血管内皮生长因子在卵巢上皮癌中的表达及其临床意义
作者：申桂华 孟庆伟 伍凤莉
单位：(卫生部北京医院妇产科 100730)
关键词：
中华医学杂志000316 实体瘤的持续生长有赖于血管增生，血管内皮生长因子(VEGF)具有促血管增生和增加血管通透性而产生腹水的作用。为了探讨VEGF在卵巢上皮性癌的表达及临床意义，我们对60例卵巢上皮性癌的VEGF蛋白表达进行了分析。
一、对象与方法
1.对象：为1989～1999年1月在我院妇产科住院的卵巢癌患者，共60例，年龄21～88岁，平均55岁。根据1987年国际妇产科联合会(FIGO)分期标准，Ⅰ期27例，Ⅱ期7例，Ⅲ期22例，Ⅳ期4例。其中浆液性囊腺癌29例、粘液性囊腺癌10例、透明细胞癌16例、内膜样腺癌5例。选同期交界性上皮性肿瘤患者13例，良性上皮性肿瘤患者17例。
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2.方法：(1)将标本用4%甲醛固定、石蜡包埋。4 μm连续切片后贴于经APES处理的载玻片上进行免疫组织化学染色；(2)染色方法：将切片行HE 染色, 以明确诊断, 另一套切片行免疫组织化学染色, 采用链霉素亲和素-生物素-过
氧化物酶法(SABC)。兔抗人VEGF多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，SABC法应用试剂盒为美国Vector产品，按说明书方法染色。一抗稀释度为1∶100，标本不经抗原修复，取已知有VEGF基因表达的肺癌组织切片为阳性对照，设空白对照及正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照；(3)结果判定： VEGF以肿瘤细胞胞浆出现特异性棕黄色着色为(+)，未出现为(-)，表达水平判断参照文献[1]中的半定量法：(-)为无明显阳性细胞，(+)低度表达阳性细胞小于或等于50%，(++)高度表达为阳性细胞大于50%。
3.统计学方法：采用SAS 6.04版统计软件进行结果分析。差异显著性检验采用χ2检验，Kaplan-Meier 生命年表计算患者累积生存曲线，用Cox比例风险回归模型作随访分析。
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二、结果
1.VEGF在卵巢肿瘤组织的表达： VEGF阳性物呈棕黄色颗粒状，主要位于肿瘤细胞的胞浆中(图1)，17例良性卵巢肿瘤中，12例(71%)阴性，5例(29%)为低度表达。卵巢交界性上皮肿瘤中，10例(77%)为低度表达，3例(23%)为高度表达。卵巢上皮性癌中，1例(2%)阴性，27例(45%)为低度表达，32例(53%)为高度表达。在恶性肿瘤的高度表达率(53%)明显高于良性(0%)和交界性肿瘤(23%) (P<0.05)。交界性肿瘤VEGF高度表达率(23%)也高于良性肿瘤(0%)(χ2=4.36,P<0.05)。另外在肿瘤细胞周围部分血管内皮细胞及纤维细胞也有轻度着色。
图1 卵巢癌VEGF蛋白表达阳性 ×200
2.VEGF蛋白表达与恶性肿瘤临床病理特征关系： VEGF蛋白高度表达与上皮性卵巢癌的临床分期及细胞分化程度有相关性(P<0.05，<0.001)。患者的年龄、肿瘤大小及组织学类型与VEGF蛋白高度表达无关，见表1。
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表1 60例卵巢上皮性癌患者临床病理特征与血管内皮生成因子表达的关系 类别
总例数
VEGF表达
P值
(-)
(+)
(++)
年龄(岁)
≤60
40
2
21
, 百拇医药 17
>0.05
>60
20
0
5
15
肿瘤大小(cm)
≤10
21
0
11
10
>0.05
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>10
39
2
15
22
组织学类别
浆液性型
29
0
13
16
粘液型
10
0
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6
4
0.142
透明细胞癌
16
1
6
9
子宫内膜样癌
5
1
1
3
临床分期
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Ⅰ～Ⅱ
34
2
19
13
<0.05
Ⅲ～Ⅳ
26
0
7
19
细胞分化
G1～G2
, 百拇医药 43
2
25
16
<0.001
G3
17
0
1
16
3.VEGF表达与上皮性卵巢癌患者预后的关系：对60例上皮性卵巢癌患者均进行了术后随访, 随访时间为3～120个月，平均随访时间56个月，无失访。应用Kaplan-Meier法分析, 6 0例患者平均生存时间为28个月。VEGF高表达患者平均生存时间为24个月，VEGF低表达患者平均生存时间为32个月(P<0.001)。用多变量Cox比例风险回归模型，对肿瘤FIGO分期、组织学类型、细胞分化、肿瘤大小、年龄及VEGF表达率诸因素进行存活回归分析，显示影响术后存活时间的独立因素只有肿瘤分期及VEGF表达率。
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三、讨论
1.VEGF蛋白表达与卵巢上皮性癌临床及病理学的关系：VEGF又称血管通透因子，是相对分子质量为34 000～46 000的糖蛋白，作为一种多功能生长因子和特异性血管生长因子，一方面作为内皮细胞特异性有丝分裂原，诱导内皮细胞增生及新血管的生成，另一方面通过增加血管的通透性，而导致肿瘤患者的腹水形成[2，3]。近年来研究表明，人类的许多肿瘤细胞比正常组织具有高的VEGF mRNA表达[4，5]。Boocock等[6]及Abu-Jawdeh等[7]研究发现，卵巢恶性肿瘤细胞也有VEGF mRNA的表达。本研究中VEGF蛋白表达主要位于肿瘤细胞的细胞浆中，VEGF在卵巢良性、交界性及恶性上皮性肿瘤中的表达是逐渐增高的，与其他学者的工作一致[7]，可见，VEGF检测对于一些介于良、恶性病变间的病例的鉴别具有一定的临床价值。另外本研究的结果同时显示，Ⅰ、Ⅱ期卵巢上皮癌组织中VEGF高度表达率显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05) 及细胞低分化的卵巢恶性肿瘤组织中VEGF高度表达率显著高于细胞高分化的患者(P<0.001)，表明VEGF蛋白高表达的卵巢上皮性癌可能恶性程度更高，肿瘤发生后迅速进入晚期。
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2.卵巢上皮性癌患者的生存随访分析：有研究表明，组织VEGF高度表达的卵巢上皮性癌患者比低表达患者预后差[8]。最近Tempfer等[9]研究表明，血清VEGF测定可以作为卵巢癌患者独立预后因素而用于监测患者的病情。本研究中，应用Kaplan-Meier法分析，有VEGF蛋白高度表达的患者生存期显著缩短，经多变量Cox比例风险回归模型分析表明，VEGF的表达及临床分期为卵巢癌患者两个独立预后因素，说明VEGF高度表达的卵巢上皮性癌恶性程度高，患者预后差。本研究表明，组织中VEGF蛋白表达的测定可以帮助预测卵巢癌中高危患者，以帮助选择更好的治疗方法。 参考文献：
1 Yamamoto S, Konishi I, Mandai M, et al. Expression of vascular growth factor (VEGF) in epithelial ovarian neoplasms: correlation with clinicopathology and patient survival, and analysis of serum VEGF levels. Brit J Cancer, 1997, 76:1221-1227.
, http://www.100md.com
2 Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM, et al. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid. Science ,1983,219:983-985.
3 Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ,et al. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science ,1989,2446:1306-1309.
4 Plate KH, Breier G, Millauer B,et al. Up-regulation of vascular endothelial growth factor and its cognate receptors in a rat glioma model of tumor angiogenesis. Cancer Res ,1993,53:5822-5827.
, 百拇医药
5 Yoshiji H, Gomez DE, Shibuya M, et al. Upexpression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer. Cancer Res,1996, 56: 2013-2016.
6 Boocock CA, Charnock-Jones DS, Sharkey AM, et al.Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor flt and KDR in ovarian carcinoma. J Natl Cancer Inst,1995, 87: 506-516.
7 Abu-Jawdeh GM, Faix JD, Niloff J, et al.Strong expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptor in ovarian borderline and malignant neoplasms. Lab Invest ,1996,74:1105-1115.
, 百拇医药
8 Hartenbach EM, Olson TA, Goswitz JJ, et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and survival in human epithelial ovarian carcinomas. Cancer Lett,1997,121 :169-175.
9 Tempfer C, Obermair A, Hefler L, et al. Vascular endothelial growth factor serum concentrations in ovarian cancer. Obstet Gynecol, 1998,92:360-363.
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药
单位：(卫生部北京医院妇产科 100730)
关键词：
中华医学杂志000316 实体瘤的持续生长有赖于血管增生，血管内皮生长因子(VEGF)具有促血管增生和增加血管通透性而产生腹水的作用。为了探讨VEGF在卵巢上皮性癌的表达及临床意义，我们对60例卵巢上皮性癌的VEGF蛋白表达进行了分析。
一、对象与方法
1.对象：为1989～1999年1月在我院妇产科住院的卵巢癌患者，共60例，年龄21～88岁，平均55岁。根据1987年国际妇产科联合会(FIGO)分期标准，Ⅰ期27例，Ⅱ期7例，Ⅲ期22例，Ⅳ期4例。其中浆液性囊腺癌29例、粘液性囊腺癌10例、透明细胞癌16例、内膜样腺癌5例。选同期交界性上皮性肿瘤患者13例，良性上皮性肿瘤患者17例。
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2.方法：(1)将标本用4%甲醛固定、石蜡包埋。4 μm连续切片后贴于经APES处理的载玻片上进行免疫组织化学染色；(2)染色方法：将切片行HE 染色, 以明确诊断, 另一套切片行免疫组织化学染色, 采用链霉素亲和素-生物素-过
氧化物酶法(SABC)。兔抗人VEGF多克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，SABC法应用试剂盒为美国Vector产品，按说明书方法染色。一抗稀释度为1∶100，标本不经抗原修复，取已知有VEGF基因表达的肺癌组织切片为阳性对照，设空白对照及正常兔血清(1∶50)替代一抗的替代对照；(3)结果判定： VEGF以肿瘤细胞胞浆出现特异性棕黄色着色为(+)，未出现为(-)，表达水平判断参照文献[1]中的半定量法：(-)为无明显阳性细胞，(+)低度表达阳性细胞小于或等于50%，(++)高度表达为阳性细胞大于50%。
3.统计学方法：采用SAS 6.04版统计软件进行结果分析。差异显著性检验采用χ2检验，Kaplan-Meier 生命年表计算患者累积生存曲线，用Cox比例风险回归模型作随访分析。
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二、结果
1.VEGF在卵巢肿瘤组织的表达： VEGF阳性物呈棕黄色颗粒状，主要位于肿瘤细胞的胞浆中(图1)，17例良性卵巢肿瘤中，12例(71%)阴性，5例(29%)为低度表达。卵巢交界性上皮肿瘤中，10例(77%)为低度表达，3例(23%)为高度表达。卵巢上皮性癌中，1例(2%)阴性，27例(45%)为低度表达，32例(53%)为高度表达。在恶性肿瘤的高度表达率(53%)明显高于良性(0%)和交界性肿瘤(23%) (P<0.05)。交界性肿瘤VEGF高度表达率(23%)也高于良性肿瘤(0%)(χ2=4.36,P<0.05)。另外在肿瘤细胞周围部分血管内皮细胞及纤维细胞也有轻度着色。
图1 卵巢癌VEGF蛋白表达阳性 ×200
2.VEGF蛋白表达与恶性肿瘤临床病理特征关系： VEGF蛋白高度表达与上皮性卵巢癌的临床分期及细胞分化程度有相关性(P<0.05，<0.001)。患者的年龄、肿瘤大小及组织学类型与VEGF蛋白高度表达无关，见表1。
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表1 60例卵巢上皮性癌患者临床病理特征与血管内皮生成因子表达的关系 类别
总例数
VEGF表达
P值
(-)
(+)
(++)
年龄(岁)
≤60
40
2
21
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>0.05
>60
20
0
5
15
肿瘤大小(cm)
≤10
21
0
11
10
>0.05
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39
2
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组织学类别
浆液性型
29
0
13
16
粘液型
10
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6
4
0.142
透明细胞癌
16
1
6
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子宫内膜样癌
5
1
1
3
临床分期
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Ⅰ～Ⅱ
34
2
19
13
<0.05
Ⅲ～Ⅳ
26
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7
19
细胞分化
G1～G2
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2
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16
<0.001
G3
17
0
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16
3.VEGF表达与上皮性卵巢癌患者预后的关系：对60例上皮性卵巢癌患者均进行了术后随访, 随访时间为3～120个月，平均随访时间56个月，无失访。应用Kaplan-Meier法分析, 6 0例患者平均生存时间为28个月。VEGF高表达患者平均生存时间为24个月，VEGF低表达患者平均生存时间为32个月(P<0.001)。用多变量Cox比例风险回归模型，对肿瘤FIGO分期、组织学类型、细胞分化、肿瘤大小、年龄及VEGF表达率诸因素进行存活回归分析，显示影响术后存活时间的独立因素只有肿瘤分期及VEGF表达率。
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三、讨论
1.VEGF蛋白表达与卵巢上皮性癌临床及病理学的关系：VEGF又称血管通透因子，是相对分子质量为34 000～46 000的糖蛋白，作为一种多功能生长因子和特异性血管生长因子，一方面作为内皮细胞特异性有丝分裂原，诱导内皮细胞增生及新血管的生成，另一方面通过增加血管的通透性，而导致肿瘤患者的腹水形成[2，3]。近年来研究表明，人类的许多肿瘤细胞比正常组织具有高的VEGF mRNA表达[4，5]。Boocock等[6]及Abu-Jawdeh等[7]研究发现，卵巢恶性肿瘤细胞也有VEGF mRNA的表达。本研究中VEGF蛋白表达主要位于肿瘤细胞的细胞浆中，VEGF在卵巢良性、交界性及恶性上皮性肿瘤中的表达是逐渐增高的，与其他学者的工作一致[7]，可见，VEGF检测对于一些介于良、恶性病变间的病例的鉴别具有一定的临床价值。另外本研究的结果同时显示，Ⅰ、Ⅱ期卵巢上皮癌组织中VEGF高度表达率显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05) 及细胞低分化的卵巢恶性肿瘤组织中VEGF高度表达率显著高于细胞高分化的患者(P<0.001)，表明VEGF蛋白高表达的卵巢上皮性癌可能恶性程度更高，肿瘤发生后迅速进入晚期。
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2.卵巢上皮性癌患者的生存随访分析：有研究表明，组织VEGF高度表达的卵巢上皮性癌患者比低表达患者预后差[8]。最近Tempfer等[9]研究表明，血清VEGF测定可以作为卵巢癌患者独立预后因素而用于监测患者的病情。本研究中，应用Kaplan-Meier法分析，有VEGF蛋白高度表达的患者生存期显著缩短，经多变量Cox比例风险回归模型分析表明，VEGF的表达及临床分期为卵巢癌患者两个独立预后因素，说明VEGF高度表达的卵巢上皮性癌恶性程度高，患者预后差。本研究表明，组织中VEGF蛋白表达的测定可以帮助预测卵巢癌中高危患者，以帮助选择更好的治疗方法。 参考文献：
1 Yamamoto S, Konishi I, Mandai M, et al. Expression of vascular growth factor (VEGF) in epithelial ovarian neoplasms: correlation with clinicopathology and patient survival, and analysis of serum VEGF levels. Brit J Cancer, 1997, 76:1221-1227.
, http://www.100md.com
2 Senger DR, Galli SJ, Dvorak AM, et al. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid. Science ,1983,219:983-985.
3 Leung DW, Cachianes G, Kuang WJ,et al. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen. Science ,1989,2446:1306-1309.
4 Plate KH, Breier G, Millauer B,et al. Up-regulation of vascular endothelial growth factor and its cognate receptors in a rat glioma model of tumor angiogenesis. Cancer Res ,1993,53:5822-5827.
, 百拇医药
5 Yoshiji H, Gomez DE, Shibuya M, et al. Upexpression of vascular endothelial growth factor, its receptor, and other angiogenic factors in human breast cancer. Cancer Res,1996, 56: 2013-2016.
6 Boocock CA, Charnock-Jones DS, Sharkey AM, et al.Expression of vascular endothelial growth factor and its receptor flt and KDR in ovarian carcinoma. J Natl Cancer Inst,1995, 87: 506-516.
7 Abu-Jawdeh GM, Faix JD, Niloff J, et al.Strong expression of vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) and its receptor in ovarian borderline and malignant neoplasms. Lab Invest ,1996,74:1105-1115.
, 百拇医药
8 Hartenbach EM, Olson TA, Goswitz JJ, et al. Vascular endothelial growth factor (VEGF) expression and survival in human epithelial ovarian carcinomas. Cancer Lett,1997,121 :169-175.
9 Tempfer C, Obermair A, Hefler L, et al. Vascular endothelial growth factor serum concentrations in ovarian cancer. Obstet Gynecol, 1998,92:360-363.
收稿日期：1999-11-01, 百拇医药