广西130株非O1群霍乱弧菌血清学分型及噬菌体—生物分型研究
作者：李翠云 谭冬梅 王鸣柳 权怡
单位：广西壮族自治区卫生防疫站，南宁 530021
关键词：非O1群霍乱弧菌噬菌体型生物型
广西预防医学000401
[摘要]目的将噬菌体—生物分型方法应用到非O1群霍乱弧菌的分型，以掌握广西地区非O1群霍乱弧菌血清型别的分布，并对此分型方法进行探讨。方法收集广西部分地区130株非O1群霍乱弧菌进行血清学分型和噬菌体—生物分型，并用多聚酶链反应(PCR)进行霍乱肠毒素检测。结果在130株菌株中有90株可以分型，占69.23%，分布于34个血清型，腹泻病人菌株可分为14个血清型，其中以O2为优势血清型，外环境菌株分布于31个血清型，以O21、O32为优势血清型。107株非O1群霍乱弧菌共分为14个噬菌体型，4个生物型，用PCR方法检测其中17株非O1群霍乱弧菌肠毒素(CT)为阴性。结论腹泻病人与外环境菌株的优势血清型别不同，而噬菌体—生物分型结果基本一致，肠毒素检测为阴性，因此，不具备引起流行的能力，为非流行株。
, 百拇医药
中图分类号：R378.3 文献标识码：A
文章编号：1007-158X(2000)04-0193-05
Study on serotyping and phage-biotyping of 130 V.cholerae non-O1 strains in Guangxi
LI Cuiyun,TAN Dongmei,WANG Mingliu,et al
(Guangxi Health ＆ Anti-epidemic Center ,Nanning 530021)
[Abstract] Objective To understand the distribution of different serotypes of V.cholerae non-O1 in Guangxi and to evaluate the method of phage-bioty ping. Methods Serotyping and phage-biotyping systems were used to examine 130 V. cholerae non-O1 strains collected from some areas in Guangxi, and cholera toxin (CT) was detected by PCR.Results 90 strains (69.23% ) were subdivided into 34 serotypes among 130 ones.The strains isolated from diarrhea patients were dividedinto 14 serotypes,with O2 predominant; the strains from environment were dividedinto 31 serotypes,with O1and O32 predominant.107 V.cholerae non-O1 strains were identified 14 phagetypes and 4 biotypes.CT detection of 17 strains by PCR was negative.Conclusion Predominant serotypes from diarrhea patients were different from those from environment,while the results of phage-biotyping were nearly the same .CT negative confirmed that these strains were non-epidemic ones and could not cause epidemic.
, 百拇医药
[Key words]V.cholerae non-O1 Phagetype Biotype
非O1群霍乱弧菌是一群与O1群霍乱弧菌生化性状相似、菌体抗原不同的细菌，分布广泛，可从世界许多地区的淡水、河水和外环境中分离出。可引起人的霍乱样腹泻、食物性胃肠炎及肠道外感染，是一群重要的致腹泻病原菌。我区常有由非O1群霍乱弧菌引起腹泻的病例发生。我们对1995～1997年间收集的130株非O1群霍乱弧菌进行了血清学分型、噬菌体—生物分型及药敏试验，并选其中17株应用多聚酶链反应(PCR)进行霍乱肠毒素(CT)检测，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 1995～1997年我区各腹泻病监测点送检的非O1群霍乱弧菌130株，其中腹泻病人38株，外环境92株(各类水源、海产品、河鱼等)。全部菌株的生化鉴定均按文献[1]方法进行。
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1.2 血清分型 菌株先用霍乱“O”多价、O139群、R型诊断血清做玻片凝集，排除O1群、O139群霍乱弧菌后，再用非O1群18种多价血清作玻片凝集，而后用相应的VBO单价血清确定血清型。O1群、O139群、R型、非O1群诊断血清均购于中国药品生物制品检定所，在有效期内使用。
1.3 噬菌体及实验用菌 5组弧菌分型噬菌体(VP1～VP5)，溶原性噬菌体及溶原性检测指示菌均由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供(简称流研所)。
1.4 药敏试验 采用WHO推荐的改良K-B法。药敏纸片、水解酪蛋白琼脂培养基均购自中国药品生物制品检定所，在有效期内使用，判定标准采用三级报告法，以大肠杆菌ATCC25922，金葡菌ATCC25923作为质控菌株。
1.5 噬菌体—生物分型方法 按1987年卫生部防疫司《霍乱防治手册》进行。
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1.6 PCR检测方法 本试验采用的CT基因扩增引物为中国预防医学科学院流研所基因工程室提供，dNTPs、TaqDNA聚合酶为华美公司产品。按常规方法提取染色体DNA，扩增反应采用二步法进行，首轮循环94℃4分钟，60℃1分钟，后续循环为94℃0.5分钟，60℃1分钟，29个循环后，加末轮循环72℃7分钟，扩增完成后经1%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察扩增结果。
2 结果
2.1 生物学性状 全部菌株在普通营养琼脂平板上生长良好，均为革兰氏阴性、无芽胞、弧状或短杆状，氧化酶和粘丝试验阳性。分解葡萄糖产酸不产气，分解甘露糖、蔗糖，不分解阿拉伯糖、肌醇，精氨酸双水解酶阴性，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性，有动力，在无盐、3%盐胨水中生长，8%、10%盐胨水中不生长，所有菌株符合霍乱弧菌生化性状。
2.2 血清学分型结果 在130株非O1群霍乱弧菌中，能分型者90株，分型率为69.23%，分布于34个血清型，不能分型者40株(30.77%)。其中来自腹泻病人38株，26株可分型，分型率为68.42%，分为14个血清型，以O2血清型检出最多共8株，占30.77%，来自外环境92株，64株可分型，分型率为69.56%，共分为31个血清型，血清型别较分散，以O21、O32血清型最为多见，各占9.38%，次为O11、O9、O47血清型，分别为7.81%、6.25%,见表1。
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表1 130株非01群霍乱弧菌血清型分布 血清型
VBO
腹泻病人
外环境
株数
%
株数
%
2
8
30.77
4
2
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3.13
5
1
1.56
6
1
3.85
1
1.56
7
2
7.69
3
4.69
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8
2
7.69
2
3.13
9
1
3.85
4
6.25
10
1
1.56
11
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2
7.69
5
7.81
13
1
3.85
3
4.69
16
1
3.85
17
1
, 百拇医药
1.56
18
1
1.56
19
2
3.13
20
1
1.56
21
6
9.38
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1
1.56
29
1
3.85
2
3.13
32
2
7.69
6
9.38
36
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1
1.56
37
1
1.56
38
1
3.85
2
3.13
43
1
1.56
47
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1
3.85
4
6.25
49
2
3.13
51
2
7.69
3
4.69
57
1
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1.56
58
1
1.56
60
2
3.13
62
1
1.56
65
1
1.56
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1
1.56
76
1
3.85
77
1
1.56
合计
26
100
64
100
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2.3 噬菌体—生物分型 (1)噬菌体分型：用5组弧菌分型噬菌体对107株非O1群霍乱弧菌进行裂解，其中52株能被5组弧菌噬菌体不同程度裂解，占48.60%，其余55株对5组弧菌噬菌体均抵抗，按照分型标准，107株非O1群霍乱弧菌可分为14个噬菌体型，其中腹泻病人34株，分为13个噬菌体型，有不同程度裂解的以21、26型居多，对5组弧菌噬菌体全抵抗者(32型)占41.18%。来自外环境的73株非O1群霍乱弧菌被分成10个噬菌体型，裂解程度不一的以21、26、28型多见，56.16%对5组弧菌噬菌体全抵抗(32型)，见表2。(2)生物分型：107株非O1群霍乱弧菌对溶原性和溶原性噬菌体敏感性都为阴性，溶血试验和山梨醇发酵试验同为阳性有103株，其余4株为阴性，根据4项生物试验结果，按照分型表，判定107株非01群霍乱弧菌分为4个生物型，e型2株(1.87%)，f型2株(1.87%)，k型54株(50.47%)，l型49株(45.79%)。表2 107株非01群霍乱弧菌噬菌体-生物分型结果 噬菌体型
腹泻病人
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外环境
合计
e
f
k
l
e
f
k
l
1
1
2
3
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2
1
1
2
6
1
1
1
3
8
1
1
13
1
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1
14
2
2
17
1
1
2
18
1
1
19
1
1
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21
2
2
2
3
9
26
1
2
6
3
12
28
2
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3
4
9
30
2
4
32
13
1
1 2
16
22
55
合计
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1
22
11
1 2
32
38
107
2.4 药敏试验结果 对97株非O1群霍乱弧菌(腹泻病人36株，外环境61株)，进行了11种药物敏感性测定，结果对氟哌酸、庆大霉素、卡那霉素、强力霉素、丁胺卡那霉素敏感率在90.72%以上，对链霉素、四环素、痢特灵、复方新诺明的耐药率分别为24.74%、19.59%、12.37%、11.34%。腹泻病人菌株比外环境菌株的耐药现象严重，见表3。表3 97株非O1群霍乱弧菌药敏试验结果 药物
名称
, 百拇医药
敏感株数(%)
中敏株数(%)
耐药株数(%)
腹泻病人
外环境
腹泻病人
外环境
腹泻病人
外环境
氟哌酸
36(100)
61(100)
氯霉素
, 百拇医药
32(88.8)
55(90.16)
4(11.11)
5(8.20)
1(1.64)
庆大霉素
36(100)
60(98.36)
1(1.64)
复方新诺明
27(75)
50(82)
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5(13.89)
4(6.56)
4(11.11)
7(11.48)
四环素
26(72.22)
49(80.33)
1(2.78)
2(3.28)
9(25.00)
10(16.39)
强力霉素
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32(88.89)
57(93.44)
3(8.33)
1(2.78)
4(6.56)
卡那霉素
29(80.55)
61(100)
7(19.44)
红霉素
4(11.11)
20(32.79)
, 百拇医药
32(88.89)
40(65.57)
1(1.63)
痢特灵
30(83.33)
55(90.16)
6(16.67)
6(9.84)
链霉素
13(36.11)
37(60.66)
8(22.22)
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15(24.59)
15(41.66)
9(14.75)
丁胺卡那霉素
30(83.33)
58(95.08)
4(11.11)
1(1.64)
2(5.56)
2(3.28)
2.5 CT基因检测结果 选取不同来源、不同血清型别的代表菌17株，采用PCR扩增法进行CT基因检测，结果显示，17株非O1群霍乱弧菌均无扩增带出现。
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3 讨论
对130株非O1群霍乱弧菌，按我国VBO分型系统分型，总分型率为69.23%，共分布于34个血清型，其中腹泻病人菌株分型率为68.42%，分布于14个血清型，O2血清型占可分型菌株的30.77%，为优势血清型，与安徽、北京、广东等省报告的优势血清型别一致[2,4]。外环境菌株分型率为69.56%，分布于31个血清型，血清型别较分散，以O21、O32型为常见血清型。腹泻病人与外环境的优势血清型别完全不同，说明不同来源菌株的血清型别存在一定差异，腹泻病人菌株型别较集中，而外环境菌株型别较分散、复杂。
通过本次血清学分型试验，可见我国非O1群霍乱弧菌VBO分型系统能使大多数非01群霍乱弧菌分型，分型率达69.23%，这对病原学及流行病学分析有着重要意义，但还有30.77%的菌株不能分型，这是否为新的血清型有待进一步研究。此外，目前我国与国外的分型系统不尽相同，我国的分型系统有必要在现有的基础上，与国外的分型系统进一步比较分析使之更加完善，从而提高我国的非O1群霍乱弧菌的分型率。
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弧菌噬菌体—生物分型是O1群霍乱弧菌的分型方法，可将O1群霍乱弧菌区分为流行株和非流行株两类菌株，对菌型鉴定和追溯传染来源、分析传播途径和预测流行趋势有着重要价值[5]。我们将这一方法应用到非O1群霍乱弧菌的分型，作探讨性研究。107株非O1群霍乱弧菌经5组弧菌噬菌体裂解和生物分型试验，共为14个噬菌体型，4个生物型，腹泻病人菌株与外环境菌株的噬菌体—生物分型基本一致。噬菌体主要型别有21、26、28和32型，生物型主要集中在k、l两个型别。
霍乱肠毒素(CT)是霍乱弧菌的主要致病因子之一。CT基因的存在代表着该菌株引起流行的潜在可能性。因此，CT的检测对临床及流行病学都具有重要意义。本次采用目前最为简便、快速、敏感、特异的PCR方法，检测不同来源、不同型别的17株非O1群霍乱弧菌CT基因。结果表明CT基因检测均为阴性，不具备引起流行的能力，与噬菌体—生物分型结果相同，同属于非流行株。
药敏试验结果表明，97株菌对氟哌酸、庆大霉素、卡那霉素、强力霉素、丁胺卡那霉素敏感率在90.72%以上，具有良好的敏感性，对复方新诺明、痢特灵、四环素、链霉素产生11.34%～24.74%的耐药性。提示已有耐药菌株出现。为了控制和避免耐药菌株比例的不断增加，应加强细菌耐药性的监测工作，掌握非O1群霍乱弧菌菌株耐药性的变迁，以指导临床科学合理用药。
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作者简介：李翠云(1957-)，女，广西百色市人,主管技师，主要从事细菌性疾病病原学和流行病学的研究。
参考文献
1，吴顺娥，王晓春，陈于寿.致病性弧菌检验程序的建议[J].中华流行病学杂志,1991，12(特刊3号)：123-126
2，丁业荣，宁传保，时全，等.非O1群霍乱弧菌在水源中的分布与腹泻病关系的研究[J].中华流行病学杂志,1997,18(5-B)：421-425
3，谢令仪，袁茂欣，王莉萍，等.北京市西城区190株非O1群霍乱弧菌血清型分布[J].中华流行病学杂志,1991,12(特刊3号)：47-48
4，莫美仪，周明岛，李恭书，等.广东地区212株非O1群霍乱弧菌血清学分型[J].中华流行病学杂志,1988,9(特刊3号)：431-434
5，高守一.埃尔托型霍乱弧菌流行株和非流行株
两类菌株的研究及应用[J].中华流行病学杂志,1988,9(特刊3号)：10-2631
1999-11-18收稿。2000-02-15修回, 百拇医药
单位：广西壮族自治区卫生防疫站，南宁 530021
关键词：非O1群霍乱弧菌噬菌体型生物型
广西预防医学000401
[摘要]目的将噬菌体—生物分型方法应用到非O1群霍乱弧菌的分型，以掌握广西地区非O1群霍乱弧菌血清型别的分布，并对此分型方法进行探讨。方法收集广西部分地区130株非O1群霍乱弧菌进行血清学分型和噬菌体—生物分型，并用多聚酶链反应(PCR)进行霍乱肠毒素检测。结果在130株菌株中有90株可以分型，占69.23%，分布于34个血清型，腹泻病人菌株可分为14个血清型，其中以O2为优势血清型，外环境菌株分布于31个血清型，以O21、O32为优势血清型。107株非O1群霍乱弧菌共分为14个噬菌体型，4个生物型，用PCR方法检测其中17株非O1群霍乱弧菌肠毒素(CT)为阴性。结论腹泻病人与外环境菌株的优势血清型别不同，而噬菌体—生物分型结果基本一致，肠毒素检测为阴性，因此，不具备引起流行的能力，为非流行株。
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中图分类号：R378.3 文献标识码：A
文章编号：1007-158X(2000)04-0193-05
Study on serotyping and phage-biotyping of 130 V.cholerae non-O1 strains in Guangxi
LI Cuiyun,TAN Dongmei,WANG Mingliu,et al
(Guangxi Health ＆ Anti-epidemic Center ,Nanning 530021)
[Abstract] Objective To understand the distribution of different serotypes of V.cholerae non-O1 in Guangxi and to evaluate the method of phage-bioty ping. Methods Serotyping and phage-biotyping systems were used to examine 130 V. cholerae non-O1 strains collected from some areas in Guangxi, and cholera toxin (CT) was detected by PCR.Results 90 strains (69.23% ) were subdivided into 34 serotypes among 130 ones.The strains isolated from diarrhea patients were dividedinto 14 serotypes,with O2 predominant; the strains from environment were dividedinto 31 serotypes,with O1and O32 predominant.107 V.cholerae non-O1 strains were identified 14 phagetypes and 4 biotypes.CT detection of 17 strains by PCR was negative.Conclusion Predominant serotypes from diarrhea patients were different from those from environment,while the results of phage-biotyping were nearly the same .CT negative confirmed that these strains were non-epidemic ones and could not cause epidemic.
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[Key words]V.cholerae non-O1 Phagetype Biotype
非O1群霍乱弧菌是一群与O1群霍乱弧菌生化性状相似、菌体抗原不同的细菌，分布广泛，可从世界许多地区的淡水、河水和外环境中分离出。可引起人的霍乱样腹泻、食物性胃肠炎及肠道外感染，是一群重要的致腹泻病原菌。我区常有由非O1群霍乱弧菌引起腹泻的病例发生。我们对1995～1997年间收集的130株非O1群霍乱弧菌进行了血清学分型、噬菌体—生物分型及药敏试验，并选其中17株应用多聚酶链反应(PCR)进行霍乱肠毒素(CT)检测，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 1995～1997年我区各腹泻病监测点送检的非O1群霍乱弧菌130株，其中腹泻病人38株，外环境92株(各类水源、海产品、河鱼等)。全部菌株的生化鉴定均按文献[1]方法进行。
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1.2 血清分型 菌株先用霍乱“O”多价、O139群、R型诊断血清做玻片凝集，排除O1群、O139群霍乱弧菌后，再用非O1群18种多价血清作玻片凝集，而后用相应的VBO单价血清确定血清型。O1群、O139群、R型、非O1群诊断血清均购于中国药品生物制品检定所，在有效期内使用。
1.3 噬菌体及实验用菌 5组弧菌分型噬菌体(VP1～VP5)，溶原性噬菌体及溶原性检测指示菌均由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所提供(简称流研所)。
1.4 药敏试验 采用WHO推荐的改良K-B法。药敏纸片、水解酪蛋白琼脂培养基均购自中国药品生物制品检定所，在有效期内使用，判定标准采用三级报告法，以大肠杆菌ATCC25922，金葡菌ATCC25923作为质控菌株。
1.5 噬菌体—生物分型方法 按1987年卫生部防疫司《霍乱防治手册》进行。
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1.6 PCR检测方法 本试验采用的CT基因扩增引物为中国预防医学科学院流研所基因工程室提供，dNTPs、TaqDNA聚合酶为华美公司产品。按常规方法提取染色体DNA，扩增反应采用二步法进行，首轮循环94℃4分钟，60℃1分钟，后续循环为94℃0.5分钟，60℃1分钟，29个循环后，加末轮循环72℃7分钟，扩增完成后经1%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察扩增结果。
2 结果
2.1 生物学性状 全部菌株在普通营养琼脂平板上生长良好，均为革兰氏阴性、无芽胞、弧状或短杆状，氧化酶和粘丝试验阳性。分解葡萄糖产酸不产气，分解甘露糖、蔗糖，不分解阿拉伯糖、肌醇，精氨酸双水解酶阴性，赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶阳性，有动力，在无盐、3%盐胨水中生长，8%、10%盐胨水中不生长，所有菌株符合霍乱弧菌生化性状。
2.2 血清学分型结果 在130株非O1群霍乱弧菌中，能分型者90株，分型率为69.23%，分布于34个血清型，不能分型者40株(30.77%)。其中来自腹泻病人38株，26株可分型，分型率为68.42%，分为14个血清型，以O2血清型检出最多共8株，占30.77%，来自外环境92株，64株可分型，分型率为69.56%，共分为31个血清型，血清型别较分散，以O21、O32血清型最为多见，各占9.38%，次为O11、O9、O47血清型，分别为7.81%、6.25%,见表1。
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表1 130株非01群霍乱弧菌血清型分布 血清型
VBO
腹泻病人
外环境
株数
%
株数
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3.13
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2
7.69
3
4.69
57
1
, 百拇医药
1.56
58
1
1.56
60
2
3.13
62
1
1.56
65
1
1.56
, http://www.100md.com 66
1
1.56
76
1
3.85
77
1
1.56
合计
26
100
64
100
, 百拇医药
2.3 噬菌体—生物分型 (1)噬菌体分型：用5组弧菌分型噬菌体对107株非O1群霍乱弧菌进行裂解，其中52株能被5组弧菌噬菌体不同程度裂解，占48.60%，其余55株对5组弧菌噬菌体均抵抗，按照分型标准，107株非O1群霍乱弧菌可分为14个噬菌体型，其中腹泻病人34株，分为13个噬菌体型，有不同程度裂解的以21、26型居多，对5组弧菌噬菌体全抵抗者(32型)占41.18%。来自外环境的73株非O1群霍乱弧菌被分成10个噬菌体型，裂解程度不一的以21、26、28型多见，56.16%对5组弧菌噬菌体全抵抗(32型)，见表2。(2)生物分型：107株非O1群霍乱弧菌对溶原性和溶原性噬菌体敏感性都为阴性，溶血试验和山梨醇发酵试验同为阳性有103株，其余4株为阴性，根据4项生物试验结果，按照分型表，判定107株非01群霍乱弧菌分为4个生物型，e型2株(1.87%)，f型2株(1.87%)，k型54株(50.47%)，l型49株(45.79%)。表2 107株非01群霍乱弧菌噬菌体-生物分型结果 噬菌体型
腹泻病人
, http://www.100md.com
外环境
合计
e
f
k
l
e
f
k
l
1
1
2
3
, http://www.100md.com
2
1
1
2
6
1
1
1
3
8
1
1
13
1
, 百拇医药
1
14
2
2
17
1
1
2
18
1
1
19
1
1
, 百拇医药
21
2
2
2
3
9
26
1
2
6
3
12
28
2
, 百拇医药
3
4
9
30
2
4
32
13
1
1 2
16
22
55
合计
, http://www.100md.com
1
22
11
1 2
32
38
107
2.4 药敏试验结果 对97株非O1群霍乱弧菌(腹泻病人36株，外环境61株)，进行了11种药物敏感性测定，结果对氟哌酸、庆大霉素、卡那霉素、强力霉素、丁胺卡那霉素敏感率在90.72%以上，对链霉素、四环素、痢特灵、复方新诺明的耐药率分别为24.74%、19.59%、12.37%、11.34%。腹泻病人菌株比外环境菌株的耐药现象严重，见表3。表3 97株非O1群霍乱弧菌药敏试验结果 药物
名称
, 百拇医药
敏感株数(%)
中敏株数(%)
耐药株数(%)
腹泻病人
外环境
腹泻病人
外环境
腹泻病人
外环境
氟哌酸
36(100)
61(100)
氯霉素
, 百拇医药
32(88.8)
55(90.16)
4(11.11)
5(8.20)
1(1.64)
庆大霉素
36(100)
60(98.36)
1(1.64)
复方新诺明
27(75)
50(82)
, http://www.100md.com
5(13.89)
4(6.56)
4(11.11)
7(11.48)
四环素
26(72.22)
49(80.33)
1(2.78)
2(3.28)
9(25.00)
10(16.39)
强力霉素
, 百拇医药
32(88.89)
57(93.44)
3(8.33)
1(2.78)
4(6.56)
卡那霉素
29(80.55)
61(100)
7(19.44)
红霉素
4(11.11)
20(32.79)
, 百拇医药
32(88.89)
40(65.57)
1(1.63)
痢特灵
30(83.33)
55(90.16)
6(16.67)
6(9.84)
链霉素
13(36.11)
37(60.66)
8(22.22)
, http://www.100md.com
15(24.59)
15(41.66)
9(14.75)
丁胺卡那霉素
30(83.33)
58(95.08)
4(11.11)
1(1.64)
2(5.56)
2(3.28)
2.5 CT基因检测结果 选取不同来源、不同血清型别的代表菌17株，采用PCR扩增法进行CT基因检测，结果显示，17株非O1群霍乱弧菌均无扩增带出现。
, 百拇医药
3 讨论
对130株非O1群霍乱弧菌，按我国VBO分型系统分型，总分型率为69.23%，共分布于34个血清型，其中腹泻病人菌株分型率为68.42%，分布于14个血清型，O2血清型占可分型菌株的30.77%，为优势血清型，与安徽、北京、广东等省报告的优势血清型别一致[2,4]。外环境菌株分型率为69.56%，分布于31个血清型，血清型别较分散，以O21、O32型为常见血清型。腹泻病人与外环境的优势血清型别完全不同，说明不同来源菌株的血清型别存在一定差异，腹泻病人菌株型别较集中，而外环境菌株型别较分散、复杂。
通过本次血清学分型试验，可见我国非O1群霍乱弧菌VBO分型系统能使大多数非01群霍乱弧菌分型，分型率达69.23%，这对病原学及流行病学分析有着重要意义，但还有30.77%的菌株不能分型，这是否为新的血清型有待进一步研究。此外，目前我国与国外的分型系统不尽相同，我国的分型系统有必要在现有的基础上，与国外的分型系统进一步比较分析使之更加完善，从而提高我国的非O1群霍乱弧菌的分型率。
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弧菌噬菌体—生物分型是O1群霍乱弧菌的分型方法，可将O1群霍乱弧菌区分为流行株和非流行株两类菌株，对菌型鉴定和追溯传染来源、分析传播途径和预测流行趋势有着重要价值[5]。我们将这一方法应用到非O1群霍乱弧菌的分型，作探讨性研究。107株非O1群霍乱弧菌经5组弧菌噬菌体裂解和生物分型试验，共为14个噬菌体型，4个生物型，腹泻病人菌株与外环境菌株的噬菌体—生物分型基本一致。噬菌体主要型别有21、26、28和32型，生物型主要集中在k、l两个型别。
霍乱肠毒素(CT)是霍乱弧菌的主要致病因子之一。CT基因的存在代表着该菌株引起流行的潜在可能性。因此，CT的检测对临床及流行病学都具有重要意义。本次采用目前最为简便、快速、敏感、特异的PCR方法，检测不同来源、不同型别的17株非O1群霍乱弧菌CT基因。结果表明CT基因检测均为阴性，不具备引起流行的能力，与噬菌体—生物分型结果相同，同属于非流行株。
药敏试验结果表明，97株菌对氟哌酸、庆大霉素、卡那霉素、强力霉素、丁胺卡那霉素敏感率在90.72%以上，具有良好的敏感性，对复方新诺明、痢特灵、四环素、链霉素产生11.34%～24.74%的耐药性。提示已有耐药菌株出现。为了控制和避免耐药菌株比例的不断增加，应加强细菌耐药性的监测工作，掌握非O1群霍乱弧菌菌株耐药性的变迁，以指导临床科学合理用药。
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作者简介：李翠云(1957-)，女，广西百色市人,主管技师，主要从事细菌性疾病病原学和流行病学的研究。
参考文献
1，吴顺娥，王晓春，陈于寿.致病性弧菌检验程序的建议[J].中华流行病学杂志,1991，12(特刊3号)：123-126
2，丁业荣，宁传保，时全，等.非O1群霍乱弧菌在水源中的分布与腹泻病关系的研究[J].中华流行病学杂志,1997,18(5-B)：421-425
3，谢令仪，袁茂欣，王莉萍，等.北京市西城区190株非O1群霍乱弧菌血清型分布[J].中华流行病学杂志,1991,12(特刊3号)：47-48
4，莫美仪，周明岛，李恭书，等.广东地区212株非O1群霍乱弧菌血清学分型[J].中华流行病学杂志,1988,9(特刊3号)：431-434
5，高守一.埃尔托型霍乱弧菌流行株和非流行株
两类菌株的研究及应用[J].中华流行病学杂志,1988,9(特刊3号)：10-2631
1999-11-18收稿。2000-02-15修回, 百拇医药