年期和成年后行为学影响的跳台实验研究 .中国行为医学杂志，1998，(2)：83
[9]李德明. 婴鼠Y迷津吸乳分辩学习行为的发展与脑生长和旋转行为关系的实验研究，心理学报，1988，(4)：411
[10]彭剑.阿尔茨海默病治疗方法的研究进展.国外医学*合成药生化制剂分册.1997，(3)：160
(收稿日期：1998-12-16), 百拇医药