ELISA法检测乙肝表面抗原影响因素的探讨
作者：王叶芳 密辉 王霞
单位：山东省蒙阴县人民医院 276200
关键词：酶联免疫吸附法；乙肝表面抗原
淮海医药000441
【中国图书分类号】 R 446.11
目前各实验室多采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)，但在实际工作中该法存在较多影响因素，本文就其主要影响因素以及克服办法，综合介绍如下。
1 加样 加样时要使用一次性吸头。因为ELISA法灵敏度很高，很微量的血清就能使结果出现阳性。
2 一步法致高滴度HBsAg漏检 近年来，不少试剂厂家为克服酶标技术操作程序复杂、用时长的缺点，纷纷推出快速简便的一步法。由于它是将待检血清加入已包有抗-HBs反应板后立即加入酶标抗体，当血清中含有高滴度HBsAg时，除部分HBsAg与包被抗体结合而被吸附，大量剩余抗原被洗掉，只有很少量的酶标抗体参与形成包被抗体—抗原—酶标抗体的复合物，造成假阴性而被漏检。这种现象已被很多实验室证实，此种假阴性也导致出现了乙型肝炎五项指标HBsAg阴性而HBeAg阳性，或者HBcAb阳性的模式，对HBV标志意义的分析产生错误。鉴于此种情况，专家们建议仍使用经典的分步法。若采用一步法，为防止高滴度HBsAg假阴性的发生，可采取以下两种方法：①当发现HBeAg或抗HBe阳性而HBsAg阴性时，应把血清作1∶10～1∶100稀释后重新检测。②改进ELISA一步法。加完血清以后即快速转动固相板30 s，室温放置5 min，反扣弃掉固相板里的血清，其余操作步骤同原法。目的在于弃去过剩抗原，避免酶标抗体丢失，此是防止ELISA一步法检测HBsAg假阴性的简易实用方法。
3 溶血对HBsAg检测的影响 溶血血清具有过氧化物酶活性，同辣根过氧化物酶作用相似，且能与预包被抗体结合。而一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺产生假阳性。所以标本不能溶血。
4 HBsAg-抗HBs免疫复合物对检测HBsAg的影响 当被检血清中同时含有HBsAg和抗-HBs且以免疫复合物形式存在时，ELISA检测HBsAg为阴性。为此，需先解离HBsAg-抗HBs免疫复合物，再用常规ELISA检测HBsAg。为此设计了一种方法：待检血清100 μl,加0.5 mmol.L-1 HC150 μl混匀，37℃1小时再加0.5 mmol.L-1 NaOH 50 μl,5%TritonX-100 22 μl,混匀后再用ELISA法检测HBsAg。采用此法检测42份抗HBs阳性标本，酶处理前测出HBsAg阳性率为11.8%，处理后增至41.2%。
5 反应板边缘效应对结果的影响 目前，实验室常采用聚苯乙烯凹孔板作为ELISA固相载体，但由于边缘效应的影响，同一标本在边缘孔测定的结果明显高于中央孔，且随边缘孔与中央孔的距离的增加而增强。原因在于试验过程中边缘孔与中央孔的温度、液体蒸发程度不同以及各孔表面存在光洁度等物理性状的差异有关。为克服其影响，应尽可能使用中央孔及其周围反应孔。
6 洗涤 用PBST洗涤液洗涤时，应洗5次以上，每次洗涤时间1～2 min，每次均需扣干，否则会出现假阳性。, 百拇医药
单位：山东省蒙阴县人民医院 276200
关键词：酶联免疫吸附法；乙肝表面抗原
淮海医药000441
【中国图书分类号】 R 446.11
目前各实验室多采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测乙肝表面抗原(HBsAg)，但在实际工作中该法存在较多影响因素，本文就其主要影响因素以及克服办法，综合介绍如下。
1 加样 加样时要使用一次性吸头。因为ELISA法灵敏度很高，很微量的血清就能使结果出现阳性。
2 一步法致高滴度HBsAg漏检 近年来，不少试剂厂家为克服酶标技术操作程序复杂、用时长的缺点，纷纷推出快速简便的一步法。由于它是将待检血清加入已包有抗-HBs反应板后立即加入酶标抗体，当血清中含有高滴度HBsAg时，除部分HBsAg与包被抗体结合而被吸附，大量剩余抗原被洗掉，只有很少量的酶标抗体参与形成包被抗体—抗原—酶标抗体的复合物，造成假阴性而被漏检。这种现象已被很多实验室证实，此种假阴性也导致出现了乙型肝炎五项指标HBsAg阴性而HBeAg阳性，或者HBcAb阳性的模式，对HBV标志意义的分析产生错误。鉴于此种情况，专家们建议仍使用经典的分步法。若采用一步法，为防止高滴度HBsAg假阴性的发生，可采取以下两种方法：①当发现HBeAg或抗HBe阳性而HBsAg阴性时，应把血清作1∶10～1∶100稀释后重新检测。②改进ELISA一步法。加完血清以后即快速转动固相板30 s，室温放置5 min，反扣弃掉固相板里的血清，其余操作步骤同原法。目的在于弃去过剩抗原，避免酶标抗体丢失，此是防止ELISA一步法检测HBsAg假阴性的简易实用方法。
3 溶血对HBsAg检测的影响 溶血血清具有过氧化物酶活性，同辣根过氧化物酶作用相似，且能与预包被抗体结合。而一步法洗涤步骤往往难以完全洗脱，残留的过氧化物酶催化底物四甲基联苯胺产生假阳性。所以标本不能溶血。
4 HBsAg-抗HBs免疫复合物对检测HBsAg的影响 当被检血清中同时含有HBsAg和抗-HBs且以免疫复合物形式存在时，ELISA检测HBsAg为阴性。为此，需先解离HBsAg-抗HBs免疫复合物，再用常规ELISA检测HBsAg。为此设计了一种方法：待检血清100 μl,加0.5 mmol.L-1 HC150 μl混匀，37℃1小时再加0.5 mmol.L-1 NaOH 50 μl,5%TritonX-100 22 μl,混匀后再用ELISA法检测HBsAg。采用此法检测42份抗HBs阳性标本，酶处理前测出HBsAg阳性率为11.8%，处理后增至41.2%。
5 反应板边缘效应对结果的影响 目前，实验室常采用聚苯乙烯凹孔板作为ELISA固相载体，但由于边缘效应的影响，同一标本在边缘孔测定的结果明显高于中央孔，且随边缘孔与中央孔的距离的增加而增强。原因在于试验过程中边缘孔与中央孔的温度、液体蒸发程度不同以及各孔表面存在光洁度等物理性状的差异有关。为克服其影响，应尽可能使用中央孔及其周围反应孔。
6 洗涤 用PBST洗涤液洗涤时，应洗5次以上，每次洗涤时间1～2 min，每次均需扣干，否则会出现假阳性。, 百拇医药