川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
作者：汪远金 申国明 王钦茂
单位：安徽中医学院中西医结合系，合肥 230038
关键词：川芎嗪；脑缺血；脂质过氧化；中分子物质；一氧化氮；丙二醛
安徽中医学院学报000129 摘要：目的：探讨川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：采用大鼠双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型，测定血浆中一氧化氮(NO)及中分子物质(MMS)总量和脑组织中丙二醛(MDA)含量变化。结果：川芎嗪(33.3mg/kg，ip)显著增加缺血大鼠血浆中NO含量，降低MMS总量和组织中MDA的含量，以及降低血比粘度。结论：川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制与抗脂质过氧化、增加NO含量和降低MMS总量作用有关。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-2219(2000)01-0044-02
THE PROTECTIVE EFFECTS OF LIGUSTRAZINE
ON ACUTE CEREBRAL ISCHEMIA REPERFUSION INJURY IN RATS
Wang Yuanjing,Shen Guoming，Wang qinmao
(Department of Combination of Chinese and Western Medicin,Anhui College of TCM,Hefei 230038，China)
Abstract：Objective：the study is to observed the protective effects of ligustrazine on acute brain ischemia reperfusion injury in rats.Method：the content of plasma nitric oxide (NO) and middle molecule substance(MMS) and the content of brain tissue malondialdehyde(MDA) were detected using the models of incomplete brain ischemia reperfuing in rates by closing bilateral common carotid arteries.Result：ligustrazine could significantly increase nitric oxide content,reduced middle molecule sudstance and malondialdehyd content and viscosity of blood injury in rats.Conclusion:the protective effects of ligustrazine on cerebral ischemia injury may be related to its antilipid peroxidation and increased NO content and also decreased MMS level.
, 百拇医药
Key words：Ligustrazine;Brain ischemin；Lipid peroxidation;Middle molecule substance;Nitric oxide;Malondialdehyde
川芎嗪(ligustrazine)为中药川芎的有效成分之一，化学结构为四甲基吡嗪。目前已知，川芎嗪具有扩张血管、抑制血小板聚集、改善微循环等作用，临床上对急性缺血性脑血管疾病有一定疗效〔1〕。本文旨在探讨川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤时血浆中NO和MMS等含量变化，拟探讨其可能机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 wistar大鼠，雌雄兼用，体重250±20g，由安徽省医学研究所动物室提供。
1.2 药品与仪器 盐酸川芎嗪注射液，江苏省常州福民制药有限公司生产，2ml/支，批号950206。LBY-N6型旋转式血液粘度仪，上海医疗器械厂。756MC紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂。
, 百拇医药
1.3 方法 大鼠30只，随机分成3组。缺血模型组：按文献方法〔2〕略作改动，用20%乌拉坦(1g/kg,ip)麻醉，仰卧固定于手术台上，沿颈部正中切口，分离暴露两侧颈总动脉结扎，复制脑缺血模型。川芎嗪组：手术方法同模型组，结扎前30min，ip川芎嗪33.3mg/kg。假手术组：手术但不结扎血管。
大鼠脑缺血30min、血流再通10min后，腹主动脉取血和取出脑组织，分别测定血浆中NO、MMS和血比粘度及脑组织中MDA含量〔3～5〕。
1.4 数据处理 实验结果以
±s表示，显著性检验用t检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 川芎嗪对脑缺血大鼠NO、MMS和MDA的影响 由表1可见，脑缺血再灌注大鼠血浆中MMS含量和脑组织中MDA含量显著高于假手术组，P<0.01。血浆中NO含量下降不显著，P>0.05。川芎嗪组MMS和MDA含量与缺血模型组相比显著降低，P<0.01。NO含量与缺血模型组相比显著增加，P<0.05。
表1 对脑缺血大鼠NO、MMS和MDA的影响(±s) 组 别
n
NO
(mmol/L)
MMS
, 百拇医药
(u/L)
MDA
(mol/g)
假手术
10
2.78±0.41
1714±251
8.7±1.7
缺血模型
9
2.01±0.95
2683±532**
, 百拇医药
13.5±2.5**
川芎嗪
9
3.96±0.75△
1877±241△△
9.6±1.5△△
与假手术组相比，*P<0.01；**P<0.01；
与缺血模型组相比，△P<0.05，△△P<0.01(下同)
2.2 川芎嗪对脑缺血大鼠全血比粘度和血浆比粘度的影响 见表2。缺血模型组全血比粘度和血浆比粘度显著高于假手术组，P<0.05或P<0.01，川芎嗪组全血比粘度和血浆比粘度与缺血模型组相比显著降低，P<0.05或P<0.01。
, 百拇医药
表2 对脑缺血大鼠全血比粘度、血浆比粘度影响(±s) 组 别
n
全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
低切
高切
假手术
10
, 百拇医药 5.98±0.66
6.98±1.0
1.54±0.12
缺血模型
8
7.82±1.45*
9.03±1.4**
2.83±0.23**
川芎嗪
9
6.62±0.73△
, 百拇医药
7.08±1.2△△
1.67±0.13△
3 讨论
NO兼有细胞间第二信使功能和细胞毒性作用的气体物质〔6〕。近年来发现，NO具有内皮源舒张因子(EDRF)的特性，通过增加cGMP水平产生一系列生物效应〔7〕，如扩张血管，增加局部脑血流量，抑制血小板粘聚等。已有报道，脑缺血早期NO升高具有阻断N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体作用，从而对脑缺血损伤具有保护作用〔8〕。实验提示，川芎嗪使脑缺血再灌注大鼠早期NO含量升高，该作用可能是川芎嗪诱导脑缺血早期NO含量增加对脑组织损伤产生保护作用的机制之一。
中分子物质(MMS)是指存在体液内分子量在300～5000D之间的中等分子量物质。近年来，大量的临床和实验研究证明血浆中MMS参与多种疾病的发病机制〔9〕，MMS可改变红细胞和血小板表面电荷，增加血小板的聚集性，使血粘度升高。实验表明，MMS含量升高与全血粘度和血浆粘度相平行，呈同步变化趋势。川芎嗪显著降低脑缺血大鼠中MMS含量、全血比粘度和血浆比粘度，可能是由于川芎嗪降低MMS含量，引起血比粘度的下降，从而改善微循环，增加组织的血流量。
, http://www.100md.com
缺血后再灌注可引起自由基大量产生，破坏脑组织结构而加重组织损伤〔10〕，因此抗自由基的毒害作用成为防治缺血再灌注损伤的措施，自由基与生物分子(脂质)的氧化产物――丙二醛(MDA)代表着缺血后自由基对脑组织损伤的程度。结果提示，脑缺血大鼠再灌注10min，MDA含量明显高于假手术组，表明脑缺血再灌注期脑组织脂质过氧化增加，组织抗氧化能力降低。川芎嗪显著降低MDA含量，提示川芎嗪对脑组织损伤具有保护作用与降低自由基有关。
作者简介：汪远金(1952-)，男，副教授
参考文献：
〔1〕戈继业，张振岭.川芎药理作用研究及临床应用新进展〔J〕.中国中西医结合杂志，1994，14(10)：638.
〔2〕Pulsinelli WA,Brierley JB.A new model of bilateral hemisphenic ischemia in the unanesthelized rat〔J〕.Stroke,1979，10:267.
, 百拇医药
〔3〕Green LC,Wagner DA,Glogowski,et al.Analysis of nitrate,nitrite and 〔15N〕 Nitrate in biological fluids〔J〕.Ann Biochem,1982，120:131.
〔4〕汪远金，廖圣宝，张景湖，等.尿毒Ⅰ号对大鼠慢性肾衰MMS含量影响的实验研究〔J〕.现代应用药学，1995，12(3)：6.
〔5〕Ohkawa H,Ohishin,Y K.Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbitunic acid reaction〔J〕.Anal Biochem,1979，95:351.
〔6〕Frank M,Faraci RD,Johnny E,et al.Nitric oxide and cerebral circulation〔J〕.Stroke,1994，25:692.
, 百拇医药
〔7〕Schmide HW,Lohman SM,Walteru.The nitric oxide and cGMP signal transduction system:regulation and mechanism of action〔J〕.Biochem Biophys Acta,1993，1178:153.
〔8〕Manzoni O,Perzeau L,Marinp.Nitric oxide-induced blockade of NMDA receptors〔J〕.Neuron,1992，8:653.
〔9〕王铁丹.中分子物质的研究及其在医学中的意义〔J〕.广东生化通讯，1989，(6)：25.
〔10〕Imaizami S,Tominage T,Uenohera H.Intiatim and propagation of lipid peroxidation in cerebral infarction modles〔J〕.Neuro Res，1986，8:124.
1999-11-23收稿, 百拇医药
单位：安徽中医学院中西医结合系，合肥 230038
关键词：川芎嗪；脑缺血；脂质过氧化；中分子物质；一氧化氮；丙二醛
安徽中医学院学报000129 摘要：目的：探讨川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法：采用大鼠双侧颈总动脉闭塞的不完全性脑缺血再灌注模型，测定血浆中一氧化氮(NO)及中分子物质(MMS)总量和脑组织中丙二醛(MDA)含量变化。结果：川芎嗪(33.3mg/kg，ip)显著增加缺血大鼠血浆中NO含量，降低MMS总量和组织中MDA的含量，以及降低血比粘度。结论：川芎嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制与抗脂质过氧化、增加NO含量和降低MMS总量作用有关。
中图分类号：R285.5 文献标识码：A
, 百拇医药
文章编号：1000-2219(2000)01-0044-02
THE PROTECTIVE EFFECTS OF LIGUSTRAZINE
ON ACUTE CEREBRAL ISCHEMIA REPERFUSION INJURY IN RATS
Wang Yuanjing,Shen Guoming，Wang qinmao
(Department of Combination of Chinese and Western Medicin,Anhui College of TCM,Hefei 230038，China)
Abstract：Objective：the study is to observed the protective effects of ligustrazine on acute brain ischemia reperfusion injury in rats.Method：the content of plasma nitric oxide (NO) and middle molecule substance(MMS) and the content of brain tissue malondialdehyde(MDA) were detected using the models of incomplete brain ischemia reperfuing in rates by closing bilateral common carotid arteries.Result：ligustrazine could significantly increase nitric oxide content,reduced middle molecule sudstance and malondialdehyd content and viscosity of blood injury in rats.Conclusion:the protective effects of ligustrazine on cerebral ischemia injury may be related to its antilipid peroxidation and increased NO content and also decreased MMS level.
, 百拇医药
Key words：Ligustrazine;Brain ischemin；Lipid peroxidation;Middle molecule substance;Nitric oxide;Malondialdehyde
川芎嗪(ligustrazine)为中药川芎的有效成分之一，化学结构为四甲基吡嗪。目前已知，川芎嗪具有扩张血管、抑制血小板聚集、改善微循环等作用，临床上对急性缺血性脑血管疾病有一定疗效〔1〕。本文旨在探讨川芎嗪对大鼠缺血再灌注损伤时血浆中NO和MMS等含量变化，拟探讨其可能机制。
1 材料与方法
1.1 实验动物 wistar大鼠，雌雄兼用，体重250±20g，由安徽省医学研究所动物室提供。
1.2 药品与仪器 盐酸川芎嗪注射液，江苏省常州福民制药有限公司生产，2ml/支，批号950206。LBY-N6型旋转式血液粘度仪，上海医疗器械厂。756MC紫外分光光度计，上海第三分析仪器厂。
, 百拇医药
1.3 方法 大鼠30只，随机分成3组。缺血模型组：按文献方法〔2〕略作改动，用20%乌拉坦(1g/kg,ip)麻醉，仰卧固定于手术台上，沿颈部正中切口，分离暴露两侧颈总动脉结扎，复制脑缺血模型。川芎嗪组：手术方法同模型组，结扎前30min，ip川芎嗪33.3mg/kg。假手术组：手术但不结扎血管。
大鼠脑缺血30min、血流再通10min后，腹主动脉取血和取出脑组织，分别测定血浆中NO、MMS和血比粘度及脑组织中MDA含量〔3～5〕。
1.4 数据处理 实验结果以
±s表示，显著性检验用t检验。2 结果
, 百拇医药
2.1 川芎嗪对脑缺血大鼠NO、MMS和MDA的影响 由表1可见，脑缺血再灌注大鼠血浆中MMS含量和脑组织中MDA含量显著高于假手术组，P<0.01。血浆中NO含量下降不显著，P>0.05。川芎嗪组MMS和MDA含量与缺血模型组相比显著降低，P<0.01。NO含量与缺血模型组相比显著增加，P<0.05。
表1 对脑缺血大鼠NO、MMS和MDA的影响(
±s) 组 别n
NO
(mmol/L)
MMS
, 百拇医药
(u/L)
MDA
(mol/g)
假手术
10
2.78±0.41
1714±251
8.7±1.7
缺血模型
9
2.01±0.95
2683±532**
, 百拇医药
13.5±2.5**
川芎嗪
9
3.96±0.75△
1877±241△△
9.6±1.5△△
与假手术组相比，*P<0.01；**P<0.01；
与缺血模型组相比，△P<0.05，△△P<0.01(下同)
2.2 川芎嗪对脑缺血大鼠全血比粘度和血浆比粘度的影响 见表2。缺血模型组全血比粘度和血浆比粘度显著高于假手术组，P<0.05或P<0.01，川芎嗪组全血比粘度和血浆比粘度与缺血模型组相比显著降低，P<0.05或P<0.01。
, 百拇医药
表2 对脑缺血大鼠全血比粘度、血浆比粘度影响(
±s) 组 别n
全血比粘度(mPa.s)
血浆比粘度
(mPa.s)
低切
高切
假手术
10
, 百拇医药 5.98±0.66
6.98±1.0
1.54±0.12
缺血模型
8
7.82±1.45*
9.03±1.4**
2.83±0.23**
川芎嗪
9
6.62±0.73△
, 百拇医药
7.08±1.2△△
1.67±0.13△
3 讨论
NO兼有细胞间第二信使功能和细胞毒性作用的气体物质〔6〕。近年来发现，NO具有内皮源舒张因子(EDRF)的特性，通过增加cGMP水平产生一系列生物效应〔7〕，如扩张血管，增加局部脑血流量，抑制血小板粘聚等。已有报道，脑缺血早期NO升高具有阻断N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体作用，从而对脑缺血损伤具有保护作用〔8〕。实验提示，川芎嗪使脑缺血再灌注大鼠早期NO含量升高，该作用可能是川芎嗪诱导脑缺血早期NO含量增加对脑组织损伤产生保护作用的机制之一。
中分子物质(MMS)是指存在体液内分子量在300～5000D之间的中等分子量物质。近年来，大量的临床和实验研究证明血浆中MMS参与多种疾病的发病机制〔9〕，MMS可改变红细胞和血小板表面电荷，增加血小板的聚集性，使血粘度升高。实验表明，MMS含量升高与全血粘度和血浆粘度相平行，呈同步变化趋势。川芎嗪显著降低脑缺血大鼠中MMS含量、全血比粘度和血浆比粘度，可能是由于川芎嗪降低MMS含量，引起血比粘度的下降，从而改善微循环，增加组织的血流量。
, http://www.100md.com
缺血后再灌注可引起自由基大量产生，破坏脑组织结构而加重组织损伤〔10〕，因此抗自由基的毒害作用成为防治缺血再灌注损伤的措施，自由基与生物分子(脂质)的氧化产物――丙二醛(MDA)代表着缺血后自由基对脑组织损伤的程度。结果提示，脑缺血大鼠再灌注10min，MDA含量明显高于假手术组，表明脑缺血再灌注期脑组织脂质过氧化增加，组织抗氧化能力降低。川芎嗪显著降低MDA含量，提示川芎嗪对脑组织损伤具有保护作用与降低自由基有关。
作者简介：汪远金(1952-)，男，副教授
参考文献：
〔1〕戈继业，张振岭.川芎药理作用研究及临床应用新进展〔J〕.中国中西医结合杂志，1994，14(10)：638.
〔2〕Pulsinelli WA,Brierley JB.A new model of bilateral hemisphenic ischemia in the unanesthelized rat〔J〕.Stroke,1979，10:267.
, 百拇医药
〔3〕Green LC,Wagner DA,Glogowski,et al.Analysis of nitrate,nitrite and 〔15N〕 Nitrate in biological fluids〔J〕.Ann Biochem,1982，120:131.
〔4〕汪远金，廖圣宝，张景湖，等.尿毒Ⅰ号对大鼠慢性肾衰MMS含量影响的实验研究〔J〕.现代应用药学，1995，12(3)：6.
〔5〕Ohkawa H,Ohishin,Y K.Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbitunic acid reaction〔J〕.Anal Biochem,1979，95:351.
〔6〕Frank M,Faraci RD,Johnny E,et al.Nitric oxide and cerebral circulation〔J〕.Stroke,1994，25:692.
, 百拇医药
〔7〕Schmide HW,Lohman SM,Walteru.The nitric oxide and cGMP signal transduction system:regulation and mechanism of action〔J〕.Biochem Biophys Acta,1993，1178:153.
〔8〕Manzoni O,Perzeau L,Marinp.Nitric oxide-induced blockade of NMDA receptors〔J〕.Neuron,1992，8:653.
〔9〕王铁丹.中分子物质的研究及其在医学中的意义〔J〕.广东生化通讯，1989，(6)：25.
〔10〕Imaizami S,Tominage T,Uenohera H.Intiatim and propagation of lipid peroxidation in cerebral infarction modles〔J〕.Neuro Res，1986，8:124.
1999-11-23收稿, 百拇医药