补肾生血治疗β珠蛋白生成障碍性贫血进一步临床研究和免疫功能测定
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作者：黄有文 张新华 王荣新 蔡利群 吴志奎 姜葆华 李承军
单位：黄有文(解放军第303医院 广西南宁，530021)；张新华(解放军第303医院 广西南宁，530021)；王荣新(解放军第303医院 广西南宁，530021)；蔡利群(解放军第303医院 广西南宁，530021)；吴志奎(中国中医研究广安门医院 北京，100053)；姜葆华(中国中医研究广安门医院 北京，100053)；李承军(中国中医研究广安门医院 北京，100053)
关键词：β珠蛋白生成障碍；血红蛋白/抗碱；免疫功能；T淋巴细胞/辅助
临床血液学杂志000202 摘 要：目的：为了进一步观察中医(补肾生血)治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效和对免疫功能的影响。从1998年10月～1999年1月再治疗β珠蛋白生成障碍性贫血17例。方法：中药方剂以生地、熟地、太子参和当归等12味中药组成，并辨证加味，煎服，每日1剂，分3次内服，3个月为1疗程。用流式细胞计和激光共聚焦扫描显微镜测定免疫功能。结果：16例症状改善，肝脾缩小，Hb增加(10～23)g/L，平均增加16.7 g/L，HbE增加0.02～0.33，平均增加0.1，未观察到副作用。疗后病人外周血淋巴细胞总数、辅助T细胞及抑制T细胞比值有提高，DNA排列整齐，分布均匀，含量较治疗前增加。结论：中医补肾生血治疗β珠蛋白生成障碍性贫血有比较稳定的疗效，免疫功能有改善。
, 百拇医药
Clinical investigation of traditional Chinese Medince-Bushen Shengxue Treat β-Thalassemia and immune function examination
HUANG You-wen ZHANG Xin-hua WANG Rong-xin CAI Li-qun
(PLA 303rd hospital,Nanning 530021)
WU Zi-kuei JIANG Bao-hua LI Cheng-jun
(Guanganmen Hospital china Academy of TCM,Beijing 100053)
Abstract：Objective:In order to investigate the therapeutic effect of β-Thalassemia with Traditional Chinese Medieine (TCM)-Bushen shengxue we treated 17 cases of β-Thalassemia from october 1998 to January 1999.Methods:Presiption with of twelve kinds of Arillus Cormi,Radix Spatliolobi etc.A course were 3 months using flow cytmetry and laster fous scanning microsaopy to determinate the immune function.Results:16 cases were improued 1.The symptom ameliorated;2.The hepatosplenomegaly decreased;3.The hemoglobin significantly elevated (10～23)g/L,average 16.7 g/L,HbE increased 0.02～0.33,average 0.1;4.no side-effect was observed Lymphocyte count in peripheral blood,TH/TS ratio were increased;DNA arranged orderly distributed uniformity,content increased compared to those before therapy.Conclusions:TCM Bushen shengxue treating β-Thalassemia was effeitine.The imnune funition was impnoved.
, 百拇医药
Key words：β-Thalassemia Hemoglobin F Lmmune function Helper T lymphocytes▲
为了进一步观察补肾生血中药治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效，在原来治疗48例的基础上，1998年10月～1999年1月再治疗17例，并对免疫功能进行了观察，报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
1.1.1 一般资料：17例中，男12例，女5例，年龄平均11.3(2～26)岁，壮族11例，汉族6例，广西藉15人，广东藉2人。
1.1.2 症状和体征：自幼即有不同程度贫血，易患感染性疾患，珠蛋白生成障碍性贫血面貌、肝肿大者15例，在肋缘下可触及0.5～2.5 cm，平均1.8cm，脾肿大17例，在肋缘下1.5～12 cm，平均4.5 cm，质较硬。
, 百拇医药
1.1.3 临床化验：RBC(1.71～4.5)×1012/L，平均3.3×1012/L，HbF平均68.5(42～90) g/L，网织红细胞平均0.074(0.02～0.18)，HbF平均0.41(0.13～0.84)，其中9例HbA2+HbE平均0.55(0.31～0.79)。
1.1.4 临床诊断：根据张之南主编《血液病诊断及疗效标准》〔1〕，符合重型β珠蛋白生成障碍性贫血8例，中间型9例，其中9例为β珠蛋白生成障碍性贫血复合血红蛋白E。
1.2 方法
1.2.1 免疫功能测定法：根据中国中医研究院广安门医院基础研究室运用和建立的方法，治疗前后静脉采血，用流式细胞计测定T细胞亚群、NK细胞、淋巴细胞DNA荧光强度。激光共聚焦扫描观察淋巴细胞DNA、RNA含量。
, 百拇医药
1.2.2 中药方剂组成和给药方法：中药方剂：生地、熟地、山萸肉、龟板胶、阿胶、黄芪、首乌、枸杞及太子参等12味中药组成，成方基本固定，根据辨证施治的原则，个别病例略有增加，阴虚有热者加丹皮、地骨皮等，湿热瘀结，用茵陈蒿加减，伴瘀血者加赤芍、桃仁等，煎服，每日1剂，分3次口服，3个月为1个疗程。
1.2.3 疗效判定：根据文献〔1〕，凡是Hb增加或上升为有效，并参照第四届国际基因会议提出的凡HbF上升为临床有效。
1.2.4 疗效维持时间：疗程结束后随访检查RBC、Hb、HbF及网织红细胞，以月数计算。
2 结果
①有效病例，精神好，食欲增加，感染次数减少。②肝缩小者12例，范围0.5～1.5 cm，平均0.6 cm，脾缩小者14例，缩小0.5～1.5 cm，平均0.75 cm。③16例有效病例，治疗后红细胞、血红蛋白、网织红细胞及抗碱血红蛋白为：RBC平均增加0.68(0.1～1.1)×1012/L，Hb平均增加16.7(10～23)g/L，网织红细胞平均增加0.12(0.01～0.08)，抗碱血红蛋白平均增加0.1(0.02～0.33)。④未观察到明显的副作用。⑤疗效维持时间：治疗结束后逐月随访，疗效维持2个月的1例，4个月3例，6个月5例，8个月2例，维持1年者5例。⑥免疫功能测定结果见表1。
, 百拇医药
表1 中药治疗对外周血T淋巴细胞亚群的影响
T淋巴细胞亚群
n数
疗前
疗后
P值
CD+3(%)
12
50.51±8.71
55.45±10.06
>0.05
, 百拇医药 CD+3/CD+4(Th)(%)
12
25.20±5.87
28.54±7.42
>0.05
CD+3/CD+3(Ts)(%)
12
18.93±4.01
20.82±4.64
>0.05
, 百拇医药
Th/Ts
12
1.38±0.45
1.43±0.46
>0.05
NK细胞(%)
12
24.6±10.63
20.34±8.89
>0.05
中药治疗前后外周血淋巴细胞变异系数(CV%)的变化为：治疗前(A)12例，8.33±0.51，治疗后(B)4.79±0.48，正常人(C)6例，3.80±0.28，统计学处理后A∶C P<0.001，A∶B P<0.001，B∶C P<0.001。
, 百拇医药
3 讨论
为了进一步观察中医补肾生血方剂治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的临床疗效，我们又治疗了β珠蛋白生成障碍性贫血17例，同时对12例疗前疗后进行了免疫功能测定。其中16例临床上有稳定的疗效，临床症状改善，肝脾有一定程度的缩小，红细胞平均增加0.68(0.2～1.1)×1012/L，Hb平均增加16.7(10～23)g/L，网织红细胞平均增加0.12(0.02～0.18)，HbF平均增加0.1(0.02～0.33)。此组病例疗效和以前治疗效果相似，而且比较稳定。β珠蛋白生成障碍性贫血和其它遗传性疾病一样，至目前为止临床上仍无有效的治疗方法〔2，3〕。对重型β珠蛋白生成障碍性贫血临床上达到治愈和缓解是不可能的，文献〔1〕提出凡是经过治疗后输血量减少和血红蛋白增加为有效，第四届国际基因开关学术会议指出Hb增加和HbF上升为γ基因开启的临床重要指征，本组有效病例符合上述条件。
现代医学对β珠蛋白生成障碍性贫血的病因和发病机理已经清楚，它是由于β基因族的突变，使β类珠蛋白链合成受到抑制而造成的遗传性慢性溶血性贫血。中医认为肾阴虚为本病之因，肾为先天之本，肾气虚者，脾气必弱，肾虚致生血不足。补肾滋阴为治则之根本，兼治气血虚，采用补肾生血法治之。补肾生血方中有滋阴补肾药山茱萸、熟地黄，而太子参、黄芪为补气之要药，何首乌、当归等为中药补血之重要成分。
, 百拇医药
现代医学研究证明补肾生血方中的多种药物成分，对骨髓有刺激造血和保护作用，能使贫血动物红细胞数和血红蛋白含量增加，其中太子参能使骨髓DNA、RNA和蛋白质合成增加，促进骨髓细胞有丝分裂，方中其它成分具有抗氧化的作用，保护细胞膜，并能增加免疫机能。用中医传统的补肾生血药物治疗β珠蛋白生成障碍性贫血，诊断是根据现代医学诊断，并用动物实验，现代分子生物学基因分析和细胞CT扫描技术研究了其疗效机理。
从1991年开始中国中医研究院广安门医院对补肾生血药治β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效机理作了大量的研究工作，有专题论述。在已公开发表文章的内容有：①动物实验显示补肾生血药物促进阉割公鸡造血，被阉的公鸡服药后鸡冠生长速度明显增加，鸡冠充血，外观鲜红，服药60 d后Hb、RBC及网织红细胞明显增加，对照组则无变化，生物化学分析证明珠蛋白甲基化增加〔4〕。②当代先进的细胞CT分析技术表明，补肾生血药物保护原红细胞的结构和功能，经60CO照射小鼠原红细胞呈严重畸形，核内荧光物质凝集，断裂缺损，DNA黄色物质减弱分布不均。给小鼠灌药组，原红细胞结构完整，DNA、RNA分布均匀，DNA荧光密集，无断裂，细胞核光切面呈圆形〔5〕。③中药影响β珠蛋白基因的表达和调控，经中药治疗的患者的HbF相对百分比含量和血红蛋白中珠蛋白链增加，γ珠蛋白mRNA基因转录水平相应升高，显示中药促进γ珠蛋白转录和表达，诱导HbF合成，从而代尝了β珠蛋白缺陷〔6〕。本次免疫功能测定结果显示中医补肾生血药物对免疫功能有影响，病人外周血淋巴细胞总数，辅助T细胞(Th)、抑制T细胞(Ts)及Th/Ts比值，疗后有不同程度的提高。NK细胞治疗前后无明显变化。激光共聚焦扫描显微镜观察显示，治疗前病人淋巴细胞核增大，DNA凝集、破坏、分布不均匀，DNA、RNA荧光强度明显示减弱，流式细胞计测定的直方图分析CV值较大，与正常人比较有明显差别。治疗后病人的淋巴细胞核变小，DNA、RNA荧光强度增加，DNA分布均匀含量增加，CV值变小，接近正常人水平，表达直方图增强。■
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基金项目：本课题受国家自然科学基金(3927085)资助
参考文献：
[1]张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.49～58
[2]Weatherall D J,The thalassemia L N,Beatler E,et al.willian′s Hemaology 5th ed.New york:Me Graw-Hill Book,1995.581～611
[3]Cao A,Galanello R,Rosatelli M C,et al.Clinical experience of management of thalassemia:The sardinan experience.Seminars in Hematology,1996,33(1):66～71
, 百拇医药
[4]吴志奎，陈双厚，王荣新，等.中国神方丙治疗β珠蛋白生成障碍性贫血症的临床与机理研究.中药药理与临床，1994，7(5)：37～39
[5]吴志奎，姜葆华，黄有文，等.采用细胞CT分析技术研究补肾生血药保护骨髓作用的分子机理.中药药理与临床，1995，11(3)：21～23
[6]吴志奎，蔡辉国，王荣新，等.补肾生血方对β珠蛋白生成障碍性贫血基因水平的影响.中医杂志，1997，38(2)：91～93
收稿日期：1999-05-13
修稿日期：1999-09-22, 百拇医药
单位：黄有文(解放军第303医院 广西南宁，530021)；张新华(解放军第303医院 广西南宁，530021)；王荣新(解放军第303医院 广西南宁，530021)；蔡利群(解放军第303医院 广西南宁，530021)；吴志奎(中国中医研究广安门医院 北京，100053)；姜葆华(中国中医研究广安门医院 北京，100053)；李承军(中国中医研究广安门医院 北京，100053)
关键词：β珠蛋白生成障碍；血红蛋白/抗碱；免疫功能；T淋巴细胞/辅助
临床血液学杂志000202 摘 要：目的：为了进一步观察中医(补肾生血)治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效和对免疫功能的影响。从1998年10月～1999年1月再治疗β珠蛋白生成障碍性贫血17例。方法：中药方剂以生地、熟地、太子参和当归等12味中药组成，并辨证加味，煎服，每日1剂，分3次内服，3个月为1疗程。用流式细胞计和激光共聚焦扫描显微镜测定免疫功能。结果：16例症状改善，肝脾缩小，Hb增加(10～23)g/L，平均增加16.7 g/L，HbE增加0.02～0.33，平均增加0.1，未观察到副作用。疗后病人外周血淋巴细胞总数、辅助T细胞及抑制T细胞比值有提高，DNA排列整齐，分布均匀，含量较治疗前增加。结论：中医补肾生血治疗β珠蛋白生成障碍性贫血有比较稳定的疗效，免疫功能有改善。
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Clinical investigation of traditional Chinese Medince-Bushen Shengxue Treat β-Thalassemia and immune function examination
HUANG You-wen ZHANG Xin-hua WANG Rong-xin CAI Li-qun
(PLA 303rd hospital,Nanning 530021)
WU Zi-kuei JIANG Bao-hua LI Cheng-jun
(Guanganmen Hospital china Academy of TCM,Beijing 100053)
Abstract：Objective:In order to investigate the therapeutic effect of β-Thalassemia with Traditional Chinese Medieine (TCM)-Bushen shengxue we treated 17 cases of β-Thalassemia from october 1998 to January 1999.Methods:Presiption with of twelve kinds of Arillus Cormi,Radix Spatliolobi etc.A course were 3 months using flow cytmetry and laster fous scanning microsaopy to determinate the immune function.Results:16 cases were improued 1.The symptom ameliorated;2.The hepatosplenomegaly decreased;3.The hemoglobin significantly elevated (10～23)g/L,average 16.7 g/L,HbE increased 0.02～0.33,average 0.1;4.no side-effect was observed Lymphocyte count in peripheral blood,TH/TS ratio were increased;DNA arranged orderly distributed uniformity,content increased compared to those before therapy.Conclusions:TCM Bushen shengxue treating β-Thalassemia was effeitine.The imnune funition was impnoved.
, 百拇医药
Key words：β-Thalassemia Hemoglobin F Lmmune function Helper T lymphocytes▲
为了进一步观察补肾生血中药治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效，在原来治疗48例的基础上，1998年10月～1999年1月再治疗17例，并对免疫功能进行了观察，报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
1.1.1 一般资料：17例中，男12例，女5例，年龄平均11.3(2～26)岁，壮族11例，汉族6例，广西藉15人，广东藉2人。
1.1.2 症状和体征：自幼即有不同程度贫血，易患感染性疾患，珠蛋白生成障碍性贫血面貌、肝肿大者15例，在肋缘下可触及0.5～2.5 cm，平均1.8cm，脾肿大17例，在肋缘下1.5～12 cm，平均4.5 cm，质较硬。
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1.1.3 临床化验：RBC(1.71～4.5)×1012/L，平均3.3×1012/L，HbF平均68.5(42～90) g/L，网织红细胞平均0.074(0.02～0.18)，HbF平均0.41(0.13～0.84)，其中9例HbA2+HbE平均0.55(0.31～0.79)。
1.1.4 临床诊断：根据张之南主编《血液病诊断及疗效标准》〔1〕，符合重型β珠蛋白生成障碍性贫血8例，中间型9例，其中9例为β珠蛋白生成障碍性贫血复合血红蛋白E。
1.2 方法
1.2.1 免疫功能测定法：根据中国中医研究院广安门医院基础研究室运用和建立的方法，治疗前后静脉采血，用流式细胞计测定T细胞亚群、NK细胞、淋巴细胞DNA荧光强度。激光共聚焦扫描观察淋巴细胞DNA、RNA含量。
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1.2.2 中药方剂组成和给药方法：中药方剂：生地、熟地、山萸肉、龟板胶、阿胶、黄芪、首乌、枸杞及太子参等12味中药组成，成方基本固定，根据辨证施治的原则，个别病例略有增加，阴虚有热者加丹皮、地骨皮等，湿热瘀结，用茵陈蒿加减，伴瘀血者加赤芍、桃仁等，煎服，每日1剂，分3次口服，3个月为1个疗程。
1.2.3 疗效判定：根据文献〔1〕，凡是Hb增加或上升为有效，并参照第四届国际基因会议提出的凡HbF上升为临床有效。
1.2.4 疗效维持时间：疗程结束后随访检查RBC、Hb、HbF及网织红细胞，以月数计算。
2 结果
①有效病例，精神好，食欲增加，感染次数减少。②肝缩小者12例，范围0.5～1.5 cm，平均0.6 cm，脾缩小者14例，缩小0.5～1.5 cm，平均0.75 cm。③16例有效病例，治疗后红细胞、血红蛋白、网织红细胞及抗碱血红蛋白为：RBC平均增加0.68(0.1～1.1)×1012/L，Hb平均增加16.7(10～23)g/L，网织红细胞平均增加0.12(0.01～0.08)，抗碱血红蛋白平均增加0.1(0.02～0.33)。④未观察到明显的副作用。⑤疗效维持时间：治疗结束后逐月随访，疗效维持2个月的1例，4个月3例，6个月5例，8个月2例，维持1年者5例。⑥免疫功能测定结果见表1。
, 百拇医药
表1 中药治疗对外周血T淋巴细胞亚群的影响
T淋巴细胞亚群n数
疗前
疗后
P值
CD+3(%)
12
50.51±8.71
55.45±10.06
>0.05
, 百拇医药 CD+3/CD+4(Th)(%)
12
25.20±5.87
28.54±7.42
>0.05
CD+3/CD+3(Ts)(%)
12
18.93±4.01
20.82±4.64
>0.05
, 百拇医药
Th/Ts
12
1.38±0.45
1.43±0.46
>0.05
NK细胞(%)
12
24.6±10.63
20.34±8.89
>0.05
中药治疗前后外周血淋巴细胞变异系数(CV%)的变化为：治疗前(A)12例，8.33±0.51，治疗后(B)4.79±0.48，正常人(C)6例，3.80±0.28，统计学处理后A∶C P<0.001，A∶B P<0.001，B∶C P<0.001。
, 百拇医药
3 讨论
为了进一步观察中医补肾生血方剂治疗β珠蛋白生成障碍性贫血的临床疗效，我们又治疗了β珠蛋白生成障碍性贫血17例，同时对12例疗前疗后进行了免疫功能测定。其中16例临床上有稳定的疗效，临床症状改善，肝脾有一定程度的缩小，红细胞平均增加0.68(0.2～1.1)×1012/L，Hb平均增加16.7(10～23)g/L，网织红细胞平均增加0.12(0.02～0.18)，HbF平均增加0.1(0.02～0.33)。此组病例疗效和以前治疗效果相似，而且比较稳定。β珠蛋白生成障碍性贫血和其它遗传性疾病一样，至目前为止临床上仍无有效的治疗方法〔2，3〕。对重型β珠蛋白生成障碍性贫血临床上达到治愈和缓解是不可能的，文献〔1〕提出凡是经过治疗后输血量减少和血红蛋白增加为有效，第四届国际基因开关学术会议指出Hb增加和HbF上升为γ基因开启的临床重要指征，本组有效病例符合上述条件。
现代医学对β珠蛋白生成障碍性贫血的病因和发病机理已经清楚，它是由于β基因族的突变，使β类珠蛋白链合成受到抑制而造成的遗传性慢性溶血性贫血。中医认为肾阴虚为本病之因，肾为先天之本，肾气虚者，脾气必弱，肾虚致生血不足。补肾滋阴为治则之根本，兼治气血虚，采用补肾生血法治之。补肾生血方中有滋阴补肾药山茱萸、熟地黄，而太子参、黄芪为补气之要药，何首乌、当归等为中药补血之重要成分。
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现代医学研究证明补肾生血方中的多种药物成分，对骨髓有刺激造血和保护作用，能使贫血动物红细胞数和血红蛋白含量增加，其中太子参能使骨髓DNA、RNA和蛋白质合成增加，促进骨髓细胞有丝分裂，方中其它成分具有抗氧化的作用，保护细胞膜，并能增加免疫机能。用中医传统的补肾生血药物治疗β珠蛋白生成障碍性贫血，诊断是根据现代医学诊断，并用动物实验，现代分子生物学基因分析和细胞CT扫描技术研究了其疗效机理。
从1991年开始中国中医研究院广安门医院对补肾生血药治β珠蛋白生成障碍性贫血的疗效机理作了大量的研究工作，有专题论述。在已公开发表文章的内容有：①动物实验显示补肾生血药物促进阉割公鸡造血，被阉的公鸡服药后鸡冠生长速度明显增加，鸡冠充血，外观鲜红，服药60 d后Hb、RBC及网织红细胞明显增加，对照组则无变化，生物化学分析证明珠蛋白甲基化增加〔4〕。②当代先进的细胞CT分析技术表明，补肾生血药物保护原红细胞的结构和功能，经60CO照射小鼠原红细胞呈严重畸形，核内荧光物质凝集，断裂缺损，DNA黄色物质减弱分布不均。给小鼠灌药组，原红细胞结构完整，DNA、RNA分布均匀，DNA荧光密集，无断裂，细胞核光切面呈圆形〔5〕。③中药影响β珠蛋白基因的表达和调控，经中药治疗的患者的HbF相对百分比含量和血红蛋白中珠蛋白链增加，γ珠蛋白mRNA基因转录水平相应升高，显示中药促进γ珠蛋白转录和表达，诱导HbF合成，从而代尝了β珠蛋白缺陷〔6〕。本次免疫功能测定结果显示中医补肾生血药物对免疫功能有影响，病人外周血淋巴细胞总数，辅助T细胞(Th)、抑制T细胞(Ts)及Th/Ts比值，疗后有不同程度的提高。NK细胞治疗前后无明显变化。激光共聚焦扫描显微镜观察显示，治疗前病人淋巴细胞核增大，DNA凝集、破坏、分布不均匀，DNA、RNA荧光强度明显示减弱，流式细胞计测定的直方图分析CV值较大，与正常人比较有明显差别。治疗后病人的淋巴细胞核变小，DNA、RNA荧光强度增加，DNA分布均匀含量增加，CV值变小，接近正常人水平，表达直方图增强。■
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基金项目：本课题受国家自然科学基金(3927085)资助
参考文献：
[1]张之南，主编.血液病诊断及疗效标准.第2版.北京：科学出版社，1998.49～58
[2]Weatherall D J,The thalassemia L N,Beatler E,et al.willian′s Hemaology 5th ed.New york:Me Graw-Hill Book,1995.581～611
[3]Cao A,Galanello R,Rosatelli M C,et al.Clinical experience of management of thalassemia:The sardinan experience.Seminars in Hematology,1996,33(1):66～71
, 百拇医药
[4]吴志奎，陈双厚，王荣新，等.中国神方丙治疗β珠蛋白生成障碍性贫血症的临床与机理研究.中药药理与临床，1994，7(5)：37～39
[5]吴志奎，姜葆华，黄有文，等.采用细胞CT分析技术研究补肾生血药保护骨髓作用的分子机理.中药药理与临床，1995，11(3)：21～23
[6]吴志奎，蔡辉国，王荣新，等.补肾生血方对β珠蛋白生成障碍性贫血基因水平的影响.中医杂志，1997，38(2)：91～93
收稿日期：1999-05-13
修稿日期：1999-09-22, 百拇医药