新型生物降解材料聚β羟基丁酸的细胞毒性评价
作者：汤苏阳 艾玉峰 董兆麟 杨青芳 司徒镇强
单位：汤苏阳(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；艾玉峰(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；董兆麟(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；杨青芳(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；司徒镇强(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)
关键词：聚β羟基丁酸；细胞毒性
第四军医大学学报000659 中图号：R318.08 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0760-01
0 引言
通过小鼠成纤维细胞生长抑制实验和细胞毒性试验对新型生物可降解材料的生物相容性作出初步评价，为临床应用提供生物学方面的依据.
1 材料和方法
1.1 材料 聚β羟基丁酸膜片(简称PHB)，高密度聚乙烯膜片,二醋酸二丁基锡聚氮乙烯膜片(简称PVC)(后两种为国际标准化组织所推荐的生物学试验的阴性和阳性对照物，均由西北大学及西北工业大学提供，消毒干燥，制备成3种材料的高温、常温浸出液).
1.2 细胞形态学试验 利用处于对数生长期的L929细胞悬液，接种在3种材料的高、常温浸出液的96孔板中. 将培养板置于培养箱中培养1,3,5 d,利用倒置显微镜对L929细胞进行形态学观察.
1.3 细胞毒性研究 采用四唑盐比色法，得出吸光值，细胞相对增殖度. 测试PHB的高温及常温浸提液的细胞相对增殖度，其细胞毒性分级评分标准：相对增殖率≥100%为0级，在75%～99%，50%～74%，25%～49%，1%～24%分别为1，2，3，4级,0%为5级.
2 结果
PHB膜片及高温和常温浸出液中的L929细胞随培养时数增加，细胞生长状况良好. PHB在常温、高温下浸出液中毒性分级为0级，PVC阳性对照物的毒性稳定在Ⅲ级.
3 讨论
根据国际标准化组织7406技术报告选择微生物材料应基于①材料的物理和化学性质稳定；②没有造成潜在毒性问题的可滤除成分. PHB高温、常温浸提液不对L929细胞产生毒性，说明高温、常温下PHB材料的性质是稳定的，无毒性成分浸出. 有较好的细胞相容性. 受试材料的浸渍程度越高，细胞可能受抑制程度更大. 本实验中浸提液均采取原液，不产生对细胞致毒性作用的浸出成分. 目前体外细胞毒性试验的方法很多，各有其不同，但归结起来有：①体外细胞培养所用细胞分成两类，一为建株的细胞系，二为原代细胞培养；②细胞与材料的接触方式可以是直接接触、间接接触或通过材料浸渍方式接触；③最终的检测指标较为多样，不同的生物学终点都可以作为细胞损伤的指征. 本试验是测定线粒体内酶的活性，线粒体在细胞生命活动旺盛时增多，衰退时则减少，因此MTT无疑是灵敏地反应出所测试材料对细胞造成的毒性损害程度. 可作为检测生物医学材料生物相容性的初筛手段., 百拇医药
单位：汤苏阳(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；艾玉峰(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；董兆麟(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；杨青芳(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)；司徒镇强(第四军医大学西京医院整形外科中心，陕西 西安 710033)
关键词：聚β羟基丁酸；细胞毒性
第四军医大学学报000659 中图号：R318.08 文献标识码：A
文章编号：1000-2790(2000)06-0760-01
0 引言
通过小鼠成纤维细胞生长抑制实验和细胞毒性试验对新型生物可降解材料的生物相容性作出初步评价，为临床应用提供生物学方面的依据.
1 材料和方法
1.1 材料 聚β羟基丁酸膜片(简称PHB)，高密度聚乙烯膜片,二醋酸二丁基锡聚氮乙烯膜片(简称PVC)(后两种为国际标准化组织所推荐的生物学试验的阴性和阳性对照物，均由西北大学及西北工业大学提供，消毒干燥，制备成3种材料的高温、常温浸出液).
1.2 细胞形态学试验 利用处于对数生长期的L929细胞悬液，接种在3种材料的高、常温浸出液的96孔板中. 将培养板置于培养箱中培养1,3,5 d,利用倒置显微镜对L929细胞进行形态学观察.
1.3 细胞毒性研究 采用四唑盐比色法，得出吸光值，细胞相对增殖度. 测试PHB的高温及常温浸提液的细胞相对增殖度，其细胞毒性分级评分标准：相对增殖率≥100%为0级，在75%～99%，50%～74%，25%～49%，1%～24%分别为1，2，3，4级,0%为5级.
2 结果
PHB膜片及高温和常温浸出液中的L929细胞随培养时数增加，细胞生长状况良好. PHB在常温、高温下浸出液中毒性分级为0级，PVC阳性对照物的毒性稳定在Ⅲ级.
3 讨论
根据国际标准化组织7406技术报告选择微生物材料应基于①材料的物理和化学性质稳定；②没有造成潜在毒性问题的可滤除成分. PHB高温、常温浸提液不对L929细胞产生毒性，说明高温、常温下PHB材料的性质是稳定的，无毒性成分浸出. 有较好的细胞相容性. 受试材料的浸渍程度越高，细胞可能受抑制程度更大. 本实验中浸提液均采取原液，不产生对细胞致毒性作用的浸出成分. 目前体外细胞毒性试验的方法很多，各有其不同，但归结起来有：①体外细胞培养所用细胞分成两类，一为建株的细胞系，二为原代细胞培养；②细胞与材料的接触方式可以是直接接触、间接接触或通过材料浸渍方式接触；③最终的检测指标较为多样，不同的生物学终点都可以作为细胞损伤的指征. 本试验是测定线粒体内酶的活性，线粒体在细胞生命活动旺盛时增多，衰退时则减少，因此MTT无疑是灵敏地反应出所测试材料对细胞造成的毒性损害程度. 可作为检测生物医学材料生物相容性的初筛手段., 百拇医药