Bcl-2和PCNA在卵巢上皮癌中的表达及其意义
作者：银铎 陆景明
单位：银铎(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)；陆景明(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)
关键词：卵巢癌；B细胞淋巴瘤-2；增殖细胞核抗原；预后；免疫组化
中国医科大学学报000139 作者对72例卵巢上皮性肿瘤中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)的表达进行检测，并对相关的临床病理因素进行分析。旨在探讨其在卵巢上皮性肿瘤形成和恶变过程中的变化以及对恶性肿瘤患者术后生存时间的影响，以期为卵巢肿瘤、特别是恶性肿瘤的早期诊断、个体化治疗及预后判断提供更为客观的依据。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 研究对象
收集1992～1994年间在我科住院患者手术切除的卵巢标本72例。均为常规10%福尔马林固定，石蜡包埋组织。其中恶性43例(浆液性囊腺癌21例，粘液性囊腺癌22例)。交界性上皮性肿瘤17例，良性上皮瘤12例。43例卵巢癌患者年龄为19～70岁。术前均未进行过放/化疗。根据FIGO分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期16例，Ⅳ期10例。43例卵巢癌患者均进行术后随访，期限从手术当日起至患者死亡或至1997年12月为止，随访时间2～66个月。
1.2 染色方法
采用免疫组化S-P法。一抗为兔抗人Bcl-2，鼠抗人PCNA单克隆抗体。即用型S-P试剂盒。均购自北京中山生物技术有限公司。按说明书操作。
1.3 结果判断
以已知的Bcl-2阳性的扁桃腺组织和PCNA阳性的结肠腺癌组织切片免疫组化染色结果为阳性对照；以PBS代替一抗的免疫组化染色结果为阴性对照。选择典型视野，计数1000个肿瘤细胞，有可辨认的核染色、胞浆染色即视为阳性细胞。计数阳性细胞率。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用χ2检验及General Linner Models软件、Lifereg软件进行结果分析。
2 结果
2.1 Bcl-2、PCNA在各组卵巢肿瘤中的表达
Bcl-2、PCNA在良性、交界性、恶性卵巢上皮肿瘤中阳性表达率分别为25%、70.6%、76.7%；25%、58.8%、88.4%。Bcl-2在交界性、恶性肿瘤中的阳性率明显高于良性肿瘤(P<0.05)。PCNA在恶性肿瘤中阳性率明显高于良性、交界性肿瘤(P<0.01)，见表1。
表1 Bcl-2、PCNA在卵巢肿瘤中的表达
Table 1 Expression of Bcl-2 and PCNA in ovarian cancer 分类
, 百拇医药
n
Bcl2阳性(%)
PCNA阳性(%)
良性瘤
交界性瘤
恶性瘤
12
17
43
3(25)
12(70.6)
23(76.7)
3(25)
, 百拇医药
10(58.80)
38(88.40)
Bcl-2组：χ2良-交=5.58，P<0.05。χ2交-恶=0.25，P>0.05。
χ2良-交=11.1，P<0.01。
PCNA组：χ2良-交=3.25，P>0.05。χ2交-恶=6.65，P<0.01。
χ2良-恶=19.8，P<0.01。
2.2 卵巢癌Bcl-2、PCNA表达强度与临床病理特征关系
, 百拇医药
经General Linner Models软件分析Bcl-2的表达强度与卵巢癌的细胞分化程度有关。分化程度越高，Bcl-2的表达强度越高。PCNA表达强度与卵巢癌的临床分期及细胞分化程度有关。早期高分化癌较晚期低分化癌PCNA表达强度低(P<0.05)。两者与细胞学类型及腹水的有无无关。见表2。
表2 Bcl-2、PCNA表达强度与卵巢癌的关系(
±s)
Table 2 The relationship between ovarian cancer and
the expression intensity of Bcl-2 and PCNA (±s) 项目
, 百拇医药
n
Bcl-2表达强度
P
PCNA表达强度
P
组织学类型
浆液性
粘液性
21
22
46.53±42.61
55.06±44.17
0.785
, http://www.100md.com
19.39±6.56
22.85±10.45
0.957
FIGO分期
Ⅰ-Ⅱ
17
26
52.65±45.77
47.45±46.12
0.847
13.18±6.38
32.14±19.27
, http://www.100md.com
0.029
Ⅲ-Ⅳ
细胞学类型
高分化组织学Ⅰ级
10
14
19
75.29±33.19
39.70±20.98
24.67±23.28
0.0019
9.92±6.11
, 百拇医药
16.16±9.14
30.85±22.18
0.013
中分化组织学Ⅱ级
低分化组织学Ⅲ级
腹 水
有
20
23
53.73±44.62
47.12±42.19
0.912
, http://www.100md.com
19.35±7.71
23.54±12.12
0.863
无
2.3 Bcl-2、PCNA的表达强度与卵巢癌的关系
对43例卵巢癌的患者进行术后随访。有23例死于卵巢癌。采用Lifereg软件对FIGO分期、组织学类型、细胞分化、腹水有无、术后残留灶大小(以2 cm为界)及Bcl-2、PCNA表达强度诸因素进行生存回归分析。结果显示：影响术后生存时间的独立因素有：术后残留灶大小(P<0.01)、FIGO分期(P<0.01)、细胞分化程度(P<0.01)及PCNA表达强度(P<0.05)。
2.4 Bcl-2表达强度与PCNA表达强度的关系
, 百拇医药
采用相关顺序检验，计算得出H=388，小于正相关H0.05(531)，大于负相关H0.05(372)。所以，Bcl-2表达强度与PCNA表达强度无相关关系。
3 讨论
近年来，随着研究的不断深入，人们已经认识到，肿瘤的形成不仅仅是细胞增殖的结果，而是细胞增殖与细胞死亡的“合结果”[1]。一方面细胞过度增殖可能导致肿瘤的发生，另一方面作为细胞死亡形式之一的细胞凋亡也与肿瘤密切相关。研究发现，细胞凋亡受抑制能增强恶性病发生的可能性[2]。PCNA及Bcl-2分别是目前研究最多的反映组织细胞增殖水平及参与细胞凋亡调控的指标之一。本研究发现Bcl-2基因产物在良性卵巢瘤中的表达明显低于交界性、恶性卵巢瘤。其在交界性卵巢瘤中的表达亦低于恶性卵巢瘤，但两者没有显著差异。PCNA在卵巢良性、交界性瘤中的表达无明显差异，而明显低于恶性肿瘤。由此推断：Bcl-2的变化比PCNA更早出现在上皮性卵巢瘤的恶变过程中。
, 百拇医药
在对43例恶性卵巢瘤的研究中发现：Bcl-2蛋白虽然在癌变前显著增多，但一旦发生癌变后却并未随着恶性度的增高而明显增多，反而随组织细胞分化程度降低而降低。至于为什么分化差的癌组织Bcl-2的表达反而降低，原因尚不清楚。有学者认为可能与某些因子的调控，导致分化差的癌Bcl-2表达受抑制有关。PCNA虽然在发生癌变以后才出现明显增多，但它随着癌组织的恶性度增高而明显增高。这一结果与国外某些学者的研究结果一致[3～5]。由此推断：Bcl-2的测定有助于卵巢癌的早期诊断，PCNA的测定有助于卵巢癌的预后评估。进一步对随访结果分析显示；FIGO分期，术后残留灶大小，细胞分化及PCNA表达率都是与术后生存时间有关的独立因素。利用免疫组化方法检测PCNA的表达，可望成为临床上判断卵巢癌预后、指导个体化治疗的较为客观的重要手段之一。
Bcl-2的表达与PCNA表达并无相关性。表明Bcl-2蛋白是以抑制细胞凋亡而起作用，并不刺激细胞增殖。其机理尚需进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1，John C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death. J Cell Biol, 1994,124(1):1_6
2，，Sachs L, Loten J. Control of programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy. Blood, 1993,82(1):15_21
3，，Garcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferating grade using anti-PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embeded tissues: comparing with flow cytometric analysis. Am J Path, 1989,134(4):733_739
, 百拇医药
4，，Hall PA, Levison DA, Woods AL, et al. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunolocalization in paraffin sections: an index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasms. J Path, 1990,162(2):285_294
5，，Joensuu K, Pylkkaunen L, Toikkanen S. Bcl-2 protein expression and longterm survival in breast cancer. Am J Path, 1994,145(11):1191_119
收稿1998-12-30, 百拇医药
单位：银铎(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)；陆景明(中国医科大学第二临床学院妇产科，沈阳 110003)
关键词：卵巢癌；B细胞淋巴瘤-2；增殖细胞核抗原；预后；免疫组化
中国医科大学学报000139 作者对72例卵巢上皮性肿瘤中B细胞淋巴瘤/白血病-2(B-cell lymphoma/leukemia-2, Bcl-2)、增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)的表达进行检测，并对相关的临床病理因素进行分析。旨在探讨其在卵巢上皮性肿瘤形成和恶变过程中的变化以及对恶性肿瘤患者术后生存时间的影响，以期为卵巢肿瘤、特别是恶性肿瘤的早期诊断、个体化治疗及预后判断提供更为客观的依据。
1 材料与方法
, http://www.100md.com
1.1 研究对象
收集1992～1994年间在我科住院患者手术切除的卵巢标本72例。均为常规10%福尔马林固定，石蜡包埋组织。其中恶性43例(浆液性囊腺癌21例，粘液性囊腺癌22例)。交界性上皮性肿瘤17例，良性上皮瘤12例。43例卵巢癌患者年龄为19～70岁。术前均未进行过放/化疗。根据FIGO分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期10例，Ⅲ期16例，Ⅳ期10例。43例卵巢癌患者均进行术后随访，期限从手术当日起至患者死亡或至1997年12月为止，随访时间2～66个月。
1.2 染色方法
采用免疫组化S-P法。一抗为兔抗人Bcl-2，鼠抗人PCNA单克隆抗体。即用型S-P试剂盒。均购自北京中山生物技术有限公司。按说明书操作。
1.3 结果判断
以已知的Bcl-2阳性的扁桃腺组织和PCNA阳性的结肠腺癌组织切片免疫组化染色结果为阳性对照；以PBS代替一抗的免疫组化染色结果为阴性对照。选择典型视野，计数1000个肿瘤细胞，有可辨认的核染色、胞浆染色即视为阳性细胞。计数阳性细胞率。
, 百拇医药
1.4 统计学处理 采用χ2检验及General Linner Models软件、Lifereg软件进行结果分析。
2 结果
2.1 Bcl-2、PCNA在各组卵巢肿瘤中的表达
Bcl-2、PCNA在良性、交界性、恶性卵巢上皮肿瘤中阳性表达率分别为25%、70.6%、76.7%；25%、58.8%、88.4%。Bcl-2在交界性、恶性肿瘤中的阳性率明显高于良性肿瘤(P<0.05)。PCNA在恶性肿瘤中阳性率明显高于良性、交界性肿瘤(P<0.01)，见表1。
表1 Bcl-2、PCNA在卵巢肿瘤中的表达
Table 1 Expression of Bcl-2 and PCNA in ovarian cancer 分类
, 百拇医药
n
Bcl2阳性(%)
PCNA阳性(%)
良性瘤
交界性瘤
恶性瘤
12
17
43
3(25)
12(70.6)
23(76.7)
3(25)
, 百拇医药
10(58.80)
38(88.40)
Bcl-2组：χ2良-交=5.58，P<0.05。χ2交-恶=0.25，P>0.05。
χ2良-交=11.1，P<0.01。
PCNA组：χ2良-交=3.25，P>0.05。χ2交-恶=6.65，P<0.01。
χ2良-恶=19.8，P<0.01。
2.2 卵巢癌Bcl-2、PCNA表达强度与临床病理特征关系
, 百拇医药
经General Linner Models软件分析Bcl-2的表达强度与卵巢癌的细胞分化程度有关。分化程度越高，Bcl-2的表达强度越高。PCNA表达强度与卵巢癌的临床分期及细胞分化程度有关。早期高分化癌较晚期低分化癌PCNA表达强度低(P<0.05)。两者与细胞学类型及腹水的有无无关。见表2。
表2 Bcl-2、PCNA表达强度与卵巢癌的关系(
±s)Table 2 The relationship between ovarian cancer and
the expression intensity of Bcl-2 and PCNA (
±s) 项目, 百拇医药
n
Bcl-2表达强度
P
PCNA表达强度
P
组织学类型
浆液性
粘液性
21
22
46.53±42.61
55.06±44.17
0.785
, http://www.100md.com
19.39±6.56
22.85±10.45
0.957
FIGO分期
Ⅰ-Ⅱ
17
26
52.65±45.77
47.45±46.12
0.847
13.18±6.38
32.14±19.27
, http://www.100md.com
0.029
Ⅲ-Ⅳ
细胞学类型
高分化组织学Ⅰ级
10
14
19
75.29±33.19
39.70±20.98
24.67±23.28
0.0019
9.92±6.11
, 百拇医药
16.16±9.14
30.85±22.18
0.013
中分化组织学Ⅱ级
低分化组织学Ⅲ级
腹 水
有
20
23
53.73±44.62
47.12±42.19
0.912
, http://www.100md.com
19.35±7.71
23.54±12.12
0.863
无
2.3 Bcl-2、PCNA的表达强度与卵巢癌的关系
对43例卵巢癌的患者进行术后随访。有23例死于卵巢癌。采用Lifereg软件对FIGO分期、组织学类型、细胞分化、腹水有无、术后残留灶大小(以2 cm为界)及Bcl-2、PCNA表达强度诸因素进行生存回归分析。结果显示：影响术后生存时间的独立因素有：术后残留灶大小(P<0.01)、FIGO分期(P<0.01)、细胞分化程度(P<0.01)及PCNA表达强度(P<0.05)。
2.4 Bcl-2表达强度与PCNA表达强度的关系
, 百拇医药
采用相关顺序检验，计算得出H=388，小于正相关H0.05(531)，大于负相关H0.05(372)。所以，Bcl-2表达强度与PCNA表达强度无相关关系。
3 讨论
近年来，随着研究的不断深入，人们已经认识到，肿瘤的形成不仅仅是细胞增殖的结果，而是细胞增殖与细胞死亡的“合结果”[1]。一方面细胞过度增殖可能导致肿瘤的发生，另一方面作为细胞死亡形式之一的细胞凋亡也与肿瘤密切相关。研究发现，细胞凋亡受抑制能增强恶性病发生的可能性[2]。PCNA及Bcl-2分别是目前研究最多的反映组织细胞增殖水平及参与细胞凋亡调控的指标之一。本研究发现Bcl-2基因产物在良性卵巢瘤中的表达明显低于交界性、恶性卵巢瘤。其在交界性卵巢瘤中的表达亦低于恶性卵巢瘤，但两者没有显著差异。PCNA在卵巢良性、交界性瘤中的表达无明显差异，而明显低于恶性肿瘤。由此推断：Bcl-2的变化比PCNA更早出现在上皮性卵巢瘤的恶变过程中。
, 百拇医药
在对43例恶性卵巢瘤的研究中发现：Bcl-2蛋白虽然在癌变前显著增多，但一旦发生癌变后却并未随着恶性度的增高而明显增多，反而随组织细胞分化程度降低而降低。至于为什么分化差的癌组织Bcl-2的表达反而降低，原因尚不清楚。有学者认为可能与某些因子的调控，导致分化差的癌Bcl-2表达受抑制有关。PCNA虽然在发生癌变以后才出现明显增多，但它随着癌组织的恶性度增高而明显增高。这一结果与国外某些学者的研究结果一致[3～5]。由此推断：Bcl-2的测定有助于卵巢癌的早期诊断，PCNA的测定有助于卵巢癌的预后评估。进一步对随访结果分析显示；FIGO分期，术后残留灶大小，细胞分化及PCNA表达率都是与术后生存时间有关的独立因素。利用免疫组化方法检测PCNA的表达，可望成为临床上判断卵巢癌预后、指导个体化治疗的较为客观的重要手段之一。
Bcl-2的表达与PCNA表达并无相关性。表明Bcl-2蛋白是以抑制细胞凋亡而起作用，并不刺激细胞增殖。其机理尚需进一步研究。
, 百拇医药
参考文献
1，John C. Bcl-2 and the regulation of programmed cell death. J Cell Biol, 1994,124(1):1_6
2，，Sachs L, Loten J. Control of programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy. Blood, 1993,82(1):15_21
3，，Garcia RL, Coltrera MD, Gown AM. Analysis of proliferating grade using anti-PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embeded tissues: comparing with flow cytometric analysis. Am J Path, 1989,134(4):733_739
, 百拇医药
4，，Hall PA, Levison DA, Woods AL, et al. Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunolocalization in paraffin sections: an index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasms. J Path, 1990,162(2):285_294
5，，Joensuu K, Pylkkaunen L, Toikkanen S. Bcl-2 protein expression and longterm survival in breast cancer. Am J Path, 1994,145(11):1191_119
收稿1998-12-30, 百拇医药