糖基化终产物增加人外周血单核细胞对单核细胞趋化蛋白-1的表达
作者：刘乃丰 郝锋
单位：东南大学医学院第一附属医院心内科，江苏 南京 210009
关键词：
中国病理生理杂志0010135
动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的疾病，糖尿病患者并发AS的可能性是正常人的3～4倍。高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化可使其最终形成不可逆的糖基化终产物(Advanced glycosylation end products, AGEs)。AGEs可与单核细胞等多种细胞上受体结合，加速动脉粥样斑块的形成。单核细胞粘附于内皮并透入内皮下形成泡沫细胞是AS的早期事件。这一过程与单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)密切相关。MCP-1为趋化因子家族中的β超家族(即C-C亚家族)成员，能强力趋化单核细胞粘附于血管内皮并进一步参与AS的形成。AS病灶的巨噬细胞丰富区表达高水平的MCP-1。多种因素如氧化低密度脂蛋白、微修饰的低密度脂蛋白等能诱导单核细胞对MCP-1的表达增加。目的：本研究旨在探讨AGEs对人外周血单核细胞(Peripheral blood monocyte, PBM)中MCP-1蛋白表达的影响。方法：按文献方法分离人PBM。依本实验室常规方法用葡萄糖和牛血清白蛋白制备AGEs。分别用不同浓度的葡萄糖(0、20、50、80 mmol.L-1)制备的AGEs 200 mg.L-1对人PBM干预24 h;用AGE-BSA (50 mmol.L-1， 200 mg.L-1)干预PBM 0、12、24、36 h; 用AGE-BSA(50 mmol.L-1, 200 mg.L-1)与Verapamil (10 μmol.L-1)共同干预PBM 24 h;以Western blotting来检测其胞内蛋白质表达水平；以趋化实验检测其分泌的MCP-1活性。结果：1.MCP-1的蛋白表达及由其趋化单核细胞迁移的距离所表示的活性均随制备AGEs的葡萄糖的浓度增加而增加，以50 mmol.L-1时最明显(P<0.01)，80 mmol.L-1稍减弱(P<0.05)(迁移距离CTRL 34.00±3.02 μm, AGE50 46.40±3.66 μm, n=15)。2.上述指标亦随AGEs的干预时间延长而增加(P<0.01)(迁移距离CTRL 24.93±2.92 μm, AGE50/24 h 46.40±3.66 μm, n=15)。3.加用Verapamil后，能明显减弱AGE-BSA对MCP-1的表达的效应(P<0.05)(迁移距离AGE50+Ver 35.73±2.79 μm, AGE50 46.40±3.66 μm, n=15)。结论：我们推测AGEs作用于血液中的单核细胞，增加其对MCP-1的表达，从而促进单核细胞聚集于内皮下，可能是其致AS机制的一个重要方面。同时MCP-1的生成可能与细胞内钙离子浓度有关。, http://www.100md.com
单位：东南大学医学院第一附属医院心内科，江苏 南京 210009
关键词：
中国病理生理杂志0010135
动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)是严重危害人类健康的疾病，糖尿病患者并发AS的可能性是正常人的3～4倍。高血糖状态下蛋白质发生的非酶糖基化可使其最终形成不可逆的糖基化终产物(Advanced glycosylation end products, AGEs)。AGEs可与单核细胞等多种细胞上受体结合，加速动脉粥样斑块的形成。单核细胞粘附于内皮并透入内皮下形成泡沫细胞是AS的早期事件。这一过程与单核细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)密切相关。MCP-1为趋化因子家族中的β超家族(即C-C亚家族)成员，能强力趋化单核细胞粘附于血管内皮并进一步参与AS的形成。AS病灶的巨噬细胞丰富区表达高水平的MCP-1。多种因素如氧化低密度脂蛋白、微修饰的低密度脂蛋白等能诱导单核细胞对MCP-1的表达增加。目的：本研究旨在探讨AGEs对人外周血单核细胞(Peripheral blood monocyte, PBM)中MCP-1蛋白表达的影响。方法：按文献方法分离人PBM。依本实验室常规方法用葡萄糖和牛血清白蛋白制备AGEs。分别用不同浓度的葡萄糖(0、20、50、80 mmol.L-1)制备的AGEs 200 mg.L-1对人PBM干预24 h;用AGE-BSA (50 mmol.L-1， 200 mg.L-1)干预PBM 0、12、24、36 h; 用AGE-BSA(50 mmol.L-1, 200 mg.L-1)与Verapamil (10 μmol.L-1)共同干预PBM 24 h;以Western blotting来检测其胞内蛋白质表达水平；以趋化实验检测其分泌的MCP-1活性。结果：1.MCP-1的蛋白表达及由其趋化单核细胞迁移的距离所表示的活性均随制备AGEs的葡萄糖的浓度增加而增加，以50 mmol.L-1时最明显(P<0.01)，80 mmol.L-1稍减弱(P<0.05)(迁移距离CTRL 34.00±3.02 μm, AGE50 46.40±3.66 μm, n=15)。2.上述指标亦随AGEs的干预时间延长而增加(P<0.01)(迁移距离CTRL 24.93±2.92 μm, AGE50/24 h 46.40±3.66 μm, n=15)。3.加用Verapamil后，能明显减弱AGE-BSA对MCP-1的表达的效应(P<0.05)(迁移距离AGE50+Ver 35.73±2.79 μm, AGE50 46.40±3.66 μm, n=15)。结论：我们推测AGEs作用于血液中的单核细胞，增加其对MCP-1的表达，从而促进单核细胞聚集于内皮下，可能是其致AS机制的一个重要方面。同时MCP-1的生成可能与细胞内钙离子浓度有关。, http://www.100md.com