武汉地区健康汉族人小肠脂肪酸结合蛋白基因的多态性研究
作者：黄敏 杨香玖 胡正国 李丽 王中丽
单位：黄敏(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 杨香玖(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 胡正国(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 李丽(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 王中丽(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)
关键词：小肠脂肪酸结合蛋白；基因
数理医药学杂志000114
摘 要：为了解武汉地区健康汉族人小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)多态性，应用聚合酶链反应(PCR)技术检测120例对象的FABPα HhaI位点的限制性片段长度多态性(RFLPs)。结果显示，武汉地区健康汉族人存在FABPα多态性。
, 百拇医药 中图分类号：Q 753
文章编号：1004-4337(2000)01-0028-02▲
小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)是细胞内脂质结合蛋白家族中的成员之一[1]，分子量为15KD，仅在小肠绒毛柱状上皮细胞中表达[2～4]，以非共价键形式与长链脂肪酸结合[5]，它参与细胞内长链脂肪酸吸收、代谢或运转[6]。
编码I-FABP的基因是小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)，它定位于人4q28-31，含3382个核苷酸，有4个外显子和3个内含子[6]。Baier等研究发现[7]，当FABPα 54位密码子发生变异时(GCT→ACT)，可致人类I-FABP存在两种异型：即丙氨酸〔Hhr54(-)〕和苏氨酸〔Hhr54(+)〕的I-FABP。
, 百拇医药
为研究武汉地区健康汉族人FABPα多态性，我们对120例健康汉族人进行了分析。
1 对象和方法
1.1 对象 120例对象均为我院体检健康者，其中男66例，女54例，平均年龄50±17岁。无心血管疾病及内分泌代谢疾病。
1.2 方法
1.2.1 采用酚-氯仿法提取外周血DNA。
1.2.2 DNA扩增：包含HhaI酶切位点的特异性寡核苷酸引物参照文献如下：
5′-ACAGGTGTTAATATAGTGAAAAG-3′
3′-CTGCCCTTGACTTGAGTCCCAT-5′
, 百拇医药
在反应液中依次加入10×反应缓冲液5ul，4种dNTP 5ul(各2mmol/L)，每种引物50pmol，基因组DNA0.5ug，去离子水补充反应体系至50ul。初次反应于95℃水浴变性10分钟，加Taq DNA多聚酶2u，加入50ul石蜡油，进入扩增，93℃变性55秒，59℃退火60秒，72℃延伸55秒，共35个循环，最后1次循环72℃延伸5′。
1.2.3 将扩增产物提纯后，加入限制性内切酶HhaI10u,37℃消化4小时，用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(120V电压下电泳4小时)，EB染色后紫外灯下观察结果。
1.3 统计方法
等位基因检出率采用直接计数法，计算资料比较用χ2检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 武汉地区健康汉族人FABPα多态性
研究表明54位密码子未发生变异的FABPα基因〔Thr54(-)〕存在HhaI酶切位点，PCR产物酶解后电泳有99bp和81bp两个片段。54位密码子发生变异的FABPα基因〔Thr54(+)〕无HhaI酶切位点，PCR产物酶解后仅180bp1个片段。
2.2 FABPα多态性与性别、年龄的关系
本文资料显示，无论是男性或女性，无论是中青年或老年，各组FABPα基因频率分布无显著性差异(P>0.05)，见表1。
表1 各组FABPα基因频率分布 性别
年龄
例数
, http://www.100md.com 基因类型
Thr54(-)
Thr54(+)
男性
<60
≥60
32
34
0.47(15)
0.44(15)
0.53(17)
0.56(19)
女性
, http://www.100md.com
<60
≥60
28
26
0.46(13)
0.50(13)
0.54(15)
0.50(13)
3 讨论
小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)的立体结构是1个低蛋白[5]，包含10股反向平行的β链，这些β链排列成两个近似相互垂直的片层结构βA～βF形成一个片层，而βF～βJ形成另一片层，两个β片层合起似蛤壳状外形，称之为β钳夹。这种蛋白结构的关键部位之一是β钳夹转角处54位和55位氨基酸，若小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)发生变异，转角处氨基酸出现任何细微变化，都能影响I-FABP的结构、特性，从而影响它对长链脂肪酸的亲和力。
, 百拇医药
Baier研究Pima印第安人[7]，Mitchell研究美籍墨西哥人[8]均发现不同人群存在FABPα多态性，并证实此种多态性与某些疾病相关联。
我们采用PCR方法研究120例武汉地区健康汉族人FABPα的限制性片段长度性，并证实他们存在FABPα HhaI多态位点，且此多态位点与性别、年龄无关。至于FABPα多态性与不同疾病之间的关系，我们将做进一步研究。■
参考文献：
[1] Sacchettini JC, Gordon JI, Banaszak LJ. The structure of crystallin escherichia Coli derived rat intestinal fatty acid binding protein at 2.5A resolution. J Biol Chem, 1988,263:5815.
, http://www.100md.com
[2] Lowe JB, Sacchettini JC, Laposata M, et al. Expression of rat intestinal farry acid-binding protein in escherichia coli. J Biol Chem, 1987,262:5931.
[3] Cohn SM, Simon TC, Roth KA. Use of transgenic mice to map cis-acuting elements in the intestinal fatty acid binding protein that control cell lineagespecific and reginal patterns of expression along the duodenal colonic and cryptvillus axes of the gut epithelium. J Cell Biol, 1992,119:27.
, 百拇医药
[4] Sacchettini JC, Banaszak LJ, Gordon JI.Expression of rat intestinal fatty acid binding protein in E Coli and its subsequent structure analysis. Mol Cell Biol, 1990,98:81.
[5] Sacchettini JC, Gordon JI. Rat intestinal fatty acid binding protein. J Biol Chem, 1993,268:18399.
[6] Sweetser DA, Birkenmeier EM, Klisak IJ, et al. The human and rodent intestinal fatty acid binding protein genes: a comparative analysis of their structure, expression and linkage relationships. J Biol Chem, 1987,262:16060.
, http://www.100md.com
[7] Baier LJ, Scchettini JC, Knowler WC, et al. An amino acid substitution in the human intestinal fatty acid-binding protein is associated with increased fatty acid binding, increased fat oxidation and insulin resistance. J Clin Invest, 1995, 95: 1281.
[8] Prochazka M, Lilliojia S,Tait JF, et al. Linkage of chromosome markers on 4q with a putative gene determing maximal insulin action in Pima Indians. Diabetes, 1993,42:514.
收稿日期：1999-04-30, 百拇医药
单位：黄敏(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 杨香玖(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 胡正国(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 李丽(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)； 王中丽(湖北医科大学附属第二医院内分泌科 武汉430071)
关键词：小肠脂肪酸结合蛋白；基因
数理医药学杂志000114
摘 要：为了解武汉地区健康汉族人小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)多态性，应用聚合酶链反应(PCR)技术检测120例对象的FABPα HhaI位点的限制性片段长度多态性(RFLPs)。结果显示，武汉地区健康汉族人存在FABPα多态性。
, 百拇医药 中图分类号：Q 753
文章编号：1004-4337(2000)01-0028-02▲
小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)是细胞内脂质结合蛋白家族中的成员之一[1]，分子量为15KD，仅在小肠绒毛柱状上皮细胞中表达[2～4]，以非共价键形式与长链脂肪酸结合[5]，它参与细胞内长链脂肪酸吸收、代谢或运转[6]。
编码I-FABP的基因是小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)，它定位于人4q28-31，含3382个核苷酸，有4个外显子和3个内含子[6]。Baier等研究发现[7]，当FABPα 54位密码子发生变异时(GCT→ACT)，可致人类I-FABP存在两种异型：即丙氨酸〔Hhr54(-)〕和苏氨酸〔Hhr54(+)〕的I-FABP。
, 百拇医药
为研究武汉地区健康汉族人FABPα多态性，我们对120例健康汉族人进行了分析。
1 对象和方法
1.1 对象 120例对象均为我院体检健康者，其中男66例，女54例，平均年龄50±17岁。无心血管疾病及内分泌代谢疾病。
1.2 方法
1.2.1 采用酚-氯仿法提取外周血DNA。
1.2.2 DNA扩增：包含HhaI酶切位点的特异性寡核苷酸引物参照文献如下：
5′-ACAGGTGTTAATATAGTGAAAAG-3′
3′-CTGCCCTTGACTTGAGTCCCAT-5′
, 百拇医药
在反应液中依次加入10×反应缓冲液5ul，4种dNTP 5ul(各2mmol/L)，每种引物50pmol，基因组DNA0.5ug，去离子水补充反应体系至50ul。初次反应于95℃水浴变性10分钟，加Taq DNA多聚酶2u，加入50ul石蜡油，进入扩增，93℃变性55秒，59℃退火60秒，72℃延伸55秒，共35个循环，最后1次循环72℃延伸5′。
1.2.3 将扩增产物提纯后，加入限制性内切酶HhaI10u,37℃消化4小时，用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(120V电压下电泳4小时)，EB染色后紫外灯下观察结果。
1.3 统计方法
等位基因检出率采用直接计数法，计算资料比较用χ2检验。
2 结果
, 百拇医药
2.1 武汉地区健康汉族人FABPα多态性
研究表明54位密码子未发生变异的FABPα基因〔Thr54(-)〕存在HhaI酶切位点，PCR产物酶解后电泳有99bp和81bp两个片段。54位密码子发生变异的FABPα基因〔Thr54(+)〕无HhaI酶切位点，PCR产物酶解后仅180bp1个片段。
2.2 FABPα多态性与性别、年龄的关系
本文资料显示，无论是男性或女性，无论是中青年或老年，各组FABPα基因频率分布无显著性差异(P>0.05)，见表1。
表1 各组FABPα基因频率分布 性别
年龄
例数
, http://www.100md.com 基因类型
Thr54(-)
Thr54(+)
男性
<60
≥60
32
34
0.47(15)
0.44(15)
0.53(17)
0.56(19)
女性
, http://www.100md.com
<60
≥60
28
26
0.46(13)
0.50(13)
0.54(15)
0.50(13)
3 讨论
小肠脂肪酸结合蛋白(I-FABP)的立体结构是1个低蛋白[5]，包含10股反向平行的β链，这些β链排列成两个近似相互垂直的片层结构βA～βF形成一个片层，而βF～βJ形成另一片层，两个β片层合起似蛤壳状外形，称之为β钳夹。这种蛋白结构的关键部位之一是β钳夹转角处54位和55位氨基酸，若小肠脂肪酸结合蛋白基因(FABPα)发生变异，转角处氨基酸出现任何细微变化，都能影响I-FABP的结构、特性，从而影响它对长链脂肪酸的亲和力。
, 百拇医药
Baier研究Pima印第安人[7]，Mitchell研究美籍墨西哥人[8]均发现不同人群存在FABPα多态性，并证实此种多态性与某些疾病相关联。
我们采用PCR方法研究120例武汉地区健康汉族人FABPα的限制性片段长度性，并证实他们存在FABPα HhaI多态位点，且此多态位点与性别、年龄无关。至于FABPα多态性与不同疾病之间的关系，我们将做进一步研究。■
参考文献：
[1] Sacchettini JC, Gordon JI, Banaszak LJ. The structure of crystallin escherichia Coli derived rat intestinal fatty acid binding protein at 2.5A resolution. J Biol Chem, 1988,263:5815.
, http://www.100md.com
[2] Lowe JB, Sacchettini JC, Laposata M, et al. Expression of rat intestinal farry acid-binding protein in escherichia coli. J Biol Chem, 1987,262:5931.
[3] Cohn SM, Simon TC, Roth KA. Use of transgenic mice to map cis-acuting elements in the intestinal fatty acid binding protein that control cell lineagespecific and reginal patterns of expression along the duodenal colonic and cryptvillus axes of the gut epithelium. J Cell Biol, 1992,119:27.
, 百拇医药
[4] Sacchettini JC, Banaszak LJ, Gordon JI.Expression of rat intestinal fatty acid binding protein in E Coli and its subsequent structure analysis. Mol Cell Biol, 1990,98:81.
[5] Sacchettini JC, Gordon JI. Rat intestinal fatty acid binding protein. J Biol Chem, 1993,268:18399.
[6] Sweetser DA, Birkenmeier EM, Klisak IJ, et al. The human and rodent intestinal fatty acid binding protein genes: a comparative analysis of their structure, expression and linkage relationships. J Biol Chem, 1987,262:16060.
, http://www.100md.com
[7] Baier LJ, Scchettini JC, Knowler WC, et al. An amino acid substitution in the human intestinal fatty acid-binding protein is associated with increased fatty acid binding, increased fat oxidation and insulin resistance. J Clin Invest, 1995, 95: 1281.
[8] Prochazka M, Lilliojia S,Tait JF, et al. Linkage of chromosome markers on 4q with a putative gene determing maximal insulin action in Pima Indians. Diabetes, 1993,42:514.
收稿日期：1999-04-30, 百拇医药