气相色谱法分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量
作者：王俊秋 庞青云 余立
单位：王俊秋 庞青云 余立(北京市药品检验所 北京 100035)
关键词：气相色谱法；乙醇；丙二醇；环孢素A
药物分析杂志000207 摘要 目的：建立一个气相色谱条件同时分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量。方法：以GDX-101为固定相，柱长为2 m，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，氮气为载气，以二甲基亚砜为溶剂，以正丙醇为内标。结果：乙醇及丙二醇进样量分别在2.0～6.0 μg，1.0～3.0 μg，其峰面积与浓度呈良好的线性关系，加样回收率分别为99.9%(RSD<0.8%，n=5)，101.4%(RSD<1.1%，n=5)，精密度良好。结论：此气相色谱条件可同时测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量，方法简便准确。
Determination of Ethanol and Propylene Glycol in Cyclosprin A
, 百拇医药
by Gas Chromatography
Wang Junqiu,Pang Qingyun and Yu Li
(Beijing Institute for Drug Control, Beijing 100035)
Abstract, http://www.100md.com
Key words GC, ethanol, propylene glycol, cyclosprin A
山地明(环孢素A)为诺华制药有限公司的产品，是一种免疫抑制剂，用于器官移植和骨髓移植中的抑制排斥现象以及自身免疫疾病。厂方质量标准中乙醇及丙二醇的含量采用石英毛细管柱测定，此种色谱柱在国内使用不普及，我们经多次试验，摸索出一较好的气相色谱条件，适用于国内检测，即以GDX-101为固定相，柱长为2 m，采用氢离子火焰检测器，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，氮气为载气，以二甲基亚砜为溶剂，以正丙醇为内标，可同时分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量，改进后的方法，乙醇与正丙醇的分离度为3.1，丙二醇与正丙醇的分离度为5.0，符合中国药典1995年版中乙醇量度检查的分离度要求[1]，操作简便，结果准确可靠。
1 仪器与试药
气相色谱仪：GC-15A，日本岛津公司生产。
, http://www.100md.com
气相色谱柱：玻璃柱，长2 m，固定相为GDX-101。
乙醇、异丙醇、丙二醇均为气相色谱纯，二甲基亚砜为色谱纯。
样品：环孢素A胶囊(山地明)，由诺华公司提供，批号为187MFD0797；241MFD0797；166MFD0797；483MFD0797；477MFD0797。
标准贮备液及内标贮备液：精密称取气相级的乙醇及丙二醇2.50及1.25 g分置50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为标准贮备液；精密量取正丙醇5.0 mL置50 mL量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为内标贮备液。
2 试验方法与结果
2.1 色谱条件 采用GDX-101为固定相，柱长为2 m，氮气为载气，采用氢离子火焰检测器，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，即初始为165 ℃，保持12 min，以40 ℃。min-1升至280 ℃，并保持20 min，检测器温度为280 ℃，进样量为2 μL。
, 百拇医药
2.2 分离度试验 称取乙醇、丙二醇及正丙醇各50 mg置同一50 mL量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，进样2 μL，按上述色谱条件试验，记录色谱图，见图1-A，乙醇、丙二醇及正丙醇的保留时间分别为1.15，2.22，7.54 min，计算乙醇与正丙醇及丙二醇与正丙醇的分离度，其分离度分别为3.1和5.0。
图1 分离度色谱(A)及样品测定(B)色谱图
1.乙醇 2.正丙醇 3.丙二醇 4.二甲基亚砜
2.3 线性范围及标准曲线 分别精密量取乙醇和丙二醇标准贮备液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分别置50 mL量瓶中，并分别加入内标贮备液1.0 mL，使乙醇终浓度为1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg.mL-1，丙二醇的终浓度为0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 mg.mL-1，分别进样2 μL，以乙醇及丙二醇的进样量为横坐标，以它们的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，分别进行线性回归，结果线性关系良好，乙醇、丙二醇回归方程分别为：
, http://www.100md.com
A=8.935×103C+7.858×102 r=0.998 8
A=8.086×103C-1.649×102 r=0.999 9
2.4 精密度试验 用乙醇与丙二醇浓度分别2.0及1.0 mg.mL-1的溶液，重复进样5次，结果乙醇与丙二醇的RSD分别为0.7%和1.0%，精密度良好。
2.5 回收率试验 采用加样回收法，取已知乙醇与丙二醇含量的样品2粒，用二甲基亚砜溶解，置50 mL量瓶中，精密加入内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，精密量取此溶液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL，分别加入乙醇与丙二醇的浓度分别为2.0 mg.mL-1及1.0 mg.mL-1的标准溶液6.0，5.5，5.0，4.5，4.0 mL，混匀，量取混匀后的溶液2 μL，注入气相色谱仪，测定这5份溶液的乙醇和丙二醇含量，计算回收率，乙醇的平均回收率为99.9%(RSD<0.8%，n=5)，丙二醇的平均回收率为101.4%(RSD<1.1%，n=5)。
, 百拇医药
2.6 样品的测定 取乙醇和丙二醇标准贮备液2.0 mL，内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取环孢素A胶囊2粒，置50 mL量瓶中，用二甲基亚砜溶解，精密加入内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别量取对照品溶液和样品溶液各2 μL，注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定，以内标法计算含量，即得；见图1-B。
2.7 对比试验结果 取环孢素A样品5批，用改进后的方法测定样品中乙醇和丙二醇的含量，与厂方测定数据相比，结果基本吻合，见表1。
表1 乙醇和丙二醇对比试验结果(%) 批号
本法结果
厂方测定数据
乙醇
丙二醇
, 百拇医药
乙醇
丙二醇
187MFD0797
101.0
106.3
100.5
105.0
241MFD0797
99.2
99.2
100.6
100.6
166MFD0797
, http://www.100md.com
101.7
102.7
101.3
103.0
483MFD0797
98.8
96.8
99.3
97.2
477MFD0797
99.1
98.1
98.9
, http://www.100md.com
97.7
3 讨论
3.1 本法与原厂方方法相比，方法更为简便，条件普及，有利于对样品质量的控制。
3.2 原厂方标准在测定乙醇含量时，以正丁醇为溶剂，由于正丁醇的保留时间与丙二醇过于接近，分离度达不到要求，本法采用二甲基亚砜为溶剂，不影响样品的溶解，同时使丙二醇与二甲基亚砜的分离度符合定量分析的要求。
3.3 曾用固定相为GDX-401的气相柱进行检测，乙醇与正丙醇得到完全分离，但丙二醇与溶剂峰重叠，分离度达不到要求。
3.4 采用程序升温，可使溶剂出峰时间加快，缩短分析时间。
参考文献
1，中国药典.1995.二部：附录44
(本文于1998年12月16日收到), 百拇医药
单位：王俊秋 庞青云 余立(北京市药品检验所 北京 100035)
关键词：气相色谱法；乙醇；丙二醇；环孢素A
药物分析杂志000207 摘要 目的：建立一个气相色谱条件同时分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量。方法：以GDX-101为固定相，柱长为2 m，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，氮气为载气，以二甲基亚砜为溶剂，以正丙醇为内标。结果：乙醇及丙二醇进样量分别在2.0～6.0 μg，1.0～3.0 μg，其峰面积与浓度呈良好的线性关系，加样回收率分别为99.9%(RSD<0.8%，n=5)，101.4%(RSD<1.1%，n=5)，精密度良好。结论：此气相色谱条件可同时测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量，方法简便准确。
Determination of Ethanol and Propylene Glycol in Cyclosprin A
, 百拇医药
by Gas Chromatography
Wang Junqiu,Pang Qingyun and Yu Li
(Beijing Institute for Drug Control, Beijing 100035)
Abstract, http://www.100md.com
Key words GC, ethanol, propylene glycol, cyclosprin A
山地明(环孢素A)为诺华制药有限公司的产品，是一种免疫抑制剂，用于器官移植和骨髓移植中的抑制排斥现象以及自身免疫疾病。厂方质量标准中乙醇及丙二醇的含量采用石英毛细管柱测定，此种色谱柱在国内使用不普及，我们经多次试验，摸索出一较好的气相色谱条件，适用于国内检测，即以GDX-101为固定相，柱长为2 m，采用氢离子火焰检测器，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，氮气为载气，以二甲基亚砜为溶剂，以正丙醇为内标，可同时分离测定环孢素A中乙醇及丙二醇的含量，改进后的方法，乙醇与正丙醇的分离度为3.1，丙二醇与正丙醇的分离度为5.0，符合中国药典1995年版中乙醇量度检查的分离度要求[1]，操作简便，结果准确可靠。
1 仪器与试药
气相色谱仪：GC-15A，日本岛津公司生产。
, http://www.100md.com
气相色谱柱：玻璃柱，长2 m，固定相为GDX-101。
乙醇、异丙醇、丙二醇均为气相色谱纯，二甲基亚砜为色谱纯。
样品：环孢素A胶囊(山地明)，由诺华公司提供，批号为187MFD0797；241MFD0797；166MFD0797；483MFD0797；477MFD0797。
标准贮备液及内标贮备液：精密称取气相级的乙醇及丙二醇2.50及1.25 g分置50 mL容量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为标准贮备液；精密量取正丙醇5.0 mL置50 mL量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为内标贮备液。
2 试验方法与结果
2.1 色谱条件 采用GDX-101为固定相，柱长为2 m，氮气为载气，采用氢离子火焰检测器，进样口温度为210 ℃，检测器为280 ℃，柱温采用程序升温，即初始为165 ℃，保持12 min，以40 ℃。min-1升至280 ℃，并保持20 min，检测器温度为280 ℃，进样量为2 μL。
, 百拇医药
2.2 分离度试验 称取乙醇、丙二醇及正丙醇各50 mg置同一50 mL量瓶中，加二甲基亚砜至刻度，摇匀，进样2 μL，按上述色谱条件试验，记录色谱图，见图1-A，乙醇、丙二醇及正丙醇的保留时间分别为1.15，2.22，7.54 min，计算乙醇与正丙醇及丙二醇与正丙醇的分离度，其分离度分别为3.1和5.0。
图1 分离度色谱(A)及样品测定(B)色谱图
1.乙醇 2.正丙醇 3.丙二醇 4.二甲基亚砜
2.3 线性范围及标准曲线 分别精密量取乙醇和丙二醇标准贮备液1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mL，分别置50 mL量瓶中，并分别加入内标贮备液1.0 mL，使乙醇终浓度为1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 mg.mL-1，丙二醇的终浓度为0.5，0.75，1.0，1.25，1.5 mg.mL-1，分别进样2 μL，以乙醇及丙二醇的进样量为横坐标，以它们的峰面积与内标峰面积之比为纵坐标，分别进行线性回归，结果线性关系良好，乙醇、丙二醇回归方程分别为：
, http://www.100md.com
A=8.935×103C+7.858×102 r=0.998 8
A=8.086×103C-1.649×102 r=0.999 9
2.4 精密度试验 用乙醇与丙二醇浓度分别2.0及1.0 mg.mL-1的溶液，重复进样5次，结果乙醇与丙二醇的RSD分别为0.7%和1.0%，精密度良好。
2.5 回收率试验 采用加样回收法，取已知乙醇与丙二醇含量的样品2粒，用二甲基亚砜溶解，置50 mL量瓶中，精密加入内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，精密量取此溶液4.0，4.5，5.0，5.5，6.0 mL，分别加入乙醇与丙二醇的浓度分别为2.0 mg.mL-1及1.0 mg.mL-1的标准溶液6.0，5.5，5.0，4.5，4.0 mL，混匀，量取混匀后的溶液2 μL，注入气相色谱仪，测定这5份溶液的乙醇和丙二醇含量，计算回收率，乙醇的平均回收率为99.9%(RSD<0.8%，n=5)，丙二醇的平均回收率为101.4%(RSD<1.1%，n=5)。
, 百拇医药
2.6 样品的测定 取乙醇和丙二醇标准贮备液2.0 mL，内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为对照品溶液；取环孢素A胶囊2粒，置50 mL量瓶中，用二甲基亚砜溶解，精密加入内标贮备液1.0 mL，并加二甲基亚砜至刻度，摇匀，作为样品溶液；分别量取对照品溶液和样品溶液各2 μL，注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定，以内标法计算含量，即得；见图1-B。
2.7 对比试验结果 取环孢素A样品5批，用改进后的方法测定样品中乙醇和丙二醇的含量，与厂方测定数据相比，结果基本吻合，见表1。
表1 乙醇和丙二醇对比试验结果(%) 批号
本法结果
厂方测定数据
乙醇
丙二醇
, 百拇医药
乙醇
丙二醇
187MFD0797
101.0
106.3
100.5
105.0
241MFD0797
99.2
99.2
100.6
100.6
166MFD0797
, http://www.100md.com
101.7
102.7
101.3
103.0
483MFD0797
98.8
96.8
99.3
97.2
477MFD0797
99.1
98.1
98.9
, http://www.100md.com
97.7
3 讨论
3.1 本法与原厂方方法相比，方法更为简便，条件普及，有利于对样品质量的控制。
3.2 原厂方标准在测定乙醇含量时，以正丁醇为溶剂，由于正丁醇的保留时间与丙二醇过于接近，分离度达不到要求，本法采用二甲基亚砜为溶剂，不影响样品的溶解，同时使丙二醇与二甲基亚砜的分离度符合定量分析的要求。
3.3 曾用固定相为GDX-401的气相柱进行检测，乙醇与正丙醇得到完全分离，但丙二醇与溶剂峰重叠，分离度达不到要求。
3.4 采用程序升温，可使溶剂出峰时间加快，缩短分析时间。
参考文献
1，中国药典.1995.二部：附录44
(本文于1998年12月16日收到), 百拇医药