鼻炎散质量标准的实验研究
作者：明延波 刘志梅 魏淑萍
单位：明延波 刘志梅(辽宁卫生职工医学院药学系，沈阳 110005)；魏淑萍(沈阳市药品检验所，沈阳 110001)
关键词：鼻炎散；定性鉴别；芍药苷；含量测定
沈阳药科大学学报00zk17 摘 要 采用薄层色谱法对鼻炎散中辛夷、白芷、黄芩进行定性鉴别.应用高效液相色谱法对该制剂中所含芍药的有效成分芍药苷的含量测定方法进行了考察.
分类号 R917
An Experimental Study on the Quality Standard of Biyansan
Ming Yanbo， Liu Zhimei, Wei Shuping
, 百拇医药
(The Pharmaceutical Faculty of the Medical College for Liaoning Health Staff,Shenyang 110005)
Abstract The qualitative identification of Flos Magnoliae, Radix Scutellariae and Radix Angelicae Dahuricae was carried out in Biyansan by TLC. The content of paconiflorin was determined by HPLC.
Key words Biyansan；qualitative identification；paeoniflorin；content determination
鼻炎散是由辛夷、黄芩、白芷、芍药等11味中药组成的复方制剂，具有宣肺理气，疏风清热，上通鼻窍的功能.为了控制其制剂的内在质量，采用薄层色谱法对其中辛夷、黄芩、白芷进行定性鉴别，并应用高效液相色谱法对制剂中芍药所含有效成分芍药苷的含量测定方法进行了考察.结果表明：实验所用定性定量方法，可较严格地控制该制剂的内在质量.
, 百拇医药
Fig.2 Radix scutellariaee TLC
1—biyansan
2—scutellariae
3—control
1 仪器与试药
美国Water S 510泵，490型紫外检测器，745型积分仪.黄芩苷、芍药苷作对照品.辛夷、白芷对照药材由中国药品生物制品检定所提供.鼻炎散由沈阳市和平区医院提供.
2 定性鉴别
2.1 辛夷的鉴别
2.1.1 供试液的制备
, 百拇医药 取辛夷100 g，置于挥发油测定器中，按照《中华人民共和国药典》1995年版附录中挥发油的测定法回流提取2 h，得油状物，取油状物0.5 mL，加乙酸乙酯稀释至1 mL，作为供试液.
2.1.2 对照液的制备
取辛夷挥发油0.5 mL，加乙酸乙酯稀释至1 mL，作为对照液.
2.1.3 色谱分析及结果
吸取供试液和对照液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-甲醇(V∶V∶V=4∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛的盐酸溶液.供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显现出相同颜色斑点(见图1).
Fig.1 Flos magnoliae TLC
, http://www.100md.com
2.2 黄芩的薄层鉴别
2.2.1 供试液的制备
取黄芩10 g，加无水乙醇30 mL，水浴回流1 h，过滤，滤液浓缩至2 mL，作为供试液.
2.2.2 阳性对照液的制备
取黄芩苷加甲醇制成1 mg/mL的溶液.
2.2.3 阴性对照液的制备
取不含黄芩的鼻炎散，按供试液制备方法制成阴性对照液.
2.2.4 色谱分析及结果
吸取供试液10 μL，对照液5 μL，分别点于同一含0.4%氯化钠的硅胶薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(V∶V∶V∶V=5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇液.供试品色谱中在与黄芩苷色谱相应的位置上有一相同的蓝绿色斑点,阴性对照液无此斑点(见图2).
, 百拇医药
2.3 白芷的鉴别〔1〕
2.3.1 供试液的制备
取白芷10 g，用乙醚40 mL，浸渍24 h，过滤，滤液置于蒸发皿中自然挥发至5 mL，作为供试液.
2.3.2 阳性对照液的制备
取白芷对照药材粉末0.1 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液.
2.3.3 阴性对照液的制备
取无白芷的阴性对照样品10 g,按供试溶液制备方法，制成阴性对照液.
2.3.4 色谱分析及结果
分别吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(V∶V∶V=6.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干，置紫外灯(365 nm)下观察，供试品色谱中在与白芷药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点.阴性对照液无上述荧光斑点(见图3).
, 百拇医药
Fig.3 Radix angelicae dahuricae TLC
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：NOVA—PAK C18(3.9 mm×15 cm).流动相：甲醇-水(V∶V=40∶60)；流速：0.8 mL/min.柱温：37℃，检测波长：230 nm，量程：0.2AUFS〔2〕.
3.2 对照品溶液的配制
精密称取芍药苷适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液作为对照品溶液.
3.3 线性关系考察
取对照品溶液1，2，3，4，5，6，8，10 mL，用甲醇分别稀释至10 mL，进样10 μL，测定，计算.回归方程为Y=4.318 9+3.452 5X，r=0.999 8
, 百拇医药
表明芍药苷在0.1～1.0 μg范围内呈线性关系.
3.4 供试品溶液的制备
精密称取样品粉末20 g，置于索氏提取器中，加200 mL甲醇中加热回流提取4 h.提取液水浴蒸干，残渣以甲醇定容至50 mL.以0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液.
3.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定，芍药苷峰面积积分值的相对标准偏差为1.54%.
3.6 稳定性试验
取供试品溶液在12，24，48，72 h分别进样10 μL，结果芍药苷的峰面积的RSD为1.41%，表明供试品溶液在3 d内稳定.
, 百拇医药
3.7 空白对照试验
取不含芍药的供试品粉末，按上述供试品溶液制备法制备，作为空白对照液.分别吸取芍药苷对照品溶液，供试品溶液和空白对照液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定.结果表明：在芍药苷出峰位置处无干扰峰(见图4).
Fig.4 Chromatograms of biyansan
1—standard；2—sample；3—blank
3.8 回收率试验
采取加样回收法，精密称取已知含量的样品，精密添加不同量的芍药苷对照品，按上法处理，测定并计算.其结果见表1.结果表明：本法回收率能达到要求，方法可行.
, http://www.100md.com
Tab.1 The recovery test No.
The content of paeoniflorin
in sample/μg
The adding weight
of paeoniflorin/μg
Measuremental
weight/μg
Recovery/%
1
0.263 2
, http://www.100md.com 0.234
0.500 0
101.2
2
0.262 6
0.234
0.512 4
106.7
3
0.265 0
0.468
0.734 6
100.3
, 百拇医药
4
0.265 0
0.468
0.724 4
98.2
3.9 样品测定 按上法测定3批样品中芍药苷的含量，测定结果见表2.
Tab.2 The measuremental results of the content of the sample No.
Paeoniflorin
/μg.g-1(n=3)
, http://www.100md.com
RSD%
951010
0.327
3.3
951121
0.319
3.0
951203
0.330
2.6
4 讨论
鼻炎散成分复杂，采用HPLC进行分离测定芍药苷含量，效果满意.本实验准确可靠，稳定性好.
参考文献
1，康廷国.中成药薄层色谱鉴别.北京：人民卫生出版社，1995.10
2，杨建国，吴云高，王健生.不同炮制法对白芍中芍药苷煎出量的影响.中药材,1992,15(2):26～27
收稿日期:2000-04-01, http://www.100md.com
单位：明延波 刘志梅(辽宁卫生职工医学院药学系，沈阳 110005)；魏淑萍(沈阳市药品检验所，沈阳 110001)
关键词：鼻炎散；定性鉴别；芍药苷；含量测定
沈阳药科大学学报00zk17 摘 要 采用薄层色谱法对鼻炎散中辛夷、白芷、黄芩进行定性鉴别.应用高效液相色谱法对该制剂中所含芍药的有效成分芍药苷的含量测定方法进行了考察.
分类号 R917
An Experimental Study on the Quality Standard of Biyansan
Ming Yanbo， Liu Zhimei, Wei Shuping
, 百拇医药
(The Pharmaceutical Faculty of the Medical College for Liaoning Health Staff,Shenyang 110005)
Abstract The qualitative identification of Flos Magnoliae, Radix Scutellariae and Radix Angelicae Dahuricae was carried out in Biyansan by TLC. The content of paconiflorin was determined by HPLC.
Key words Biyansan；qualitative identification；paeoniflorin；content determination
鼻炎散是由辛夷、黄芩、白芷、芍药等11味中药组成的复方制剂，具有宣肺理气，疏风清热，上通鼻窍的功能.为了控制其制剂的内在质量，采用薄层色谱法对其中辛夷、黄芩、白芷进行定性鉴别，并应用高效液相色谱法对制剂中芍药所含有效成分芍药苷的含量测定方法进行了考察.结果表明：实验所用定性定量方法，可较严格地控制该制剂的内在质量.
, 百拇医药
Fig.2 Radix scutellariaee TLC
1—biyansan
2—scutellariae
3—control
1 仪器与试药
美国Water S 510泵，490型紫外检测器，745型积分仪.黄芩苷、芍药苷作对照品.辛夷、白芷对照药材由中国药品生物制品检定所提供.鼻炎散由沈阳市和平区医院提供.
2 定性鉴别
2.1 辛夷的鉴别
2.1.1 供试液的制备
, 百拇医药 取辛夷100 g，置于挥发油测定器中，按照《中华人民共和国药典》1995年版附录中挥发油的测定法回流提取2 h，得油状物，取油状物0.5 mL，加乙酸乙酯稀释至1 mL，作为供试液.
2.1.2 对照液的制备
取辛夷挥发油0.5 mL，加乙酸乙酯稀释至1 mL，作为对照液.
2.1.3 色谱分析及结果
吸取供试液和对照液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-氯仿-甲醇(V∶V∶V=4∶12∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛的盐酸溶液.供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上显现出相同颜色斑点(见图1).
Fig.1 Flos magnoliae TLC
, http://www.100md.com
2.2 黄芩的薄层鉴别
2.2.1 供试液的制备
取黄芩10 g，加无水乙醇30 mL，水浴回流1 h，过滤，滤液浓缩至2 mL，作为供试液.
2.2.2 阳性对照液的制备
取黄芩苷加甲醇制成1 mg/mL的溶液.
2.2.3 阴性对照液的制备
取不含黄芩的鼻炎散，按供试液制备方法制成阴性对照液.
2.2.4 色谱分析及结果
吸取供试液10 μL，对照液5 μL，分别点于同一含0.4%氯化钠的硅胶薄层板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(V∶V∶V∶V=5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇液.供试品色谱中在与黄芩苷色谱相应的位置上有一相同的蓝绿色斑点,阴性对照液无此斑点(见图2).
, 百拇医药
2.3 白芷的鉴别〔1〕
2.3.1 供试液的制备
取白芷10 g，用乙醚40 mL，浸渍24 h，过滤，滤液置于蒸发皿中自然挥发至5 mL，作为供试液.
2.3.2 阳性对照液的制备
取白芷对照药材粉末0.1 g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液.
2.3.3 阴性对照液的制备
取无白芷的阴性对照样品10 g,按供试溶液制备方法，制成阴性对照液.
2.3.4 色谱分析及结果
分别吸取上述3种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(V∶V∶V=6.5∶1.5∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干，置紫外灯(365 nm)下观察，供试品色谱中在与白芷药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点.阴性对照液无上述荧光斑点(见图3).
, 百拇医药
Fig.3 Radix angelicae dahuricae TLC
3 含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：NOVA—PAK C18(3.9 mm×15 cm).流动相：甲醇-水(V∶V=40∶60)；流速：0.8 mL/min.柱温：37℃，检测波长：230 nm，量程：0.2AUFS〔2〕.
3.2 对照品溶液的配制
精密称取芍药苷适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液作为对照品溶液.
3.3 线性关系考察
取对照品溶液1，2，3，4，5，6，8，10 mL，用甲醇分别稀释至10 mL，进样10 μL，测定，计算.回归方程为Y=4.318 9+3.452 5X，r=0.999 8
, 百拇医药
表明芍药苷在0.1～1.0 μg范围内呈线性关系.
3.4 供试品溶液的制备
精密称取样品粉末20 g，置于索氏提取器中，加200 mL甲醇中加热回流提取4 h.提取液水浴蒸干，残渣以甲醇定容至50 mL.以0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液.
3.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测定，芍药苷峰面积积分值的相对标准偏差为1.54%.
3.6 稳定性试验
取供试品溶液在12，24，48，72 h分别进样10 μL，结果芍药苷的峰面积的RSD为1.41%，表明供试品溶液在3 d内稳定.
, 百拇医药
3.7 空白对照试验
取不含芍药的供试品粉末，按上述供试品溶液制备法制备，作为空白对照液.分别吸取芍药苷对照品溶液，供试品溶液和空白对照液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定.结果表明：在芍药苷出峰位置处无干扰峰(见图4).
Fig.4 Chromatograms of biyansan
1—standard；2—sample；3—blank
3.8 回收率试验
采取加样回收法，精密称取已知含量的样品，精密添加不同量的芍药苷对照品，按上法处理，测定并计算.其结果见表1.结果表明：本法回收率能达到要求，方法可行.
, http://www.100md.com
Tab.1 The recovery test No.
The content of paeoniflorin
in sample/μg
The adding weight
of paeoniflorin/μg
Measuremental
weight/μg
Recovery/%
1
0.263 2
, http://www.100md.com 0.234
0.500 0
101.2
2
0.262 6
0.234
0.512 4
106.7
3
0.265 0
0.468
0.734 6
100.3
, 百拇医药
4
0.265 0
0.468
0.724 4
98.2
3.9 样品测定 按上法测定3批样品中芍药苷的含量，测定结果见表2.
Tab.2 The measuremental results of the content of the sample No.
Paeoniflorin
/μg.g-1(n=3)
, http://www.100md.com
RSD%
951010
0.327
3.3
951121
0.319
3.0
951203
0.330
2.6
4 讨论
鼻炎散成分复杂，采用HPLC进行分离测定芍药苷含量，效果满意.本实验准确可靠，稳定性好.
参考文献
1，康廷国.中成药薄层色谱鉴别.北京：人民卫生出版社，1995.10
2，杨建国，吴云高，王健生.不同炮制法对白芍中芍药苷煎出量的影响.中药材,1992,15(2):26～27
收稿日期:2000-04-01, http://www.100md.com