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编号:10290685
腺样囊性癌中不同转移潜能亚系体外侵袭能力的定量研究
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     作者:毛立民 于世凤 孙开华 刘红岩 徐少峰 韩锐

    单位:毛立民 于世凤 孙开华(北京医科大学口腔医学院病理科 100081);刘红岩 徐少峰 韩锐(中国医学科学院药理研究所药理1室)

    关键词:

    中华口腔医学杂志000129 腺样囊性癌是口腔颌面部常见的恶性肿瘤,其特征之一是易侵犯邻近组织和向远处器官转移。根据肿瘤异质性理论[1,2],在一个原发恶性肿瘤细胞群中,存在着转移能力不同的细胞亚系。我们利用具有不同转移潜能的腺样囊性癌细胞株,对其体外的异质性粘附能力、运动能力及侵袭重组基底膜能力进行了定量分析,探讨了其转移潜能与体外侵袭能力的关系。

    一、材料和方法

    1.细胞株:腺样囊性癌Acc-2细胞株和从中筛选出的肺高转移Acc-M细胞株[3],由上海第二医科大学口腔医学院提供。
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    2.与细胞外基质粘附能力测定:于96孔板每孔中分别加入含纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和基底膜胶2 μg的培养液50 μl,干燥后加含8×108/L的细胞悬液100 μl,1 h后弃掉培养基和未粘附的细胞,每孔加MTT(四氮甲唑蓝)40 μg,4 h后去除MTT,加二甲基亚枫200 μl,用酶标仪在570 nm处测定吸光度值。

    3.细胞运动能力测定:方法[4]: 将纤维粘连蛋白按10 mg/L稀释,24孔板每孔加300 μl,1 h后加入2.5×108/ L的细胞悬液400 μl,细胞贴壁后用刮子划出条形刮除带,更换培养液后拍照;定时观察细胞运动至即将汇合时用戊二醛固定,并计算出运动距离和速度。

    4.勃顿小室法侵袭重组基底膜实验:用纤维粘连蛋白作趋化剂,每个培养小室内加入2×109/ L的细胞悬液100 μl,分别于侵袭4、6、8 h将滤膜固定,HE染色,400倍光镜下计数侵袭细胞数,计算平均值。
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    二、结果

    1.Acc-M细胞株对纤维粘连蛋白、层粘连蛋白和基底膜胶的粘附率分别为79.4%、71.1%和69.8%;Acc-2细胞株分别为61.8%、42%和60.4%,经统计学检验对纤维粘连蛋白粘附能力差异有显著性,对层粘连蛋白有高度显著性。

    2.Acc-M细胞株移动能力较Acc-2强,终止实验时Acc-M、Acc-2细胞株运动距离分别为27.2 μm和13.8 μm;运动速度分别为2.26 μm /h和1.15 μm /h。

    3.2个细胞株均具有侵袭重组基底膜的能力,实验后4、6、8 h 3次检测,Acc-M细胞株侵袭细胞数分别为39.80±3.42、82.40±5.58和103.20±5.63;Acc-2细胞株分别为26.40±3.20、53.20±3.70和68.00±4.35。经统计学检验差异有高度显著性。

, 百拇医药     三、讨论

    在肿瘤侵袭转移过程中,涉及粘附、运动等多种细胞功能。肿瘤离开母体接触到或穿过基底膜的过程为异质型粘附;肿瘤细胞侵入基底膜和邻近组织、进入血循环、穿出血管壁进入继发部位等阶段需要主动运动。本组结果显示,转移潜能强的腺样囊性癌细胞株,在体外实验中有较高的异质型粘附、运动和穿过重组基底膜的能力。癌细胞侵袭是一个综合性过程,它以粘附为前提,以运动为动力,以分泌降解酶打开通路[5]。检测不同转移潜能的腺样囊性癌亚系体外侵袭能力的差异,有助于了解其侵袭转移机制并有效选择抗侵袭转移药物。

    参考文献:

    [1]Heppher GH.Tumor Heterogeneity.Cancer Res,1984,44: 2259-2265.

    [2]Fidler IJ.Critical factors in the biology of human cancer metastasis: twenty-eighth G.H.A.Clowes memorial award lecture.Cancer Res,1990,50: 6130-6138.
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    [3]关晓峰,邱蔚六,何荣根,等.肺高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株的筛选.中华口腔医学杂志,1996,31: 74-76.

    [4]Filippo G,Erkki R.Elevated levels of the alpha 5 beta 1 fibronectin receptor suppress the transformed phenotype of chinese hamster ovary cells.Cell,1990,60: 849-859.

    [5]Liotta L A.Tumor invasion and metastases-role of the extracellular matrix: rhodas memorial award lecture.Canaer Res,1986,46:1-7.

    收稿日期:1999-02-24, http://www.100md.com