非诺多泮对鼠肺动脉cAMP产生系统的影响
作者：朱琳 付蕾 赵荣瑞 王学彪 范儒堂
单位：
关键词：受体激动剂；肺动脉
中国现代医学杂志001132 分类号 R543.2
近些年来发现多巴胺受体激动剂对外周循环有较强的生物效应 ，对某些 心血管疾病已显示出特殊的疗效。虽然离体与在体实验均已证明肺动脉上存在DA1受体 [1]。而关于肺动脉DA受体的生化研究尚很少，现有证据表明刺激外周DA1受体可 引起AC活性的升高，本实验拟在观察DA1受体激动剂非诺多泮(Fenaldopam)对肺动脉的AC 活性刺激效应，借以阐明肺动脉DA1受体的生理作用和机能意义。
1 材料和方法1.1 标本制备
, 百拇医药
Wistar鼠(180～120g)，雌雄不拘，戊巴比妥钠(60mg/kg)麻醉，取出肺动脉置于冰冷的充有 饱和气体(95%±5%CO2)的Kreb's液器皿中，仔细清除周围结缔组织，放入持续充有95%± 5%CO2的Kreb's液浴槽内(pH 7.4，37℃)，平均90min，溶液每30min换液1次，受试药物 浸泡2min，快速移出血管，滤纸吸干，存于液氮内。
1.2 组织样品处理
将组织从液氮内取出放入冰箱(-80℃)30min，取血管剪碎放入盛有1ml冰冷的6%三氯乙酸溶 液匀浆器内，用玻璃匀浆器在冰浴中制备匀浆，低温离心(25r/min>10min)，取上清液， 用乙醚提取上清液4次，将上清液放入待测试管60℃吹干。
1.3 cAMP含量放射免疫测定
依文献及药盒说明制备cAMP标准曲线，向样品内加入100μl醋酸缓冲液溶解，然后依次加入 4μl乙酰化试剂，100μ13H-cAMP(1?500dpm/100μl)和100μl抗cAMP血清(1∶20?0 0 0)。0～4℃保存4～18h后，加入1ml磷酸缓冲液，立即滴加入抽滤器上的微孔薄膜上减压(3 00～500mmHg)抽滤，用同一缓冲液约5ml试管洗2次，洗液亦滴加在膜片上抽滤。取下膜片， 80℃ 30min烘干，将膜片浸入5ml闪烁液中，在LS9800(Beckman)液体闪烁计数仪上作放射性 测定，然后依标准曲线求得每样品cAMP含量，换算为每毫克蛋白中每分钟cAMP生成量(pmol/ mg蛋白/min)表示AC活性大小。
, 百拇医药
1.4 实验药品
Fenaldopam(SK&F82526)由美国SmithKIine beecham实验室Swedel PA教授惠赠。SCH23390由 美国Schering公司赠送。cAMP放射免疫分析药盒(上海第二医科大学同位素室提供)，其余试 剂均为分析纯。以上各种受试药物均在临用前配制。
1.5 统计处理
本实验采用两样本均数t检验。实验统计结果以均数±标准差(
±s)表示。
2 结果
预实验发现，平衡90min后加入10-4MFenaldopam，在2min时对cAMP生成量有最大刺激 效应，因此在随后实验中均选择2min孵育时间。
, http://www.100md.com
2.1 Fenaldopam对肺动脉cAMP生成量的影响
当往Kreb's液中加入不同浓度的Fenaldopam(10-8～10-4)后，可呈浓度依赖性 激活肺动脉AC活性，增加cAMP生成量的效应，其中浓度为10-4M时，cAMP生成量为(3. 24±0.19)pmol/mg protein/min。与对照组(2.37±0.16)相比，肺动脉的cAMP生成量增加 了3 7%(见图1)。
2.2 DA受体阻断剂对Fenaldopam引起的cAMP生成效应的影响
从图2可以看到，特异性DA1受体阻断剂SCH23390(10μM)可显著阻断Fenaldopam 刺激肺动脉AC活性的效应，使Fenaldopam对肺动脉cAMP
1 山西医科大学生理教研室(太原 030001)
, http://www.100md.com
2 中原油田总医院的效应降低。从(3.24±0.19)pmol/mg protein/min降为(2.45±0.18)pmol/mg protein/min。
图1 Fendldopam对鼠动脉cAMP生成量的影响
与基值相比P<0.05
与基值相比P<0.01
(n=6,±s)
图2 Fenaldopam(10μm)及SCH23390(10μM)对鼠肺动脉cAMP生成量的 影响
, http://www.100md.com
F：与基础值相比P<0.01
SCH：与Fenaldopam组相比P<0.05
(n=6,±s)
3 讨论
肺血管DA1受体机能作用，已在整体鼠身上主要应用生理学方法做了研究。本次实验应用A C 活性大小作为DA受体功能的一个指标，为肺血管DA受体的生化及药理学特征提供了直接的离 体证据。cAMP作为第二信使，引起血管扩张已有报道[2]。因此研究DA1受体激 动剂对肺动脉AC活性刺激作用，有助于进一步评价肺血管DA1受体的生理作用及机能意义 。
本实验证实了DA1受体激动剂Fenaldopam可剂量依赖性增加肺动脉cAMP的生成量，其效应 可被选择性DA1受体阻断剂SCH23390所阻断，说明肺动脉上分布有DA1受体，这一结果 进一步支持Ricci应用离体血管环方法推测肺动脉分布有DA1受体的报道。本结果提示DA 1受体激动剂Fenaldopam具有明显引起肺血管扩张效应[3]。由此推测Fenaldop am对肺血管的舒张效应与cAMP有密切关系。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Ricci A,Collier WL,Amenta F.Endothelial dopamine DA-1 receptors sites in the rabbit pulmonary artery:autoradiographic demonstration.J Pharmacol Exp Th er,1990;261:830
2，Amenta F,Cavallottic C,De Rossi M,et al.Dopaminesensitive cAMP generat ing system in rat estracerebral arteries.Europ J Pharmacol,1984;93:105
3，Zhu Lin,Zhao RR,Wang WZ.comparative studies on the characteristics of dopamine receptors in different vascular systems.Chinese Journal of Physiologica l Sciences,1995;11(1):81
(2000-01-08收稿), 百拇医药
单位：
关键词：受体激动剂；肺动脉
中国现代医学杂志001132 分类号 R543.2
近些年来发现多巴胺受体激动剂对外周循环有较强的生物效应 ，对某些 心血管疾病已显示出特殊的疗效。虽然离体与在体实验均已证明肺动脉上存在DA1受体 [1]。而关于肺动脉DA受体的生化研究尚很少，现有证据表明刺激外周DA1受体可 引起AC活性的升高，本实验拟在观察DA1受体激动剂非诺多泮(Fenaldopam)对肺动脉的AC 活性刺激效应，借以阐明肺动脉DA1受体的生理作用和机能意义。
1 材料和方法1.1 标本制备
, 百拇医药
Wistar鼠(180～120g)，雌雄不拘，戊巴比妥钠(60mg/kg)麻醉，取出肺动脉置于冰冷的充有 饱和气体(95%±5%CO2)的Kreb's液器皿中，仔细清除周围结缔组织，放入持续充有95%± 5%CO2的Kreb's液浴槽内(pH 7.4，37℃)，平均90min，溶液每30min换液1次，受试药物 浸泡2min，快速移出血管，滤纸吸干，存于液氮内。
1.2 组织样品处理
将组织从液氮内取出放入冰箱(-80℃)30min，取血管剪碎放入盛有1ml冰冷的6%三氯乙酸溶 液匀浆器内，用玻璃匀浆器在冰浴中制备匀浆，低温离心(25r/min>10min)，取上清液， 用乙醚提取上清液4次，将上清液放入待测试管60℃吹干。
1.3 cAMP含量放射免疫测定
依文献及药盒说明制备cAMP标准曲线，向样品内加入100μl醋酸缓冲液溶解，然后依次加入 4μl乙酰化试剂，100μ13H-cAMP(1?500dpm/100μl)和100μl抗cAMP血清(1∶20?0 0 0)。0～4℃保存4～18h后，加入1ml磷酸缓冲液，立即滴加入抽滤器上的微孔薄膜上减压(3 00～500mmHg)抽滤，用同一缓冲液约5ml试管洗2次，洗液亦滴加在膜片上抽滤。取下膜片， 80℃ 30min烘干，将膜片浸入5ml闪烁液中，在LS9800(Beckman)液体闪烁计数仪上作放射性 测定，然后依标准曲线求得每样品cAMP含量，换算为每毫克蛋白中每分钟cAMP生成量(pmol/ mg蛋白/min)表示AC活性大小。
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1.4 实验药品
Fenaldopam(SK&F82526)由美国SmithKIine beecham实验室Swedel PA教授惠赠。SCH23390由 美国Schering公司赠送。cAMP放射免疫分析药盒(上海第二医科大学同位素室提供)，其余试 剂均为分析纯。以上各种受试药物均在临用前配制。
1.5 统计处理
本实验采用两样本均数t检验。实验统计结果以均数±标准差(
±s)表示。2 结果
预实验发现，平衡90min后加入10-4MFenaldopam，在2min时对cAMP生成量有最大刺激 效应，因此在随后实验中均选择2min孵育时间。
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2.1 Fenaldopam对肺动脉cAMP生成量的影响
当往Kreb's液中加入不同浓度的Fenaldopam(10-8～10-4)后，可呈浓度依赖性 激活肺动脉AC活性，增加cAMP生成量的效应，其中浓度为10-4M时，cAMP生成量为(3. 24±0.19)pmol/mg protein/min。与对照组(2.37±0.16)相比，肺动脉的cAMP生成量增加 了3 7%(见图1)。
2.2 DA受体阻断剂对Fenaldopam引起的cAMP生成效应的影响
从图2可以看到，特异性DA1受体阻断剂SCH23390(10μM)可显著阻断Fenaldopam 刺激肺动脉AC活性的效应，使Fenaldopam对肺动脉cAMP
1 山西医科大学生理教研室(太原 030001)
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2 中原油田总医院的效应降低。从(3.24±0.19)pmol/mg protein/min降为(2.45±0.18)pmol/mg protein/min。
图1 Fendldopam对鼠动脉cAMP生成量的影响
与基值相比P<0.05
与基值相比P<0.01
(n=6,
±s)图2 Fenaldopam(10μm)及SCH23390(10μM)对鼠肺动脉cAMP生成量的 影响
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F：与基础值相比P<0.01
SCH：与Fenaldopam组相比P<0.05
(n=6,
±s)3 讨论
肺血管DA1受体机能作用，已在整体鼠身上主要应用生理学方法做了研究。本次实验应用A C 活性大小作为DA受体功能的一个指标，为肺血管DA受体的生化及药理学特征提供了直接的离 体证据。cAMP作为第二信使，引起血管扩张已有报道[2]。因此研究DA1受体激 动剂对肺动脉AC活性刺激作用，有助于进一步评价肺血管DA1受体的生理作用及机能意义 。
本实验证实了DA1受体激动剂Fenaldopam可剂量依赖性增加肺动脉cAMP的生成量，其效应 可被选择性DA1受体阻断剂SCH23390所阻断，说明肺动脉上分布有DA1受体，这一结果 进一步支持Ricci应用离体血管环方法推测肺动脉分布有DA1受体的报道。本结果提示DA 1受体激动剂Fenaldopam具有明显引起肺血管扩张效应[3]。由此推测Fenaldop am对肺血管的舒张效应与cAMP有密切关系。
, 百拇医药
参 考 文 献
1，Ricci A,Collier WL,Amenta F.Endothelial dopamine DA-1 receptors sites in the rabbit pulmonary artery:autoradiographic demonstration.J Pharmacol Exp Th er,1990;261:830
2，Amenta F,Cavallottic C,De Rossi M,et al.Dopaminesensitive cAMP generat ing system in rat estracerebral arteries.Europ J Pharmacol,1984;93:105
3，Zhu Lin,Zhao RR,Wang WZ.comparative studies on the characteristics of dopamine receptors in different vascular systems.Chinese Journal of Physiologica l Sciences,1995;11(1):81
(2000-01-08收稿), 百拇医药