鸡胸腺细胞特异性单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立
http://www.100md.com
37c医学网
作者：李一经 刘宝全 曹殿军 卢景良
单位：李一经 刘宝全 (东北农业大学，哈尔滨150030)；曹殿军 卢景良 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨150001)
关键词：
中国免疫学杂志990320 中国图书分类号 R392.11
人和小鼠淋巴细胞表面抗原的各种单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAbs)试剂商品化应用，为细胞免疫学研究与疾病诊断提供了有力工具，而对禽类细胞免疫学研究相对落后于人和哺乳动物的研究，原因之一是缺乏淋巴细胞表面抗原的各种McAbs试剂。为此，我们研制并建立了抗鸡胸腺细胞McAbs杂交瘤细胞株，为我国禽类免疫和免疫病理研究提供了重要手段。
本实验以鸡胸腺细胞为免疫原，免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，完整细胞ELISA法检测并克隆阳性细胞株，共获得15株稳定分泌抗体的克隆细胞株。采用液相ELISA法测定15株McAbs与外周血T细胞、外周血B细胞、胸腺细胞、法氏囊细胞和红细胞的反应性，结果表明，其中1B6、1C5、9H6、3E4、5E10等5株McAbs只与鸡胸腺细胞和外周血T细胞反应，而
不与外周血B细胞、法氏囊细胞和红细胞反应。对这5株McAbs进行了亚类鉴定，属IgG1的有3E4和
9H6，属IgG2b的是1C5和1B6，属IgM类的是5E10。以胸腺细胞、法氏囊细胞制备膜抗原，经SDS-PAGE电泳，McAbs与膜抗原进行Western blot分析亦表明，这5株McAbs与胸腺细胞膜抗原反应出现一条反应带，分子量约为60～65 kD，而相同条件下与法氏囊细胞膜抗原反应未出现反应带。采用流式细胞术分析了这5株克隆细胞分泌的McAbs与胸腺细胞、脾细胞、法氏囊细胞及外周血单个核细胞的阳性反应率，结果表明，这5株McAbs与法氏囊细胞的阳性反应率不超过1.3%，与其他淋巴组织的阳性反应率分别为：胸腺细胞63.3%～72.4%，脾细胞17.3%～23.5%；外周血单个核细胞为23.0%～27.0%。
通过McAbs的特异性试验、组织学分布测定及Western blot分析均表明，这5株杂交瘤细胞分泌的McAbs可认为是针对鸡胸腺细胞的特异性McAbs，可作为鸡胸腺细胞的标记试剂和纯化试剂。这一工作的进一步完成，将为我国禽类免疫细胞分离、纯化、表面分化抗原以及淋巴细胞亚类鉴定提供重要的研究手段。
作者简介：李一经，男，40岁，博士，副教授，现从事兽医微生物与禽类细胞免疫学研究；曹殿军，男，32岁，博士，副研究员，现从事新城疫的分子生物学研究
〔收稿1997-09-09 修回1998-03-09〕, http://www.100md.com
单位：李一经 刘宝全 (东北农业大学，哈尔滨150030)；曹殿军 卢景良 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，哈尔滨150001)
关键词：
中国免疫学杂志990320 中国图书分类号 R392.11
人和小鼠淋巴细胞表面抗原的各种单克隆抗体(Monoclonal antibodies,McAbs)试剂商品化应用，为细胞免疫学研究与疾病诊断提供了有力工具，而对禽类细胞免疫学研究相对落后于人和哺乳动物的研究，原因之一是缺乏淋巴细胞表面抗原的各种McAbs试剂。为此，我们研制并建立了抗鸡胸腺细胞McAbs杂交瘤细胞株，为我国禽类免疫和免疫病理研究提供了重要手段。
本实验以鸡胸腺细胞为免疫原，免疫Balb/c小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，完整细胞ELISA法检测并克隆阳性细胞株，共获得15株稳定分泌抗体的克隆细胞株。采用液相ELISA法测定15株McAbs与外周血T细胞、外周血B细胞、胸腺细胞、法氏囊细胞和红细胞的反应性，结果表明，其中1B6、1C5、9H6、3E4、5E10等5株McAbs只与鸡胸腺细胞和外周血T细胞反应，而
不与外周血B细胞、法氏囊细胞和红细胞反应。对这5株McAbs进行了亚类鉴定，属IgG1的有3E4和
9H6，属IgG2b的是1C5和1B6，属IgM类的是5E10。以胸腺细胞、法氏囊细胞制备膜抗原，经SDS-PAGE电泳，McAbs与膜抗原进行Western blot分析亦表明，这5株McAbs与胸腺细胞膜抗原反应出现一条反应带，分子量约为60～65 kD，而相同条件下与法氏囊细胞膜抗原反应未出现反应带。采用流式细胞术分析了这5株克隆细胞分泌的McAbs与胸腺细胞、脾细胞、法氏囊细胞及外周血单个核细胞的阳性反应率，结果表明，这5株McAbs与法氏囊细胞的阳性反应率不超过1.3%，与其他淋巴组织的阳性反应率分别为：胸腺细胞63.3%～72.4%，脾细胞17.3%～23.5%；外周血单个核细胞为23.0%～27.0%。
通过McAbs的特异性试验、组织学分布测定及Western blot分析均表明，这5株杂交瘤细胞分泌的McAbs可认为是针对鸡胸腺细胞的特异性McAbs，可作为鸡胸腺细胞的标记试剂和纯化试剂。这一工作的进一步完成，将为我国禽类免疫细胞分离、纯化、表面分化抗原以及淋巴细胞亚类鉴定提供重要的研究手段。
作者简介：李一经，男，40岁，博士，副教授，现从事兽医微生物与禽类细胞免疫学研究；曹殿军，男，32岁，博士，副研究员，现从事新城疫的分子生物学研究
〔收稿1997-09-09 修回1998-03-09〕, http://www.100md.com