用孕妇外周血中胎儿有核红细胞进行产前诊断的研究进展
作者：朱剑丈 邹丽
单位：430022 湖北省武汉市，同济医科大学附属协和医院
关键词：
中国煤炭工业医学杂志000702
目前对遗传性疾病的产前诊断根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响，可分为侵人性产前诊断和非侵人性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等。这些方法因可能伤及胎儿，影响胎儿发育，甚至引起流产。只能在高危妊娠孕妇中实施；后者包括超声、MRI、母血清生化指标检测及孕妇周围血中胎儿细胞的检测，但超声的敏感性太低，而且血清的生化指标检测只能作为一种初筛手段，限制了它们的使用价值。因而利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前基因诊断即成为最具潜力的非侵人性产前诊断方法之一。近年来随着分子生物技术的飞速发展，其研究取得了显著进展，亦显示出良好的应用前景。
, http://www.100md.com
l孕妇外周血中胎儿细胞类型
1893年schmorl在死于子痫孕妇的肺循环中发现滋养叶细胞，其后陆续有报道母血中其他类型胎儿细胞的存在。但直到1969年才考虑将其作为产前遗传病诊断的材料[1]。孕妇血中胎儿细胞的主要类型包括滋养叶细胞、淋巴细胞、粒细胞、单核细胞、有核红细胞(NRBC)等。
1.l滋养细胞来源于胎盘滋养层，是最早出现于母血中的胎儿细胞，与子宫的关系最为紧密。当它们侵入子宫内膜时，很可能就有若干滋养细胞进入母血循环。与母血相比，滋养层细胞有独特的形态学特征，可以肯定地认为，母血中找到的滋养层细胞必定来自胎儿组织。
1.2淋巴细胞Walknowska早在1969年就已证实母血中淋巴细胞的存在，继之Kulozik等分别用HLA-Az和甲胎蛋白单克隆抗体在母血中发现了胎儿淋巴细胞。因其表达HLA抗原，故当父母的HLA不同时，更容易分离、鉴别与富集。
, 百拇医药
1.3白细胞Wessman[2]等应用Ficoll-Pague密度位差离心法分离出胎儿细胞，再用FISH及Y特异探针，找出多种染色质的Yq.分离成功的例子目前为数尚少。
1.4有核红细胞(NRBC)Simpson和Elias[3]发现孕11周时.胎儿循环中NRBC占红细胞总数的10%，孕9周时为0.5%.而成人中NRBC极为罕见。目前利用抗原标记来分离NRBCs有两人类：一是阳性选择，即利用胎儿有核红细胞表面或胞内特异性抗原的单抗，如CD71GlycophorinA(GPA)、r球蛋白、CD36；另一种是阴性选择，即利用母体白细胞特异抗原的单抗，如CD45。(全文见PDF)……
参考文献：
[1]Walknowska J,Cone FA,Grumback MM :Practical and tltcoretlical implications of fetal maternal lymphocyte transfer. Lancct.1969,1:1119.
, 百拇医药
[2]Wessman M,Ylinen K,Knuutila S. Fetalgranulocytes in maternal venous:Blood detected in in-situ hybridization. Prenat Diag,1992,12: 993～1000.
[3]Simpson JL,Elias S. Isolating fetal cells frorn maternal blood.advances in prenatal diagnosis through molecular technology.JAMA, 1993,270: 2357～2361.
[4]Steele CD, Wapner RJ,Smith JB,et al. Prenatal diagnosis using fetal cellsisolated from maternal peripheral blood: A reviuw.Clin Obstet Gynecol, 1996,39: 801～813.
, 百拇医药
[5]宋杰,李守柔,张爱臣,等.富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断.中华妇产科杂志,1998,33(2):74.
[6]De Graaf IM,Jakobs ME,Leschot NJ,et al. Enrichment,ldeutfication and analysis of fetal cells from maternal blnod,evaluaion of a prenatal diagnosis system. Prenat Diagn. 1999 Jul: 19(7) :648～652.
[7]邬晋芳,王琳.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集及鉴定.实用医学杂志,1999,5(1):11～12.
[8]Busch J, Huber P, Pfluger E,et al. Enrichment of fetal cells from maternal blood by high gradient magnetic cell sorting (double MACS)for PCR based genetic analysis. Prenat Diagn. 1994,14:1129.
, 百拇医药
[9]Jansen MW,Von lindem M,Beug H.et al. The use of in x, itro expanded erythroid cells in a model system for the isolation offetal cells from maternal blood. Prenat Diagn, 1999, April: 19 (4):323～379.
[10]Wachter SS.Sammons D, M anley M ,et al. Fetal cells in maternal blood: Recovery by charge flow separation. Hum Genet.1996.98: 162～166.
[11]Takabayashi H. Development of non-invasive feral DNA diagnosis from maternal blood. Prenat Diagn, 1995.15:74～77.
, 百拇医药
[12]Hengstschlager M .and Bernaschek G. Fetal cells in the peripheral blood of pregnant women express thymidine kinase:A new marker for detection. Febs Lett. 1997,404: 299～302.
[13]Oosterwiik JC.Mesker WE.et al. Prenatal diagnosis of trisomy 13 on fetal cells obtained from maternal blond after minor enrichment. Prenat Diagn 1998 Oct: 18(10): 1082～1085.
[14]Watanabe A,sekizawa A.et al. Prenatal diagnosis of ornithline trans carbamylase (OTC)deficiency by using a single nucleated erythrocyte from maternal blood. Hum Genet. 1998. Jun; 102 (6) :611～615.
[15]Geifman-Holtzman D,Berry SM .et al. Fetal RhD genotyping in fetal cells flow sorted from maternal blood. Am J Obstet Gvneco1,1996,174:818～822.
收稿日期：1999-12-28
修稿日期：2000-05-10, http://www.100md.com
单位：430022 湖北省武汉市，同济医科大学附属协和医院
关键词：
中国煤炭工业医学杂志000702
目前对遗传性疾病的产前诊断根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响，可分为侵人性产前诊断和非侵人性产前诊断。前者包括羊膜腔穿刺术、绒毛细胞吸取术及胎儿脐血穿刺等。这些方法因可能伤及胎儿，影响胎儿发育，甚至引起流产。只能在高危妊娠孕妇中实施；后者包括超声、MRI、母血清生化指标检测及孕妇周围血中胎儿细胞的检测，但超声的敏感性太低，而且血清的生化指标检测只能作为一种初筛手段，限制了它们的使用价值。因而利用孕妇外周血中胎儿细胞进行产前基因诊断即成为最具潜力的非侵人性产前诊断方法之一。近年来随着分子生物技术的飞速发展，其研究取得了显著进展，亦显示出良好的应用前景。
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l孕妇外周血中胎儿细胞类型
1893年schmorl在死于子痫孕妇的肺循环中发现滋养叶细胞，其后陆续有报道母血中其他类型胎儿细胞的存在。但直到1969年才考虑将其作为产前遗传病诊断的材料[1]。孕妇血中胎儿细胞的主要类型包括滋养叶细胞、淋巴细胞、粒细胞、单核细胞、有核红细胞(NRBC)等。
1.l滋养细胞来源于胎盘滋养层，是最早出现于母血中的胎儿细胞，与子宫的关系最为紧密。当它们侵入子宫内膜时，很可能就有若干滋养细胞进入母血循环。与母血相比，滋养层细胞有独特的形态学特征，可以肯定地认为，母血中找到的滋养层细胞必定来自胎儿组织。
1.2淋巴细胞Walknowska早在1969年就已证实母血中淋巴细胞的存在，继之Kulozik等分别用HLA-Az和甲胎蛋白单克隆抗体在母血中发现了胎儿淋巴细胞。因其表达HLA抗原，故当父母的HLA不同时，更容易分离、鉴别与富集。
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1.3白细胞Wessman[2]等应用Ficoll-Pague密度位差离心法分离出胎儿细胞，再用FISH及Y特异探针，找出多种染色质的Yq.分离成功的例子目前为数尚少。
1.4有核红细胞(NRBC)Simpson和Elias[3]发现孕11周时.胎儿循环中NRBC占红细胞总数的10%，孕9周时为0.5%.而成人中NRBC极为罕见。目前利用抗原标记来分离NRBCs有两人类：一是阳性选择，即利用胎儿有核红细胞表面或胞内特异性抗原的单抗，如CD71GlycophorinA(GPA)、r球蛋白、CD36；另一种是阴性选择，即利用母体白细胞特异抗原的单抗，如CD45。(全文见PDF)……
参考文献：
[1]Walknowska J,Cone FA,Grumback MM :Practical and tltcoretlical implications of fetal maternal lymphocyte transfer. Lancct.1969,1:1119.
, 百拇医药
[2]Wessman M,Ylinen K,Knuutila S. Fetalgranulocytes in maternal venous:Blood detected in in-situ hybridization. Prenat Diag,1992,12: 993～1000.
[3]Simpson JL,Elias S. Isolating fetal cells frorn maternal blood.advances in prenatal diagnosis through molecular technology.JAMA, 1993,270: 2357～2361.
[4]Steele CD, Wapner RJ,Smith JB,et al. Prenatal diagnosis using fetal cellsisolated from maternal peripheral blood: A reviuw.Clin Obstet Gynecol, 1996,39: 801～813.
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[5]宋杰,李守柔,张爱臣,等.富集孕妇外周血中胎儿细胞行胎儿性别诊断.中华妇产科杂志,1998,33(2):74.
[6]De Graaf IM,Jakobs ME,Leschot NJ,et al. Enrichment,ldeutfication and analysis of fetal cells from maternal blnod,evaluaion of a prenatal diagnosis system. Prenat Diagn. 1999 Jul: 19(7) :648～652.
[7]邬晋芳,王琳.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的富集及鉴定.实用医学杂志,1999,5(1):11～12.
[8]Busch J, Huber P, Pfluger E,et al. Enrichment of fetal cells from maternal blood by high gradient magnetic cell sorting (double MACS)for PCR based genetic analysis. Prenat Diagn. 1994,14:1129.
, 百拇医药
[9]Jansen MW,Von lindem M,Beug H.et al. The use of in x, itro expanded erythroid cells in a model system for the isolation offetal cells from maternal blood. Prenat Diagn, 1999, April: 19 (4):323～379.
[10]Wachter SS.Sammons D, M anley M ,et al. Fetal cells in maternal blood: Recovery by charge flow separation. Hum Genet.1996.98: 162～166.
[11]Takabayashi H. Development of non-invasive feral DNA diagnosis from maternal blood. Prenat Diagn, 1995.15:74～77.
, 百拇医药
[12]Hengstschlager M .and Bernaschek G. Fetal cells in the peripheral blood of pregnant women express thymidine kinase:A new marker for detection. Febs Lett. 1997,404: 299～302.
[13]Oosterwiik JC.Mesker WE.et al. Prenatal diagnosis of trisomy 13 on fetal cells obtained from maternal blond after minor enrichment. Prenat Diagn 1998 Oct: 18(10): 1082～1085.
[14]Watanabe A,sekizawa A.et al. Prenatal diagnosis of ornithline trans carbamylase (OTC)deficiency by using a single nucleated erythrocyte from maternal blood. Hum Genet. 1998. Jun; 102 (6) :611～615.
[15]Geifman-Holtzman D,Berry SM .et al. Fetal RhD genotyping in fetal cells flow sorted from maternal blood. Am J Obstet Gvneco1,1996,174:818～822.
收稿日期：1999-12-28
修稿日期：2000-05-10, http://www.100md.com