肝内结石患者肝内胆管及胆囊的粘液组化和凝集素受体研究
作者：蓝祥海 邓宗
单位：646000 四川沪州医学院附院普外科(蓝祥海)；广州孙逸仙纪念医院普外科(邓宗)
关键词：肝管；肝内；胆结石；；免疫组织化学
中华肝胆外科杂志980107
【摘要】 采用凝集素免疫组织化学及常规粘液组织化学方法对15例肝内结
石病人及3例正常人肝脏的肝内胆管和胆囊的形态学及组织化学特性进行了研究。
结果表明，肝内结石病人肝内胆管壁内粘液腺大量增生，浆液腺及胆管上皮出现
粘液化改变；胆囊粘膜基本完整，上皮也有轻度粘液化；胆囊与肝内胆管的凝集
, 百拇医药
素受体表达存在一致性，阳性范围与粘液组织化学粘液染色区相对应，且均以岩
藻糖及半乳糖含量最丰富。故认为肝内结石主要形成于肝内，胆囊也主动参与了
所伴胆囊结石的形成，胆囊的改变不足以支持常规胆囊切除。
Study on mucous histochemistry and lectin receptor of intrahepatic bile ducts and
gallbladder in hepatolithiasis Lan Xianghai, Deng Zongdi. Department of General
Surgery, Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Sichuan 646000
, 百拇医药
【Abstract】 The morphology and histochemical features of intrahepatic bile ducts and
gallbladder in 15 patients with hepatolithiasis and livers of 3 normal subjects were studied
using lectin immunohistochemistry and conventional mucous histochemistry. The results
disclosed that there were a large amounts of proliferated mucous glands inside the
intrahepatic bile ductal wall in hepatolithiasis. Serous glands and intrahepatic bile duct
, 百拇医药
epithelia presented mucous metaplasia. The mucosa of gallbladder was intact on the
whole and appeared slight mucous metaplastic change. The expression of lectin receptor
in intrahepatic bile ducts and gallbladders showed no difference. The extent of lectin
positive stainings was corresponding with those of mucous histochemistry stainings. The
contents of fucose and mannose were more than other carbohydrats. Therefore, it might be
, 百拇医药
that intrahepatic calculi were mainly formed in intrahepatic bile ducts, while gallbladder
participated actively in the formation of accompaning gallbladder stones. The morphological
changes of gallbladder in hepatolithiasis were not enough to support performing conventional
cholecystectomy.
【Key words】 Bile ducts, lntrahepatic Cholelithiasis Immunohistochemistry
, 百拇医药
肝内结石病可伴有肝外胆管及胆囊结石，其中胆囊结石可能是肝内结石下移或
成石性肝胆汁在胆囊内重新形成的结石。胆囊是否主动参与了所伴胆囊结石的形
成过程，以及胆囊的形态学改变是否到了施行肝内结石手术时必须常规切除的程
度，目前研究尚少。本文报告了采用凝集素免疫组织化学结合常规粘液组织化学
方法对肝内结石病人肝内胆管及胆囊的形态学和组织化学特性进行的研究。
材料和方法
1.材料来源：肝内结石病人手术肝脏部分切除及胆囊切除标本15例，正常成
人肝脏及胆囊标本3例。肝脏标本取材于肝内大胆管，胆囊标本取材于胆囊底体部。
, http://www.100md.com
取材后用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。
2.切片及染色：每个蜡块连续切片10张，分别作HE，PAS/AB2.5，HID/AB2.5及
凝集素免疫组织化学染色。6种凝集素(已生物素化)及ABC试剂盒(PK2000)均购自
美国Vector实验室。凝集素染色方法按Hsu〔1〕ABC法操作，以Tris缓冲液取代凝
集素作阳性对照。凝集素染色的工作浓度及所显示的糖基类型见附表。
3.染色结果判断：①中性粘液：PAS/AB 2.5染色呈PAS+紫红色，AB-；②硫酸粘
液：HID/AB 2.5染色呈HID+棕褐色，AB-；③唾液酸粘液：HID/AB 2.5染色呈HID-，AB+蓝绿色。凝集素免疫组织化学染色阳性物质呈棕黄色。
, 百拇医药
附表 凝集素染色的工作浓度及所结合的糖类
凝集素(Lectin)
简称
工作浓度
糖 类
(Bandeiraea Simplicifdia)
BSL
1∶500
D-半乳糖
双花豆(Dolichos Biflorus Agglutinin)
DBA
, 百拇医药
1∶500
D-N-乙酰氨基半乳糖
豌 豆(Pisum Sativum Agglutinin)
PSA
1∶500
D-甘露糖 D-葡萄糖
花 生(Archis Hypogaea Agglutinin)
PNA
1∶500
半乳糖β(13)N-乙酰氨基半乳糖 D-葡萄糖
大 豆(Soybean Agglutinin)
, http://www.100md.com
SBA
1∶500
D-N-乙酰氨基半乳糖>>D-半乳糖
荆 豆-Ⅰ(Ulex Europaeus Agglutinin)
UEA1
1∶500
L-岩藻糖
结 果
正常肝内大胆管由单层低柱状上皮覆盖，粘膜完整，壁内腺体稀疏甚至缺如，且以浆液腺为主，少数为PAS+及HID+的粘液腺。正常胆囊粘膜形成许多皱襞，凸
向囊腔，上皮为单层柱状，排列紧密整齐。正常肝内胆管和胆囊上皮腔缘及顶浆
, 百拇医药
区有微细粘液颗粒，PAS及AB、HID呈弱阳性。肝内结石病人肝内大胆管壁增厚，上皮破坏严重，残存上皮增生成高柱状，或呈复层、乳头样及腺瘤样增生。胆管
壁内腺体明显增多，以粘液腺为主，主要见于胆管壁内层；浆液腺及混合型腺体
主要见于胆管壁外层。PAS/AB 2.5染色以AB+占大多数，少数为PAS+；HID/AB 2.5
染色以HID+占绝大多数，偶见AB+。浆液腺及胆管上皮腔缘及顶浆区也存在大量
HID+的粘液颗粒。肝内结石病人胆囊粘膜基本完整，皱襞存在，乳头仍明显；部
分病例可见上皮破坏或脱落，壁内炎症细胞浸润，残存上皮细胞增生成高柱状或
复层，细胞内粘液物质轻度增多，PAS和AB染色呈弱阳性至阳性。AB+物质为
, http://www.100md.com
HID+的硫酸粘液颗粒，可呈致密团块状，见于腔缘及顶浆区。大体上该部分病例
可见到胆囊内有结石存在。凝集素免疫组织化学染色显示正常和结石病人的肝内
大胆管及胆囊壁均存在凝集素受体表达。粘液腺细胞为全浆阳性，浆液腺及胆管
胆囊上皮为腔缘及细胞顶浆区阳性，与粘液组织化学染色粘液物质的分布范围相
对应，染色深度相似。肝内胆管及胆囊壁内粘液物质各类凝集素受体均阳性，都
以BSL及UEA1阳性最明显。但肝内结石病肝内胆管与胆囊凝集素受体阳性物质之
比远大于正常肝内胆管与胆囊凝集素受体阳性物质之比，表明粘液物质增多主要
, 百拇医药
在肝内胆管。伴有胆囊结石的肝内结石病人的胆囊凝集素受体阳性物质多于正常
胆囊。
讨 论
粘液物质通过凝胶赋形、促成核作用构成胆石的支架和基质，现已证实胆石
中的粘液物质为糖蛋白。动物实验证实，胆汁中糖蛋白浓度的升高是结石形成前
所见到的第一个异常现象〔2〕。肝内结石病人肝胆汁中糖蛋白浓度升高明显〔3
〕。肝内结石内部也发现有大量粘液物质〔4〕。文献报道肝内结石病人肝胆汁中
糖蛋白糖类主要为半乳糖、氨基半乳糖及岩藻糖〔3〕。我们的研究表明肝内结石
, http://www.100md.com
病人肝内胆管壁内粘液腺及粘液化的上皮细胞中也有丰富的上述糖类成分，故认
为肝内结石病人肝胆汁中增高的粘液糖蛋白来源于肝内胆管壁内增生的粘液腺和
粘液化的浆液腺及胆管上皮。
本研究观察到，肝内结石病人肝内胆管的粘液腺和粘液化上皮细胞与胆囊上
皮凝集素受体表达存在一致性，表明两个部位的粘液物质存在某种相似性。结合
伴有胆囊结石病人的胆囊粘膜也出现粘液分泌增加的现象，我们认为，胆囊胆汁
中的粘液物质不仅来自于肝胆汁，也产生于胆囊，此时的胆囊不只是一个形成结
石的解剖学场所，通过分泌粘液物质也主动参与了胆囊结石的形成过程。在量的
, 百拇医药
对比上，胆囊粘液物质明显少于肝内胆管，故支持肝内结石原发于肝内，而非肝
外结石上浮至肝内胆管的观点。
虽然部分病例胆囊粘膜上皮出现脱落，但大部分病例胆囊形态结构改变轻微，粘膜仍完整，上皮细胞粘液化程度轻。故在保留Oddi括约肌的肝内结石手术方式
上，胆囊并不一定常规切除。保留胆囊可有利于胆汁的浓缩贮存以及消化期间排
放。临床上保留Oddi括约肌用盲袢空肠与胆管吻合的手术实际上也为了部分重建
胆囊功能〔5〕。
参 考 文 献
1Hsu SM, Raine L. Versatility of biotin-labeled lecctins and avidin-biofin-peroxidase complex
, http://www.100md.com
for localization of carbohydrate in tissue sections. J Histochem Cytochem, 1982, 30: 157.
2Doty JE, Pitt HA, Kuchenbecker SL, et al. Role of gallbladder mucus in the pathogenesis of
cholesterol gallstones. Am J Surg, 1983, 145:54.
3Sasaki M, Mori T, Takahashi, et al. Role of bile glycoproteins in intrahepatic calculus
formation. J Jap Surg So, 1989, 90: 258.
4Terada T, Nakanuma Y. Morphological examination of intrahepatic bile ducts in hepatolithiasis.
Virchows Archiv A, 1988, 413: 167.
5邓绍庆，徐智，牛跃平，等.保留Oddi括约肌的肝胆管成形术4例报告.中国实
用外科杂志，1995，15：541.
(收稿：1997-01-30), 百拇医药
单位：646000 四川沪州医学院附院普外科(蓝祥海)；广州孙逸仙纪念医院普外科(邓宗)
关键词：肝管；肝内；胆结石；；免疫组织化学
中华肝胆外科杂志980107
【摘要】 采用凝集素免疫组织化学及常规粘液组织化学方法对15例肝内结
石病人及3例正常人肝脏的肝内胆管和胆囊的形态学及组织化学特性进行了研究。
结果表明，肝内结石病人肝内胆管壁内粘液腺大量增生，浆液腺及胆管上皮出现
粘液化改变；胆囊粘膜基本完整，上皮也有轻度粘液化；胆囊与肝内胆管的凝集
, 百拇医药
素受体表达存在一致性，阳性范围与粘液组织化学粘液染色区相对应，且均以岩
藻糖及半乳糖含量最丰富。故认为肝内结石主要形成于肝内，胆囊也主动参与了
所伴胆囊结石的形成，胆囊的改变不足以支持常规胆囊切除。
Study on mucous histochemistry and lectin receptor of intrahepatic bile ducts and
gallbladder in hepatolithiasis Lan Xianghai, Deng Zongdi. Department of General
Surgery, Affiliated Hospital of Luzhou Medical College, Sichuan 646000
, 百拇医药
【Abstract】 The morphology and histochemical features of intrahepatic bile ducts and
gallbladder in 15 patients with hepatolithiasis and livers of 3 normal subjects were studied
using lectin immunohistochemistry and conventional mucous histochemistry. The results
disclosed that there were a large amounts of proliferated mucous glands inside the
intrahepatic bile ductal wall in hepatolithiasis. Serous glands and intrahepatic bile duct
, 百拇医药
epithelia presented mucous metaplasia. The mucosa of gallbladder was intact on the
whole and appeared slight mucous metaplastic change. The expression of lectin receptor
in intrahepatic bile ducts and gallbladders showed no difference. The extent of lectin
positive stainings was corresponding with those of mucous histochemistry stainings. The
contents of fucose and mannose were more than other carbohydrats. Therefore, it might be
, 百拇医药
that intrahepatic calculi were mainly formed in intrahepatic bile ducts, while gallbladder
participated actively in the formation of accompaning gallbladder stones. The morphological
changes of gallbladder in hepatolithiasis were not enough to support performing conventional
cholecystectomy.
【Key words】 Bile ducts, lntrahepatic Cholelithiasis Immunohistochemistry
, 百拇医药
肝内结石病可伴有肝外胆管及胆囊结石，其中胆囊结石可能是肝内结石下移或
成石性肝胆汁在胆囊内重新形成的结石。胆囊是否主动参与了所伴胆囊结石的形
成过程，以及胆囊的形态学改变是否到了施行肝内结石手术时必须常规切除的程
度，目前研究尚少。本文报告了采用凝集素免疫组织化学结合常规粘液组织化学
方法对肝内结石病人肝内胆管及胆囊的形态学和组织化学特性进行的研究。
材料和方法
1.材料来源：肝内结石病人手术肝脏部分切除及胆囊切除标本15例，正常成
人肝脏及胆囊标本3例。肝脏标本取材于肝内大胆管，胆囊标本取材于胆囊底体部。
, http://www.100md.com
取材后用10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋。
2.切片及染色：每个蜡块连续切片10张，分别作HE，PAS/AB2.5，HID/AB2.5及
凝集素免疫组织化学染色。6种凝集素(已生物素化)及ABC试剂盒(PK2000)均购自
美国Vector实验室。凝集素染色方法按Hsu〔1〕ABC法操作，以Tris缓冲液取代凝
集素作阳性对照。凝集素染色的工作浓度及所显示的糖基类型见附表。
3.染色结果判断：①中性粘液：PAS/AB 2.5染色呈PAS+紫红色，AB-；②硫酸粘
液：HID/AB 2.5染色呈HID+棕褐色，AB-；③唾液酸粘液：HID/AB 2.5染色呈HID-，AB+蓝绿色。凝集素免疫组织化学染色阳性物质呈棕黄色。
, 百拇医药
附表 凝集素染色的工作浓度及所结合的糖类
凝集素(Lectin)
简称
工作浓度
糖 类
(Bandeiraea Simplicifdia)
BSL
1∶500
D-半乳糖
双花豆(Dolichos Biflorus Agglutinin)
DBA
, 百拇医药
1∶500
D-N-乙酰氨基半乳糖
豌 豆(Pisum Sativum Agglutinin)
PSA
1∶500
D-甘露糖 D-葡萄糖
花 生(Archis Hypogaea Agglutinin)
PNA
1∶500
半乳糖β(13)N-乙酰氨基半乳糖 D-葡萄糖
大 豆(Soybean Agglutinin)
, http://www.100md.com
SBA
1∶500
D-N-乙酰氨基半乳糖>>D-半乳糖
荆 豆-Ⅰ(Ulex Europaeus Agglutinin)
UEA1
1∶500
L-岩藻糖
结 果
正常肝内大胆管由单层低柱状上皮覆盖，粘膜完整，壁内腺体稀疏甚至缺如，且以浆液腺为主，少数为PAS+及HID+的粘液腺。正常胆囊粘膜形成许多皱襞，凸
向囊腔，上皮为单层柱状，排列紧密整齐。正常肝内胆管和胆囊上皮腔缘及顶浆
, 百拇医药
区有微细粘液颗粒，PAS及AB、HID呈弱阳性。肝内结石病人肝内大胆管壁增厚，上皮破坏严重，残存上皮增生成高柱状，或呈复层、乳头样及腺瘤样增生。胆管
壁内腺体明显增多，以粘液腺为主，主要见于胆管壁内层；浆液腺及混合型腺体
主要见于胆管壁外层。PAS/AB 2.5染色以AB+占大多数，少数为PAS+；HID/AB 2.5
染色以HID+占绝大多数，偶见AB+。浆液腺及胆管上皮腔缘及顶浆区也存在大量
HID+的粘液颗粒。肝内结石病人胆囊粘膜基本完整，皱襞存在，乳头仍明显；部
分病例可见上皮破坏或脱落，壁内炎症细胞浸润，残存上皮细胞增生成高柱状或
复层，细胞内粘液物质轻度增多，PAS和AB染色呈弱阳性至阳性。AB+物质为
, http://www.100md.com
HID+的硫酸粘液颗粒，可呈致密团块状，见于腔缘及顶浆区。大体上该部分病例
可见到胆囊内有结石存在。凝集素免疫组织化学染色显示正常和结石病人的肝内
大胆管及胆囊壁均存在凝集素受体表达。粘液腺细胞为全浆阳性，浆液腺及胆管
胆囊上皮为腔缘及细胞顶浆区阳性，与粘液组织化学染色粘液物质的分布范围相
对应，染色深度相似。肝内胆管及胆囊壁内粘液物质各类凝集素受体均阳性，都
以BSL及UEA1阳性最明显。但肝内结石病肝内胆管与胆囊凝集素受体阳性物质之
比远大于正常肝内胆管与胆囊凝集素受体阳性物质之比，表明粘液物质增多主要
, 百拇医药
在肝内胆管。伴有胆囊结石的肝内结石病人的胆囊凝集素受体阳性物质多于正常
胆囊。
讨 论
粘液物质通过凝胶赋形、促成核作用构成胆石的支架和基质，现已证实胆石
中的粘液物质为糖蛋白。动物实验证实，胆汁中糖蛋白浓度的升高是结石形成前
所见到的第一个异常现象〔2〕。肝内结石病人肝胆汁中糖蛋白浓度升高明显〔3
〕。肝内结石内部也发现有大量粘液物质〔4〕。文献报道肝内结石病人肝胆汁中
糖蛋白糖类主要为半乳糖、氨基半乳糖及岩藻糖〔3〕。我们的研究表明肝内结石
, http://www.100md.com
病人肝内胆管壁内粘液腺及粘液化的上皮细胞中也有丰富的上述糖类成分，故认
为肝内结石病人肝胆汁中增高的粘液糖蛋白来源于肝内胆管壁内增生的粘液腺和
粘液化的浆液腺及胆管上皮。
本研究观察到，肝内结石病人肝内胆管的粘液腺和粘液化上皮细胞与胆囊上
皮凝集素受体表达存在一致性，表明两个部位的粘液物质存在某种相似性。结合
伴有胆囊结石病人的胆囊粘膜也出现粘液分泌增加的现象，我们认为，胆囊胆汁
中的粘液物质不仅来自于肝胆汁，也产生于胆囊，此时的胆囊不只是一个形成结
石的解剖学场所，通过分泌粘液物质也主动参与了胆囊结石的形成过程。在量的
, 百拇医药
对比上，胆囊粘液物质明显少于肝内胆管，故支持肝内结石原发于肝内，而非肝
外结石上浮至肝内胆管的观点。
虽然部分病例胆囊粘膜上皮出现脱落，但大部分病例胆囊形态结构改变轻微，粘膜仍完整，上皮细胞粘液化程度轻。故在保留Oddi括约肌的肝内结石手术方式
上，胆囊并不一定常规切除。保留胆囊可有利于胆汁的浓缩贮存以及消化期间排
放。临床上保留Oddi括约肌用盲袢空肠与胆管吻合的手术实际上也为了部分重建
胆囊功能〔5〕。
参 考 文 献
1Hsu SM, Raine L. Versatility of biotin-labeled lecctins and avidin-biofin-peroxidase complex
, http://www.100md.com
for localization of carbohydrate in tissue sections. J Histochem Cytochem, 1982, 30: 157.
2Doty JE, Pitt HA, Kuchenbecker SL, et al. Role of gallbladder mucus in the pathogenesis of
cholesterol gallstones. Am J Surg, 1983, 145:54.
3Sasaki M, Mori T, Takahashi, et al. Role of bile glycoproteins in intrahepatic calculus
formation. J Jap Surg So, 1989, 90: 258.
4Terada T, Nakanuma Y. Morphological examination of intrahepatic bile ducts in hepatolithiasis.
Virchows Archiv A, 1988, 413: 167.
5邓绍庆，徐智，牛跃平，等.保留Oddi括约肌的肝胆管成形术4例报告.中国实
用外科杂志，1995，15：541.
(收稿：1997-01-30), 百拇医药