常染色体显性遗传的薄基底膜肾病与COL4A3／COL4A4基因连锁*
作者：张承英 朱世乐 章友康
单位：北京医科大学第一临床医院肾内科(北京，100034) 朱世乐 章友康现在武警总医院肾内科 张承英
关键词：薄基底膜肾病；连锁分析；遗传基因
肾脏病与透析肾移植杂志990403 摘 要 目的：运用2号染色体上与COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3及D2S401，对9个薄基底膜肾病家系进行基因连锁分析，并对薄基底膜肾病患者COL4A4基因上文献报道的一个点突变进行研究。方法：PCR扩增9例薄基底膜肾病患者及其家系成员2号染色体上的微卫星标志PAX3及D2S401，10%聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染分析结果，运用PPAP软件计算Lod score值；PCR扩增9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变，Alul酶切后分析结果。 结果：3个家系的薄基底膜肾病与2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的Lod score值为3.10，θ＝0.00，未在9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上发现文献报道的Alul酶切位点。 结论：常染色体显现遗传的薄基底膜肾病与位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，未在9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上发现文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变。
, 百拇医药
AUTOSOMAL DOMINANT THIN BASEMENT MEMBRANE NEPHROPATHY
WAS LINKED WITH COL4A3/COL4A4 GENE
Zhang Chengying，Zhu Shile，Zhang Youkang
Department of Nephrology，The First Teaching Hospital，Beijing Medical University，Beijing，100034
OBJECTIVE We performed genetic analysis on 9 pedigrees of Thin Basement Membrane Nephropathy by using microsatellite markers PAX3 and D2S401 closely linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2，and by studying one point mutation in COL4A4 gene of 9 TBMN by digesting PCR products with restriction enzyme.
, 百拇医药
METHODOLOGY Genomic DNA was extracted.Highly polymorphic microsatellite markers (PAX3 and D2S401)closely linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2 were amplified using PCR.Nine TBMN families were analyzed.One DNA fragment with possible point mutation was PCR amplified and was digested with restrictive enzyme Alul.
RESULTS Three of the 9 TBMN families were linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2(lod score＝3.1，θ＝0.00).No Alul locus was found in COL4A3/COL4A4 gene in 9 TBMN，and no G→A(Gly→Glu)point mutation was detected.
, 百拇医药
CONCLUSION Autosomal dominant TBMN was linked with COL4A3/COL4A4 gene on chromosome 2.
Key words thin basement membrane nephropathy linkage analysis genetic gene
薄基底膜肾病(Thin basement membrane nephropathy，TBMN)是以持续性镜下血尿为主要表现的一种遗传性肾病，肾活检超微结构检查肾小球基底膜(GBM)弥漫性变薄为该病唯一重要的病理学特征。研究表明，TBMN约占肾活检病例的3.7%，单纯性血尿肾活检病例的11.5%[1]，提示该病在临床上并不少见，而关于TBMN的发病机制研究甚少。1996年Lemmink[2]首次用基因连锁分析的方法证实TBMN与位于2q35-37的COL4A3/COL4A4基因连锁，并在COL4A4基因上发现一由G→A(Gly→Glu)的点突变，而Yamazaki[3]的研究表明TBMN并不与COL4A3基因连锁。国内尚无关于TBMN发病机制的报道。本研究试图通过基因连锁分析的方法对中国的TBMN进行研究，确定TBMN的相关基因，并对TBMN的发病机制进行初步探讨。
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 TBMN诊断标准 ①临床，实验室检查(包括可疑患者的电测听和眼科检查)和病理学改变排除继发性肾小球疾病，泌尿外科疾病和Alport综合征属原发性肾小球疾病者。②GBM变薄范围≥80%；③GBM的平均厚度≤280nm(对照组GBM厚度的均值减去3倍标准差为限[1]。
1.2 研究对象 9例TBMN先证者为经肾活检超微结构检查及电镜照片GBM厚度测定证实为TBMN患者，所有家系成员均经过两次以上的尿沉渣红细胞位相检查及血压、血肌酐测定，凡尿沉渣红细胞计数≥3个/HP，诊断为血尿，家系成员中的血尿患者均认为系TBMN患者，绝大多数家系成员血压、血肌酐值正常(附表)。
1.3 家系成员外周静脉血白细胞DNA提取 采用1988年Miller等[4]提出的盐析法。
, 百拇医药
1.4 基因连锁分析
1.4.1 PCR扩增2号染色体的微卫星标志PAX3、D2S401 PAX3引物序列[5]：5′-CCC AGA TGC CTT CTT A-3′，5′-CAG GGA GAT GGC AGT T-3′。PCR反应体系：25μl反应体系含基因组DNA 200ng，dNTP 200 μmol/L，引物各10pmol，MgCl2 0.75 mmol/L，Taq DNA聚合酶1单位。PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃ 1min，49℃ 1min，72℃ 1min，循环30次；72℃ 延伸10min。D2S401引物序列[6]：5′-CAG AAG TTG CAG AAC CAT-3′，5′-GGG AGA TTT GGA GAA ACA-3′。PCR反应条件：MgCl2 1.0 mmol/L，退火温度50℃，余同PAX3。
1.4.2 10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
, 百拇医药
附表 9例TBMN患者的家族史、临床表现、眼耳改变及肾脏病理改变 例号
性别
年龄
家族史
血尿
蛋白尿
肾功能
眼、耳检查
肾脏病理改变
光镜
免疫荧光
电镜
, 百拇医药 1
女
23
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+
GBM弥漫性变薄(203.5±33.4nm)
2
女
, 百拇医药
53
有
肉眼血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+、IgA±
GBM弥漫性变薄(228.9±48.5nm)
3
女
38
有
, http://www.100md.com
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgA±、FRA+
GBM弥漫性变薄(191.5±26.5nm)
4
女
36
有
镜下血尿
阴性
, http://www.100md.com
正常
无异常
肾小球轻微病变
阴性
GBM弥漫性变薄(265.6±56.4nm)
5
女
27
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
, 百拇医药
轻度系膜增生
IgM±、C3±
GBM弥漫性变薄(231.7±29.1nm)
6
女
15
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+～++
, http://www.100md.com
GBM弥漫性变薄(229.5±41.4nm)
7
女
19
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
肾小球轻微病变
阴性
GBM弥漫性变薄(212.4±70.1nm)
, http://www.100md.com 8
女
53
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
阴性
GBM弥漫性变薄(179.1±23.1nm)
9
女
, http://www.100md.com
30
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM±、IgA±
GBM弥漫性变薄(253.8±24.0nm)
1.4.3 银染并分析结果
1.4.4 运用哈尔滨医科大学数学教研室研制的PPAP软件计算Lod score值[7]
, http://www.100md.com
1.5 基因突变研究
1.5.1 PCR扩增2号染色体COL4A4基因上文献报道的一个点突变 引物序列[2]：5′-AAG GCC TCC CCG GAC TCC CA-3′，5′-ACC TGG AGG ACC AGG TAG C-3′。PCR反应条件：MgCl2 0.75 mmol/L，退火温度60℃。
1.5.2 Alul酶切PCR产物 15μl反应体系含10×buffer 1.5μl，BSA(10μg/μl)0.15μl，Alul(10 U/μl)0.25μl，ddH2O 9.1μl，PCR产物4μl，混匀后37℃水浴过夜，次日加入3μl loading buffer终止反应。
1.5.3 10%聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.5.4 银染并分析结果2 结果
, 百拇医药
2.1 基因连锁分析 3个家系的TBMN位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的Lod score为3.1，θ＝0.00(图1，图2)。家系1，先证者Ⅱ4。因镜下血尿经肾活检证实为TBMN，追踪其家系，发现其母亲Ⅰ2及四个姐妹Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3及Ⅱ6均有镜下血尿，尿沉渣红细胞位相检查为多型红细胞。找出此家系中与TBMN连锁的单体型为PAX3 PCR产物电泳的第二片段及D2S401 PCR产物电泳的第四片段。遗传了单体型(PAX3 2-D2S401 4)的Ⅰ2、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅱ4和Ⅱ6均为患者。先证者Ⅱ4之子未从母亲遗传到单体型(PAX3 2-D2S401 4)，故未患病。Ⅱ2从生物学意义上不是Ⅰ1之女，但由于从母亲遗传到单体型(PAX3 2-D2S401 4)，故也发病。家系2与TBMN连锁的单体型为(PAX3 1-D2S401 2)，家系3与TBMN连锁的单体型为(PAX3 3-D2S401 5)。
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图1 与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因连锁的3个TBMN家系
图2 家系1 D2S401 PCR产物电泳结果(硝酸银染色)
M＝PBR322/HaeⅢ
2.2 基因突变研究 9例TBMN患者均无Alul酶切位点，没有发现文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变(图3)。
图3 Alul酶切9例TBMN患者和2例正常人PCR产物后电泳结果
9例TBMN患者和2例正常对照均无Alul酶切位点。M＝PBR322/HaeⅢ，条带1～9为9例TBMN患者，条带10～11为2例正常对照
, 百拇医药
3 讨论
肾小球基底膜的主要结构成分是Ⅳ型胶原，Ⅳ型胶原是由三条α链形成的一种三螺旋网状结构，目前已知构成Ⅳ型胶原的α链有6种，分别为α 1～6，编码6种α链的基因以头对头的方式分别位于3条不同的染色体上，其中COL4A1和COL4A2位于13号染色体，COL4A3和COL4A4位于2号染色体，COL4A5和COL4A6位于X染色体。1996年Lemmink首次用基因连锁分析的方法对一常染色体显性遗传的荷兰TBMN家系进行了研究，结果表明TBMN与位于2q35-37的COL4A3/COL4A4基因连锁，并在COL4A4基因上发现一由G→A(Gly→Glu)的点突变。由于甘氨酸在Ⅳ型胶原胶原区Gly-X-Y重复序列结构中是分子量最小的足以进入三螺旋结构中心的氨基酸，胶原区每三个氨基酸就有一个甘氨酸重复序列结构的出现，对于维持三螺旋结构的稳定性是很重要的，如果甘氨酸被体积更大的氨基酸如谷氨酸代替，必将影响Ⅳ型胶原三螺旋结构的稳定性。这是关于TBMN发病机制的首例报道，至今尚未见类似报道[2]。
, http://www.100md.com
运用与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3和D2S401，本研究对9个TBMN家系进行了基因连锁分析，结果表明3个常染色体显性遗传家系的TBMN与位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的lod score为3.1，θ＝0.00，可确定连锁。本研究未在TBMN患者COL4A4基因上发现Lemmink报道的G→A(Gly→Glu)的点突变，分析可能有以下两方面的原因：① 研究的病例太少；② TBMN可能和Alport综合征(AS)相似，在多个位点存在着多种突变类型，故对于TBMN患者COL4A4基因上可能发生的突变，还应进行更深入的研究。
本课题为国家自然科学基金资助项目(课题号 3970353)
参考文献
1 章友康，周蓉，王素霞等.薄基底膜肾病27例研究.中华内科杂志，1997，36：736
, 百拇医药
2 Lemmink HH，Nillesen WN，Mochiznki T et al. Benign familial hematuria due to mutation of the mutation of the type Ⅳ collagen α4 gene. J Clin Invest，1996，98：1114
3 Yamazaki H， Nakagawa Y， Saito A et al. No linkage to the COL4A3 gene locus in Japanese thin basement membrane disease families.Nephrol，1995，1：315
4 Miller SA，Dykes DD， Polesky HF.A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res，1988，16：1215
, http://www.100md.com
5 Wilcox ER， Rcvolta MN，Ploplis B et al. The PAX3 gene is mapped to human chromosome 2 together with a highly informative CA dinucleotide repeat. Hum Mol Genet，1992，1：215
6 Spurer NK，Barthon H， Bashir B et al. Report of the third international workshop on human chromosome 2 mapping 1994.Cytogenet Cell Genet，1994，67：216
7 郭政，李霞，何颖主编.医学遗传学与遗传流行病学数据分析.黑龙江科学技术出版社，1996.1-10
(1999-07-26收稿，1999-10-13修回), 百拇医药
单位：北京医科大学第一临床医院肾内科(北京，100034) 朱世乐 章友康现在武警总医院肾内科 张承英
关键词：薄基底膜肾病；连锁分析；遗传基因
肾脏病与透析肾移植杂志990403 摘 要 目的：运用2号染色体上与COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3及D2S401，对9个薄基底膜肾病家系进行基因连锁分析，并对薄基底膜肾病患者COL4A4基因上文献报道的一个点突变进行研究。方法：PCR扩增9例薄基底膜肾病患者及其家系成员2号染色体上的微卫星标志PAX3及D2S401，10%聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染分析结果，运用PPAP软件计算Lod score值；PCR扩增9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变，Alul酶切后分析结果。 结果：3个家系的薄基底膜肾病与2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的Lod score值为3.10，θ＝0.00，未在9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上发现文献报道的Alul酶切位点。 结论：常染色体显现遗传的薄基底膜肾病与位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，未在9例薄基底膜肾病患者COL4A4基因上发现文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变。
, 百拇医药
AUTOSOMAL DOMINANT THIN BASEMENT MEMBRANE NEPHROPATHY
WAS LINKED WITH COL4A3/COL4A4 GENE
Zhang Chengying，Zhu Shile，Zhang Youkang
Department of Nephrology，The First Teaching Hospital，Beijing Medical University，Beijing，100034
OBJECTIVE We performed genetic analysis on 9 pedigrees of Thin Basement Membrane Nephropathy by using microsatellite markers PAX3 and D2S401 closely linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2，and by studying one point mutation in COL4A4 gene of 9 TBMN by digesting PCR products with restriction enzyme.
, 百拇医药
METHODOLOGY Genomic DNA was extracted.Highly polymorphic microsatellite markers (PAX3 and D2S401)closely linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2 were amplified using PCR.Nine TBMN families were analyzed.One DNA fragment with possible point mutation was PCR amplified and was digested with restrictive enzyme Alul.
RESULTS Three of the 9 TBMN families were linked with COL4A3/COL4A4 gene located on chromosome 2(lod score＝3.1，θ＝0.00).No Alul locus was found in COL4A3/COL4A4 gene in 9 TBMN，and no G→A(Gly→Glu)point mutation was detected.
, 百拇医药
CONCLUSION Autosomal dominant TBMN was linked with COL4A3/COL4A4 gene on chromosome 2.
Key words thin basement membrane nephropathy linkage analysis genetic gene
薄基底膜肾病(Thin basement membrane nephropathy，TBMN)是以持续性镜下血尿为主要表现的一种遗传性肾病，肾活检超微结构检查肾小球基底膜(GBM)弥漫性变薄为该病唯一重要的病理学特征。研究表明，TBMN约占肾活检病例的3.7%，单纯性血尿肾活检病例的11.5%[1]，提示该病在临床上并不少见，而关于TBMN的发病机制研究甚少。1996年Lemmink[2]首次用基因连锁分析的方法证实TBMN与位于2q35-37的COL4A3/COL4A4基因连锁，并在COL4A4基因上发现一由G→A(Gly→Glu)的点突变，而Yamazaki[3]的研究表明TBMN并不与COL4A3基因连锁。国内尚无关于TBMN发病机制的报道。本研究试图通过基因连锁分析的方法对中国的TBMN进行研究，确定TBMN的相关基因，并对TBMN的发病机制进行初步探讨。
, 百拇医药
1 对象和方法
1.1 TBMN诊断标准 ①临床，实验室检查(包括可疑患者的电测听和眼科检查)和病理学改变排除继发性肾小球疾病，泌尿外科疾病和Alport综合征属原发性肾小球疾病者。②GBM变薄范围≥80%；③GBM的平均厚度≤280nm(对照组GBM厚度的均值减去3倍标准差为限[1]。
1.2 研究对象 9例TBMN先证者为经肾活检超微结构检查及电镜照片GBM厚度测定证实为TBMN患者，所有家系成员均经过两次以上的尿沉渣红细胞位相检查及血压、血肌酐测定，凡尿沉渣红细胞计数≥3个/HP，诊断为血尿，家系成员中的血尿患者均认为系TBMN患者，绝大多数家系成员血压、血肌酐值正常(附表)。
1.3 家系成员外周静脉血白细胞DNA提取 采用1988年Miller等[4]提出的盐析法。
, 百拇医药
1.4 基因连锁分析
1.4.1 PCR扩增2号染色体的微卫星标志PAX3、D2S401 PAX3引物序列[5]：5′-CCC AGA TGC CTT CTT A-3′，5′-CAG GGA GAT GGC AGT T-3′。PCR反应体系：25μl反应体系含基因组DNA 200ng，dNTP 200 μmol/L，引物各10pmol，MgCl2 0.75 mmol/L，Taq DNA聚合酶1单位。PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃ 1min，49℃ 1min，72℃ 1min，循环30次；72℃ 延伸10min。D2S401引物序列[6]：5′-CAG AAG TTG CAG AAC CAT-3′，5′-GGG AGA TTT GGA GAA ACA-3′。PCR反应条件：MgCl2 1.0 mmol/L，退火温度50℃，余同PAX3。
1.4.2 10%聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
, 百拇医药
附表 9例TBMN患者的家族史、临床表现、眼耳改变及肾脏病理改变 例号
性别
年龄
家族史
血尿
蛋白尿
肾功能
眼、耳检查
肾脏病理改变
光镜
免疫荧光
电镜
, 百拇医药 1
女
23
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+
GBM弥漫性变薄(203.5±33.4nm)
2
女
, 百拇医药
53
有
肉眼血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+、IgA±
GBM弥漫性变薄(228.9±48.5nm)
3
女
38
有
, http://www.100md.com
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgA±、FRA+
GBM弥漫性变薄(191.5±26.5nm)
4
女
36
有
镜下血尿
阴性
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正常
无异常
肾小球轻微病变
阴性
GBM弥漫性变薄(265.6±56.4nm)
5
女
27
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
, 百拇医药
轻度系膜增生
IgM±、C3±
GBM弥漫性变薄(231.7±29.1nm)
6
女
15
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM+～++
, http://www.100md.com
GBM弥漫性变薄(229.5±41.4nm)
7
女
19
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
肾小球轻微病变
阴性
GBM弥漫性变薄(212.4±70.1nm)
, http://www.100md.com 8
女
53
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
阴性
GBM弥漫性变薄(179.1±23.1nm)
9
女
, http://www.100md.com
30
有
镜下血尿
阴性
正常
无异常
轻度系膜增生
IgM±、IgA±
GBM弥漫性变薄(253.8±24.0nm)
1.4.3 银染并分析结果
1.4.4 运用哈尔滨医科大学数学教研室研制的PPAP软件计算Lod score值[7]
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1.5 基因突变研究
1.5.1 PCR扩增2号染色体COL4A4基因上文献报道的一个点突变 引物序列[2]：5′-AAG GCC TCC CCG GAC TCC CA-3′，5′-ACC TGG AGG ACC AGG TAG C-3′。PCR反应条件：MgCl2 0.75 mmol/L，退火温度60℃。
1.5.2 Alul酶切PCR产物 15μl反应体系含10×buffer 1.5μl，BSA(10μg/μl)0.15μl，Alul(10 U/μl)0.25μl，ddH2O 9.1μl，PCR产物4μl，混匀后37℃水浴过夜，次日加入3μl loading buffer终止反应。
1.5.3 10%聚丙烯酰胺凝胶电泳
1.5.4 银染并分析结果2 结果
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2.1 基因连锁分析 3个家系的TBMN位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的Lod score为3.1，θ＝0.00(图1，图2)。家系1，先证者Ⅱ4。因镜下血尿经肾活检证实为TBMN，追踪其家系，发现其母亲Ⅰ2及四个姐妹Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3及Ⅱ6均有镜下血尿，尿沉渣红细胞位相检查为多型红细胞。找出此家系中与TBMN连锁的单体型为PAX3 PCR产物电泳的第二片段及D2S401 PCR产物电泳的第四片段。遗传了单体型(PAX3 2-D2S401 4)的Ⅰ2、Ⅱ1、Ⅱ2、Ⅱ3、Ⅱ4和Ⅱ6均为患者。先证者Ⅱ4之子未从母亲遗传到单体型(PAX3 2-D2S401 4)，故未患病。Ⅱ2从生物学意义上不是Ⅰ1之女，但由于从母亲遗传到单体型(PAX3 2-D2S401 4)，故也发病。家系2与TBMN连锁的单体型为(PAX3 1-D2S401 2)，家系3与TBMN连锁的单体型为(PAX3 3-D2S401 5)。
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图1 与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因连锁的3个TBMN家系
图2 家系1 D2S401 PCR产物电泳结果(硝酸银染色)
M＝PBR322/HaeⅢ
2.2 基因突变研究 9例TBMN患者均无Alul酶切位点，没有发现文献报道的G→A(Gly→Glu)的点突变(图3)。
图3 Alul酶切9例TBMN患者和2例正常人PCR产物后电泳结果
9例TBMN患者和2例正常对照均无Alul酶切位点。M＝PBR322/HaeⅢ，条带1～9为9例TBMN患者，条带10～11为2例正常对照
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3 讨论
肾小球基底膜的主要结构成分是Ⅳ型胶原，Ⅳ型胶原是由三条α链形成的一种三螺旋网状结构，目前已知构成Ⅳ型胶原的α链有6种，分别为α 1～6，编码6种α链的基因以头对头的方式分别位于3条不同的染色体上，其中COL4A1和COL4A2位于13号染色体，COL4A3和COL4A4位于2号染色体，COL4A5和COL4A6位于X染色体。1996年Lemmink首次用基因连锁分析的方法对一常染色体显性遗传的荷兰TBMN家系进行了研究，结果表明TBMN与位于2q35-37的COL4A3/COL4A4基因连锁，并在COL4A4基因上发现一由G→A(Gly→Glu)的点突变。由于甘氨酸在Ⅳ型胶原胶原区Gly-X-Y重复序列结构中是分子量最小的足以进入三螺旋结构中心的氨基酸，胶原区每三个氨基酸就有一个甘氨酸重复序列结构的出现，对于维持三螺旋结构的稳定性是很重要的，如果甘氨酸被体积更大的氨基酸如谷氨酸代替，必将影响Ⅳ型胶原三螺旋结构的稳定性。这是关于TBMN发病机制的首例报道，至今尚未见类似报道[2]。
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运用与2号染色体上COL4A3/COL4A4基因紧密连锁的微卫星标志PAX3和D2S401，本研究对9个TBMN家系进行了基因连锁分析，结果表明3个常染色体显性遗传家系的TBMN与位于2号染色体上的COL4A3/COL4A4基因连锁，座位间的lod score为3.1，θ＝0.00，可确定连锁。本研究未在TBMN患者COL4A4基因上发现Lemmink报道的G→A(Gly→Glu)的点突变，分析可能有以下两方面的原因：① 研究的病例太少；② TBMN可能和Alport综合征(AS)相似，在多个位点存在着多种突变类型，故对于TBMN患者COL4A4基因上可能发生的突变，还应进行更深入的研究。
本课题为国家自然科学基金资助项目(课题号 3970353)
参考文献
1 章友康，周蓉，王素霞等.薄基底膜肾病27例研究.中华内科杂志，1997，36：736
, 百拇医药
2 Lemmink HH，Nillesen WN，Mochiznki T et al. Benign familial hematuria due to mutation of the mutation of the type Ⅳ collagen α4 gene. J Clin Invest，1996，98：1114
3 Yamazaki H， Nakagawa Y， Saito A et al. No linkage to the COL4A3 gene locus in Japanese thin basement membrane disease families.Nephrol，1995，1：315
4 Miller SA，Dykes DD， Polesky HF.A simple salting out procedure for extracting DNA from human nucleated cells. Nucleic Acids Res，1988，16：1215
, http://www.100md.com
5 Wilcox ER， Rcvolta MN，Ploplis B et al. The PAX3 gene is mapped to human chromosome 2 together with a highly informative CA dinucleotide repeat. Hum Mol Genet，1992，1：215
6 Spurer NK，Barthon H， Bashir B et al. Report of the third international workshop on human chromosome 2 mapping 1994.Cytogenet Cell Genet，1994，67：216
7 郭政，李霞，何颖主编.医学遗传学与遗传流行病学数据分析.黑龙江科学技术出版社，1996.1-10
(1999-07-26收稿，1999-10-13修回), 百拇医药