凝血因子Ⅶ基因的多态性研究与缺血性脑卒中的关系
作者：马丽媛 赵勇 王兴宇 刘力生 刘一仙
单位：马丽媛(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；赵勇(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；王兴宇(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；刘力生(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；刘一仙(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)
关键词：凝血因子Ⅶ；基因；多态性；缺血性脑卒中
山西医药杂志000510 【 摘 要 】 目的 探讨中国人缺血性脑卒中与凝血因子Ⅶ(FⅦ)基因arg353 g1n 及del(-323)ins多态性的关系。方法 利用PCR技术和分子杂交技术对北京 地区294例缺血性脑卒中患者进行FⅦ基因arg353g1n及del(-323)ins多态性的检测和分析， 并与279例北京地区的非卒中对照进行比较。结果 缺血性脑卒中患者FⅦ基 因arg353g1n及del(-323)ins多态性的基因型频率和等位基因频率与对照组相比无明显差异 。结论 FⅦ基因arg353g1n及del(-323)ins多态性可能不是中国人群缺血 性脑卒中发病的遗传学危险因素。
, 百拇医药
Association of FⅦ gene polymorphisms with ischemic stroke
Ma Liyuan,Zhao Yong,Wang Xingyu,et al
(Fuwai Heart Hospital,CAMS & PUMC,Beiji ng,100037,China)
【 Abstract 】 Objective To investigate whether FⅦ arg353gln and del(-323)ins polymorphisms are associated with ischemic stroke.Meth ods FⅦ arg353gln and del(-323)ins polymorphisms were determined by po lymerase chain reaction (PCR) and molecular hybridization in 294 cases of ischem ic stroke and 279 controls selected from Beijing population.Two groups were matc hed in sex,age and blood pressure.Results The prevalence rates of genotype frequency and allele frequency of FⅦ arg353gln and del(-323)ins po lymorphisms are not significantly different between ischemic stroke cases and co ntrols (P>0.05).Conclusion FⅦ arg353gln and del( -323)ins polymorphisms are not associated with ischemic stroke.
, 百拇医药
【 Key words】 FⅦ; Gene; Polymorphism; Ischemic stroke
外源性凝血途径在血栓形成中起着非常重要的作用。凝血因子Ⅶ是外源性凝血途径中的重要 凝血因子之一，在凝血的起始步骤中起关键作用[1]。凝血因子Ⅶ血浆浓度的增加 或活性增强对导致高凝状态起决定性作用。文献[2，3]报道，FⅦ活性增加，心血管病死 亡率增加。我们应用PCR技术和分子杂交技术对北京地区294例缺血性脑卒中患者及279例非 卒中对照进行了FⅦ基因arg353gln及del(-323)ins多态性的检测和分析，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：缺血性脑卒中患者294例，随机的非缺血性脑卒中对照279例，两组人群按 照年龄(相差不过3岁)、性别以及血压进行匹配，所有受试者均来自北京地区。病例组和对 照组年龄、性别比例、血压水平、体重指数、血浆总胆固醇、甘油三酯、血糖、尿素氮、血 肌酐水平均差异无显著性，见表1。
, http://www.100md.com
表1 病例组和对照组的一般临床参数比较(
±s) 组别
年龄
岁
男
女
收缩压
mmHg
舒张压
mmHg
体重指数
kg/m 2
, 百拇医药
胆固醇
mmol/L
甘油三酯
mmol/L
血糖
mmol/L
尿素氮
mmol/L
血 肌酐
mmol/L
P值
病例组
62±9
, 百拇医药
182
112
141±18
86±11
24±3
5.1±1.1
1. 8±1.0
6.1±2.5
5.6±2.3
91±21
>0.05
对照组
62±9
, http://www.100md.com
176
103
142±20
86±12
25±4
4.6±1.1
1. 4±0.9
5.5±1.6
6.0±1.9
92±22
>0.05
1.2 方法：取外周静脉血5 mL，应用标准的酚-氯仿法提取基因组DNA。采用PCR技术分别 扩增凝血因子Ⅶ基因含arg353gln及del(-323)ins多态性位点的核苷酸序列，将扩增产物与 生物素标记的探针进行杂交，经显色后判读基因型结果。
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1.3 统计学处理：利用SPSS统计软件对计量资料采用t检验；计数资料采用χ2 分析。
2 结 果
2.1 本试验FⅦ基因arg353gln多态性在两组人群中的分布：见第386页表2。
表2 FⅦ基因arg353gln多态性在两组人群中的分 布 组别
例数
基因型频率
等位基因型频率
ArgArg
ArgGln
GlnGln
, http://www.100md.com
Arg
Gln
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
中风组
294
, http://www.100md.com
263
89.6
29
9.9
2
0.68
555
94.4
33
5.6
对照组
279
247
, 百拇医药
88.5
31
11.1
1
0.36
525
94.1
33
5.9
FⅦ基因arg353gln多态性的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布无统计学差异。
2.2 FⅦ基因del(-323)ins多态性在两组人群中的分布：见表3。
, http://www.100md.com
表3 FⅦ基因del(-323)ins多态性在两组人群中的分布 组别
例数
基因型频率
等位基因型频率
DelDel
DelIns
InsIns
Del
Ins
例数
%
例数
, 百拇医药
%
例数
%
例数
%
例数
%
中风组
294
263
89.5
29
9.9
2
, 百拇医药
0.68
555
94.4
33
5.6
对照组
279
245
87.8
31
11.8
1
0.36
, 百拇医药
523
93.7
35
6.3
FⅦ基因del(-323)ins多态性的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布无统计学差 异。
3 讨 论
凝血因子Ⅶ是肝脏合成的一种维生素K依赖性凝血因子，其基因位于第13号染色体长臂(13q3 4)。基因长度为12.8 kb。由8个内含子和9个外显子组成[4]。
因子Ⅶ是外源性凝血途径的第一个蛋白酶，它能被丝氨酸蛋白酶和凝血酶激活。FⅦa活性很 低，只有当它与组织因子(TF)结合后才能启动凝血途径。动脉粥样硬化瘢块破裂后FⅦa血浆 水平升高可导致凝血瀑布反应的放大[5]。
, http://www.100md.com
因子Ⅶ水平与血浆甘油三酯和胆固醇水平呈正相关[6]，且受年龄、性别、人种、 体重指数、血压和空腹胰岛素水平等因素的影响[7]，与吸烟、饮酒与否无明显关 系。因子Ⅶ基因的Arg353Gln多态性和Del(-323)Ins多态性也与因子Ⅶ凝血活性水平相关。 第一种多态性(Arg353Gln,R353Q)为FⅦ基因第八外显子DNA链一个碱基突变，使第353位氨基 酸密码第2位的鸟嘌呤(G)变为腺嘌呤(A)，其相应的编码氨基酸由精氨酸(Arg)变成谷氨酰胺 (Gln)，该碱基突变改变了限制性内切酶MspI的切割位点，变称MspI多态性。约20%的欧洲人 携带编码Q353蛋白的等位基因。迄今为止，所有研究人群中，高加索人、欧洲人、印度人、 非洲人和日本人中都发现携带Gln353基因的个体FⅦ水平低于Arg353纯合子个体，最近研究 还发现Gln353基因伴有相当低水平的活化的FⅦ分子。第二种多态性是因子Ⅶ基因5′端启动 子内插入十个核苷酸序列CCTATATCCT，插入位置在基因翻译起始部位上游323 bp处，称之为 10 bp/0 bp多态性。启动子部位-323插入多态性可直接降低转录活性，因此伴有明显低FⅦ 水平，此插入多态性与MspI酶切位点呈限制性片段长度多态性连锁不平衡。两种多态性中哪 一种具有功能性还不清楚。Qzawa等[8]指出因子Ⅶ基因Gln353 多态性和核苷酸-3 23处10碱基对启动子插入与血浆FⅦ水平中度减少有关。
, 百拇医药
因子Ⅶ基因多态性对FⅦ影响的精确分子机制仍不清楚。这两种多态性可能与因子Ⅶ基因的 其他多态性处于连锁不平衡；也可能是Arg353-Gln353置换改变了因子Ⅶ分子构型而影响F Ⅶ在肝细胞内处理过程导致分泌减少；还可能是改变了血浆中FⅦ蛋白稳定性加速了其循环 清除；变异因子Ⅶ酶原在体内难以激活可能导致低FⅦa水平[9]。
有关凝血因子Ⅶ与脑卒中之间的关系尚未见报道。我们所研究的294例缺血性脑卒中患者和2 79例年龄、性别比例及血压与此相匹配的对照，未发现凝血因子Ⅶ的这两种多态性与缺血性 脑卒中之间的关系。本试验发现中国人FⅦ基因353gln等位基因频率为5.9%，远远低于欧洲 人，后者为20%。
作者简介：马丽媛，女，1965年11月生，主治医师，中国医学科学院阜外心血管病医院，10 0037
参考文献
, 百拇医药
1.Pinotti M,Toso R,Redaelli R,et al.Molecular mechanisms of FⅦ deficiency.Blood,1998,92:1646-1651
2.Mdade TW,Ruddock V,Stirling Y,et al.Fibrinolytic activ ity,clotting factors,and long-term incidence of ischaemic heart disease in the Northwick Park Heart Study.Lancet,1993,342:1076
3.Heinich J,Balleisen L,Schulte H,et al.Fibrinogen and f actor Ⅶ in the prediction of coronary risk:results form the PROCAM study in hea lth men.Arteriosclerosis Thromb,1994,14:54
, http://www.100md.com
4.O′Hara PJ,Grant FJ,Haldeman BA,et al.Nucleotide seque nce of the gene coding for human factor Ⅶ,a vitamin K-dependent protein partic ipating in blood coagulation.Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:5158
5.陶蓉，于金德.凝血因子Ⅶ与饮食脂肪、血脂的关系.国外医学心血管 疾病分册，1999，26:73-75
6.Mennen LI,de Maat-Moniek PM,Schouten EG,et al.Dietar y effects on coagulation factor Ⅶ vary across genotypes of the R/Q353 polymorph ism in elderly people.J Nutr,1998,128:870-874
, 百拇医药
7.Scarabin PY,Vissac AM,Kirzin JM,et al.Population correlates of coagulation factor Ⅶ:importance of age,sex,and menopausal status as determinan ts of activated factor Ⅶ.Arterioscler Thromb Vasc Biol,1996,16:1170-1176
8.Ozawa T,Takikawa Y,Niiya K,et al.Factor Ⅶ Morioka:a homozygo us missense mutation in the signal sequence identified in a patient with factor Ⅶ defiency.British J Haematology,1998,101:47-49
9.王林林，宋善俊.凝血因子Ⅶ与冠心病.国外医学输血及血液学分册， 1998，21：294-297
(收稿日期：2000-06-22), http://www.100md.com
单位：马丽媛(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；赵勇(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；王兴宇(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；刘力生(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)；刘一仙(中国医学科学院阜外心血管病医院 100037)
关键词：凝血因子Ⅶ；基因；多态性；缺血性脑卒中
山西医药杂志000510 【 摘 要 】 目的 探讨中国人缺血性脑卒中与凝血因子Ⅶ(FⅦ)基因arg353 g1n 及del(-323)ins多态性的关系。方法 利用PCR技术和分子杂交技术对北京 地区294例缺血性脑卒中患者进行FⅦ基因arg353g1n及del(-323)ins多态性的检测和分析， 并与279例北京地区的非卒中对照进行比较。结果 缺血性脑卒中患者FⅦ基 因arg353g1n及del(-323)ins多态性的基因型频率和等位基因频率与对照组相比无明显差异 。结论 FⅦ基因arg353g1n及del(-323)ins多态性可能不是中国人群缺血 性脑卒中发病的遗传学危险因素。
, 百拇医药
Association of FⅦ gene polymorphisms with ischemic stroke
Ma Liyuan,Zhao Yong,Wang Xingyu,et al
(Fuwai Heart Hospital,CAMS & PUMC,Beiji ng,100037,China)
【 Abstract 】 Objective To investigate whether FⅦ arg353gln and del(-323)ins polymorphisms are associated with ischemic stroke.Meth ods FⅦ arg353gln and del(-323)ins polymorphisms were determined by po lymerase chain reaction (PCR) and molecular hybridization in 294 cases of ischem ic stroke and 279 controls selected from Beijing population.Two groups were matc hed in sex,age and blood pressure.Results The prevalence rates of genotype frequency and allele frequency of FⅦ arg353gln and del(-323)ins po lymorphisms are not significantly different between ischemic stroke cases and co ntrols (P>0.05).Conclusion FⅦ arg353gln and del( -323)ins polymorphisms are not associated with ischemic stroke.
, 百拇医药
【 Key words】 FⅦ; Gene; Polymorphism; Ischemic stroke
外源性凝血途径在血栓形成中起着非常重要的作用。凝血因子Ⅶ是外源性凝血途径中的重要 凝血因子之一，在凝血的起始步骤中起关键作用[1]。凝血因子Ⅶ血浆浓度的增加 或活性增强对导致高凝状态起决定性作用。文献[2，3]报道，FⅦ活性增加，心血管病死 亡率增加。我们应用PCR技术和分子杂交技术对北京地区294例缺血性脑卒中患者及279例非 卒中对照进行了FⅦ基因arg353gln及del(-323)ins多态性的检测和分析，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：缺血性脑卒中患者294例，随机的非缺血性脑卒中对照279例，两组人群按 照年龄(相差不过3岁)、性别以及血压进行匹配，所有受试者均来自北京地区。病例组和对 照组年龄、性别比例、血压水平、体重指数、血浆总胆固醇、甘油三酯、血糖、尿素氮、血 肌酐水平均差异无显著性，见表1。
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表1 病例组和对照组的一般临床参数比较(
±s) 组别年龄
岁
男
女
收缩压
mmHg
舒张压
mmHg
体重指数
kg/m 2
, 百拇医药
胆固醇
mmol/L
甘油三酯
mmol/L
血糖
mmol/L
尿素氮
mmol/L
血 肌酐
mmol/L
P值
病例组
62±9
, 百拇医药
182
112
141±18
86±11
24±3
5.1±1.1
1. 8±1.0
6.1±2.5
5.6±2.3
91±21
>0.05
对照组
62±9
, http://www.100md.com
176
103
142±20
86±12
25±4
4.6±1.1
1. 4±0.9
5.5±1.6
6.0±1.9
92±22
>0.05
1.2 方法：取外周静脉血5 mL，应用标准的酚-氯仿法提取基因组DNA。采用PCR技术分别 扩增凝血因子Ⅶ基因含arg353gln及del(-323)ins多态性位点的核苷酸序列，将扩增产物与 生物素标记的探针进行杂交，经显色后判读基因型结果。
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1.3 统计学处理：利用SPSS统计软件对计量资料采用t检验；计数资料采用χ2 分析。
2 结 果
2.1 本试验FⅦ基因arg353gln多态性在两组人群中的分布：见第386页表2。
表2 FⅦ基因arg353gln多态性在两组人群中的分 布 组别
例数
基因型频率
等位基因型频率
ArgArg
ArgGln
GlnGln
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Arg
Gln
例数
%
例数
%
例数
%
例数
%
例数
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中风组
294
, http://www.100md.com
263
89.6
29
9.9
2
0.68
555
94.4
33
5.6
对照组
279
247
, 百拇医药
88.5
31
11.1
1
0.36
525
94.1
33
5.9
FⅦ基因arg353gln多态性的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布无统计学差异。
2.2 FⅦ基因del(-323)ins多态性在两组人群中的分布：见表3。
, http://www.100md.com
表3 FⅦ基因del(-323)ins多态性在两组人群中的分布 组别
例数
基因型频率
等位基因型频率
DelDel
DelIns
InsIns
Del
Ins
例数
%
例数
, 百拇医药
%
例数
%
例数
%
例数
%
中风组
294
263
89.5
29
9.9
2
, 百拇医药
0.68
555
94.4
33
5.6
对照组
279
245
87.8
31
11.8
1
0.36
, 百拇医药
523
93.7
35
6.3
FⅦ基因del(-323)ins多态性的基因型频率和等位基因频率在两组人群中的分布无统计学差 异。
3 讨 论
凝血因子Ⅶ是肝脏合成的一种维生素K依赖性凝血因子，其基因位于第13号染色体长臂(13q3 4)。基因长度为12.8 kb。由8个内含子和9个外显子组成[4]。
因子Ⅶ是外源性凝血途径的第一个蛋白酶，它能被丝氨酸蛋白酶和凝血酶激活。FⅦa活性很 低，只有当它与组织因子(TF)结合后才能启动凝血途径。动脉粥样硬化瘢块破裂后FⅦa血浆 水平升高可导致凝血瀑布反应的放大[5]。
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因子Ⅶ水平与血浆甘油三酯和胆固醇水平呈正相关[6]，且受年龄、性别、人种、 体重指数、血压和空腹胰岛素水平等因素的影响[7]，与吸烟、饮酒与否无明显关 系。因子Ⅶ基因的Arg353Gln多态性和Del(-323)Ins多态性也与因子Ⅶ凝血活性水平相关。 第一种多态性(Arg353Gln,R353Q)为FⅦ基因第八外显子DNA链一个碱基突变，使第353位氨基 酸密码第2位的鸟嘌呤(G)变为腺嘌呤(A)，其相应的编码氨基酸由精氨酸(Arg)变成谷氨酰胺 (Gln)，该碱基突变改变了限制性内切酶MspI的切割位点，变称MspI多态性。约20%的欧洲人 携带编码Q353蛋白的等位基因。迄今为止，所有研究人群中，高加索人、欧洲人、印度人、 非洲人和日本人中都发现携带Gln353基因的个体FⅦ水平低于Arg353纯合子个体，最近研究 还发现Gln353基因伴有相当低水平的活化的FⅦ分子。第二种多态性是因子Ⅶ基因5′端启动 子内插入十个核苷酸序列CCTATATCCT，插入位置在基因翻译起始部位上游323 bp处，称之为 10 bp/0 bp多态性。启动子部位-323插入多态性可直接降低转录活性，因此伴有明显低FⅦ 水平，此插入多态性与MspI酶切位点呈限制性片段长度多态性连锁不平衡。两种多态性中哪 一种具有功能性还不清楚。Qzawa等[8]指出因子Ⅶ基因Gln353 多态性和核苷酸-3 23处10碱基对启动子插入与血浆FⅦ水平中度减少有关。
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因子Ⅶ基因多态性对FⅦ影响的精确分子机制仍不清楚。这两种多态性可能与因子Ⅶ基因的 其他多态性处于连锁不平衡；也可能是Arg353-Gln353置换改变了因子Ⅶ分子构型而影响F Ⅶ在肝细胞内处理过程导致分泌减少；还可能是改变了血浆中FⅦ蛋白稳定性加速了其循环 清除；变异因子Ⅶ酶原在体内难以激活可能导致低FⅦa水平[9]。
有关凝血因子Ⅶ与脑卒中之间的关系尚未见报道。我们所研究的294例缺血性脑卒中患者和2 79例年龄、性别比例及血压与此相匹配的对照，未发现凝血因子Ⅶ的这两种多态性与缺血性 脑卒中之间的关系。本试验发现中国人FⅦ基因353gln等位基因频率为5.9%，远远低于欧洲 人，后者为20%。
作者简介：马丽媛，女，1965年11月生，主治医师，中国医学科学院阜外心血管病医院，10 0037
参考文献
, 百拇医药
1.Pinotti M,Toso R,Redaelli R,et al.Molecular mechanisms of FⅦ deficiency.Blood,1998,92:1646-1651
2.Mdade TW,Ruddock V,Stirling Y,et al.Fibrinolytic activ ity,clotting factors,and long-term incidence of ischaemic heart disease in the Northwick Park Heart Study.Lancet,1993,342:1076
3.Heinich J,Balleisen L,Schulte H,et al.Fibrinogen and f actor Ⅶ in the prediction of coronary risk:results form the PROCAM study in hea lth men.Arteriosclerosis Thromb,1994,14:54
, http://www.100md.com
4.O′Hara PJ,Grant FJ,Haldeman BA,et al.Nucleotide seque nce of the gene coding for human factor Ⅶ,a vitamin K-dependent protein partic ipating in blood coagulation.Proc Natl Acad Sci USA,1987,84:5158
5.陶蓉，于金德.凝血因子Ⅶ与饮食脂肪、血脂的关系.国外医学心血管 疾病分册，1999，26:73-75
6.Mennen LI,de Maat-Moniek PM,Schouten EG,et al.Dietar y effects on coagulation factor Ⅶ vary across genotypes of the R/Q353 polymorph ism in elderly people.J Nutr,1998,128:870-874
, 百拇医药
7.Scarabin PY,Vissac AM,Kirzin JM,et al.Population correlates of coagulation factor Ⅶ:importance of age,sex,and menopausal status as determinan ts of activated factor Ⅶ.Arterioscler Thromb Vasc Biol,1996,16:1170-1176
8.Ozawa T,Takikawa Y,Niiya K,et al.Factor Ⅶ Morioka:a homozygo us missense mutation in the signal sequence identified in a patient with factor Ⅶ defiency.British J Haematology,1998,101:47-49
9.王林林，宋善俊.凝血因子Ⅶ与冠心病.国外医学输血及血液学分册， 1998，21：294-297
(收稿日期：2000-06-22), http://www.100md.com