原发性IgA肾炎与HLA-DQB1等位基因遗传多态性的研究*
http://www.100md.com
37c医学网
作者：许玲娣 范丽安 陈 楠 杨珏琴 姚芳娟
单位：许玲娣 范丽安 杨珏琴 姚芳娟(上海第二医科大学 上海市免疫学研究所，上海 200025)；陈 楠(上海瑞金医院肾脏科)
关键词：IgA肾病 PCR/SSO DQ基因 连锁不平衡
免疫学杂志990416摘 要 为了解被梅毒螺旋体感染后病人的细胞免疫功能的变异情况，对40例梅毒病人进行了T细胞亚群的检测。先用TRUST筛选出阳性者，以再行TP.PA确诊试验的阳性者为观察对象，与正常组进行比较，用t检验进行统计学处理。阳性组、Ⅱ组CD3、CD4无显著差异(P>0.05)，CD8显著高于对照组(P<0.01)，CD4/CD8比值显著低于对照组(P<0.01)。梅毒病人的细胞免疫功能受到不同程度的损伤，为临床诊断、治疗提供了依据。
, 百拇医药
中图号 R759.103
APPROACH OF T CELL SUBGROUP IN SERUM
OF SYPHILIS PATIENTS
Li Biqing，Ruan Guangping
(Research Institute of Field Surgery，Daping Hospital，The Third Military Medical University，Chongqing，400042)
Abstract To study cell immunity function of patients infected by teponemiasis.TRUST test and TP.PA test were used to obtain positive result in patients，then T cell subgroup of patients were compared with that of normal people.The results showed the difference of CD3、CD4 between positive group and normol group was not obvious(P>0.05).CD8 in patients was significantly higher than that of normal group(P<0.05)，and CD4/CD8 was remar-kably lower than that of normal group(P<0.01).The cell immunity function of syphilis patients was injured，which give basis to clinical diagnosis and cure.
, 百拇医药
Key words Treponemiasis，T cell subgroup
梅毒是传染性疾病，近年来发病率较高，治疗总是不彻底，且反复感染出现临床症状，这是否与免疫有关，梅毒病人的细胞免疫——T细胞亚群的数量、比值是否有变化，目前国内外报道甚少。我们对梅毒病人的外周静脉血T细胞亚群的特点进行了检测探讨，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 观察对象
1.1.1 梅毒组：1998年3月初至4月底我院的门诊、住院病人，经确诊试验为阳性者共40例。男性17例，女性23例，年龄范围20～66岁。平均年龄34.37±11.50。
1.1.2 对照组：健康献血员40例，男性20例，女性20例，年龄范围20～48岁。平均年龄29.4±38.06。
, 百拇医药
1.2 初筛试验和确诊试验
1.2.1 初筛试验：试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行试验，以检测血清或血浆中的反应素用，为非特异性反应。严格按说明书检测、判读。
1.2.2 确诊试验(TP.PA)：试剂盒由日本富士公司提供。利用纯化的致敏性梅毒螺旋体(Nichol株)抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清中梅毒螺旋体结合产生可见的凝集反应，具有高度特异性。检测方法、判读，严格按操作说明。
1.3 T细胞亚群的检测 试剂盒由军事医学科学院基础医学研究所提供。
1.3.1 主要试剂：鼠抗人T细胞亚群McAb(单克隆抗体)：抗CD3单抗，识别全部外周血成熟T细胞；抗CD4单抗，识别辅助/诱导(Tu/Ti)细胞；抗CD8单抗，识别T抑制/杀伤(Ts/Tc)细胞；羊抗鼠IgG二抗；APAAP复合物，碱性磷酸酶底物等。
, 百拇医药
1.3.2 操作方法：取肝素抗凝外周静脉血2～3ml，常规分离淋巴细胞、制片、干燥。固定液固定2min，加抗T细胞亚群McAb 10～15μl，加羊抗鼠IgG 10～15μl，加APAAP10～15μl，加碱性磷酸酶底物显色(以上每步间均需在湿盒内放置30min，均需用0.01mol pH7.2 PBS液洗3次)。低倍镜下观察，待细胞膜上出现明显红色标记物时，自来水冲洗终止显色，加苏木素复杂液1滴复染1min，自来水洗，甘油明胶封片。高倍镜下观察，细胞核呈蓝色，表面有红色标记物的细胞为阳性细胞，计数200个单核细胞，计算CD3、CD4、CD8阳性细胞百分率及CD4/CD8比值。
1.4 统计学处理 所有计量资料以均值±标准差(
±s)表示，并用t检验分析。
, 百拇医药 2 结果
2.1 梅毒组和对照组T细胞亚群的比较 结果见表1。
2.2 不同滴度的梅毒病人T细胞亚群的比较 结果见表2。
表1 梅毒组和对照组T细胞亚群的检测结果(±s)
Tab 1 Results of T cell subgroup in syphilis patients and controlgroup(±s) Group
n
T cell subgroup(%)
, 百拇医药
CD4/CD8
CD3
CD4
CD8
Syphilis patients group
40
64.17±11.75
37.55±11.89
34.83±9.30
1.16±0.42
Control group
, 百拇医药
40
67.95±9.96
36.83±10.70
27.70±9.35
1.46±0.57
P (compared with control)
>0.05
>0.05
>0.01
<0.01
表2 不同滴度的梅毒病人T细胞亚群的检测结果(±s)
, 百拇医药
Tab 2 Results of T cell subgroup in different titer syphilis patients(±s) Group
Titer
n
T cell subgroup(%)
CD4/CD8
CD3
CD4
CD8
, http://www.100md.com
Ⅰ
<1∶2
2
66.50±13.44
34.50±6.36
31.00±9.90
1.14±0.16
Ⅱ
1∶2～1∶4
8
64.13±3.31
40.13±7.74
, 百拇医药
31.88±4.88
1.46±0.39
Ⅲ
>1∶4
30
64.03±13.14
37.07±12.61
35.87±10.14**
1.09±0.41**△
Control
40
, 百拇医药 67.95±9.96
36.83±10.70
27.70±9.35
1.46±0.57
**P<0.01(compared with control)，**△P<0.05(compared with Ⅱ group)
3 讨论
3.1 T细胞亚群变化可以了解梅毒病人的细胞免疫状态 本文对经TP.PA试验确诊的40例梅毒病人进行了外周静脉血T细胞亚群的观察、统计。结果表明，与对照组比较，CD4、CD3无显著差异(P<0.05)，CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)。CD8增高提示抑制性T淋巴细胞显著增多，说明细胞免疫功能已有明显下降，且以免疫抑制现象和自身免疫监视能力下降尤为突出，CD4/CD8比值降低是疾病严重程度和预后不良的重要标志之一，也表明了T细胞亚群间的失衡。因此，我们认为梅毒病人的反复感染与机体免疫应答及免疫调节功能紊乱有关。
, 百拇医药
3.2 滴度对T细胞亚群变化的影响 为了解随滴度变化梅毒病人细胞免疫受损的程度，我们将梅毒组以TRUST试验的强弱及滴度再划分为3个组，各组再进行比较。与正常对照比较，Ⅱ组的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8均无显著差异(P<0.05)，Ⅲ组的CD3、CD4无显著差异(P<0.05)，CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)。Ⅲ组与Ⅱ组比较，Ⅲ组的CD4明显降低，CD8明显升高，但无统计学差异，CD4/CD8比值明显降低(P<0.05)。Ⅰ组例数较少(仅2例)，故不参与比较。多数学者认为滴度反映了梅毒螺旋体的感染程度，滴度越高感染时间越长，感染程度越严重。通过本文的研究显示，低滴度组(Ⅱ组)与对照间无显著差异，说明梅毒螺旋体早期感染的细胞免疫功能尚未受到损伤，细胞免疫水平尚属正常。随着疾病的发展，感染的加重，Ⅲ组的CD4较Ⅱ组降低，CD8较Ⅱ组升高，但尚无统计学差异。说明T淋巴细胞的辅助性功能下降，抑制性功能增强，使T淋巴细胞对梅毒螺旋体的免疫反应受到抑制。CD4/CD8明显降低(P<0.05)，表明调节网络失去平衡，引起免疫紊乱。Ⅲ组与正常对照组比较CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8显著降低(P<0.01)，已符合结论。因此，我们认为滴度越高感染程度越严重，感染时间越长，T细胞亚群的变化越明显。
, http://www.100md.com
3.3 T细胞亚群变化及反复感染的原因分析 病原体进入机体后，能迅速激活人体免疫系统，引起免疫应答，包括特异性和非特异性两大类，通常整个免疫应答的过程二者是无法截然分开的，其中起重要作用的是T细胞，作为免疫应答的调节枢扭多由CD4与CD8细胞数量及功能相互消长完成[1]。
CD4细胞是辅助性T细胞，能够协助B细胞分化抗体；CD8细胞是一种抑制性T细胞，能够抑制B淋巴细胞活性，抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖。两者的稳态维持着机体正常的免疫应答，当机体被梅毒螺旋体感染后，随感染的加剧，CD4细胞降低，CD8细胞增高，CD4/CD8比值下降，导致辅助性功能下降，抑制性功能上升，引起梅毒螺旋清除困难，且反复感染出现临床症状。
因此，本文认为治疗梅毒病人，尤其是反复感染、病程较长的病人，是否可以联合应用增强细胞免疫的药物，以便提高机体免疫，增强药物疗效，迅速治愈梅毒病人，其免疫疗法的效果有待于进一步的研究。
第一作者：女，49岁，本科，副主任技师
参考文献
1 杨锡强.细胞免疫功能测定的临床意义.中国实用儿科杂志，1993，5(8)：271
(1999-01-31收稿；1999-05-12修回), http://www.100md.com
单位：许玲娣 范丽安 杨珏琴 姚芳娟(上海第二医科大学 上海市免疫学研究所，上海 200025)；陈 楠(上海瑞金医院肾脏科)
关键词：IgA肾病 PCR/SSO DQ基因 连锁不平衡
免疫学杂志990416摘 要 为了解被梅毒螺旋体感染后病人的细胞免疫功能的变异情况，对40例梅毒病人进行了T细胞亚群的检测。先用TRUST筛选出阳性者，以再行TP.PA确诊试验的阳性者为观察对象，与正常组进行比较，用t检验进行统计学处理。阳性组、Ⅱ组CD3、CD4无显著差异(P>0.05)，CD8显著高于对照组(P<0.01)，CD4/CD8比值显著低于对照组(P<0.01)。梅毒病人的细胞免疫功能受到不同程度的损伤，为临床诊断、治疗提供了依据。
, 百拇医药
中图号 R759.103
APPROACH OF T CELL SUBGROUP IN SERUM
OF SYPHILIS PATIENTS
Li Biqing，Ruan Guangping
(Research Institute of Field Surgery，Daping Hospital，The Third Military Medical University，Chongqing，400042)
Abstract To study cell immunity function of patients infected by teponemiasis.TRUST test and TP.PA test were used to obtain positive result in patients，then T cell subgroup of patients were compared with that of normal people.The results showed the difference of CD3、CD4 between positive group and normol group was not obvious(P>0.05).CD8 in patients was significantly higher than that of normal group(P<0.05)，and CD4/CD8 was remar-kably lower than that of normal group(P<0.01).The cell immunity function of syphilis patients was injured，which give basis to clinical diagnosis and cure.
, 百拇医药
Key words Treponemiasis，T cell subgroup
梅毒是传染性疾病，近年来发病率较高，治疗总是不彻底，且反复感染出现临床症状，这是否与免疫有关，梅毒病人的细胞免疫——T细胞亚群的数量、比值是否有变化，目前国内外报道甚少。我们对梅毒病人的外周静脉血T细胞亚群的特点进行了检测探讨，现将结果报道如下。
1 材料与方法
1.1 观察对象
1.1.1 梅毒组：1998年3月初至4月底我院的门诊、住院病人，经确诊试验为阳性者共40例。男性17例，女性23例，年龄范围20～66岁。平均年龄34.37±11.50。
1.1.2 对照组：健康献血员40例，男性20例，女性20例，年龄范围20～48岁。平均年龄29.4±38.06。
, 百拇医药
1.2 初筛试验和确诊试验
1.2.1 初筛试验：试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行试验，以检测血清或血浆中的反应素用，为非特异性反应。严格按说明书检测、判读。
1.2.2 确诊试验(TP.PA)：试剂盒由日本富士公司提供。利用纯化的致敏性梅毒螺旋体(Nichol株)抗原包被明胶颗粒，此致敏的明胶颗粒将与人血清中梅毒螺旋体结合产生可见的凝集反应，具有高度特异性。检测方法、判读，严格按操作说明。
1.3 T细胞亚群的检测 试剂盒由军事医学科学院基础医学研究所提供。
1.3.1 主要试剂：鼠抗人T细胞亚群McAb(单克隆抗体)：抗CD3单抗，识别全部外周血成熟T细胞；抗CD4单抗，识别辅助/诱导(Tu/Ti)细胞；抗CD8单抗，识别T抑制/杀伤(Ts/Tc)细胞；羊抗鼠IgG二抗；APAAP复合物，碱性磷酸酶底物等。
, 百拇医药
1.3.2 操作方法：取肝素抗凝外周静脉血2～3ml，常规分离淋巴细胞、制片、干燥。固定液固定2min，加抗T细胞亚群McAb 10～15μl，加羊抗鼠IgG 10～15μl，加APAAP10～15μl，加碱性磷酸酶底物显色(以上每步间均需在湿盒内放置30min，均需用0.01mol pH7.2 PBS液洗3次)。低倍镜下观察，待细胞膜上出现明显红色标记物时，自来水冲洗终止显色，加苏木素复杂液1滴复染1min，自来水洗，甘油明胶封片。高倍镜下观察，细胞核呈蓝色，表面有红色标记物的细胞为阳性细胞，计数200个单核细胞，计算CD3、CD4、CD8阳性细胞百分率及CD4/CD8比值。
1.4 统计学处理 所有计量资料以均值±标准差(
±s)表示，并用t检验分析。, 百拇医药 2 结果
2.1 梅毒组和对照组T细胞亚群的比较 结果见表1。
2.2 不同滴度的梅毒病人T细胞亚群的比较 结果见表2。
表1 梅毒组和对照组T细胞亚群的检测结果(
±s)Tab 1 Results of T cell subgroup in syphilis patients and controlgroup(
±s) Groupn
T cell subgroup(%)
, 百拇医药
CD4/CD8
CD3
CD4
CD8
Syphilis patients group
40
64.17±11.75
37.55±11.89
34.83±9.30
1.16±0.42
Control group
, 百拇医药
40
67.95±9.96
36.83±10.70
27.70±9.35
1.46±0.57
P (compared with control)
>0.05
>0.05
>0.01
<0.01
表2 不同滴度的梅毒病人T细胞亚群的检测结果(
±s), 百拇医药
Tab 2 Results of T cell subgroup in different titer syphilis patients(
±s) GroupTiter
n
T cell subgroup(%)
CD4/CD8
CD3
CD4
CD8
, http://www.100md.com
Ⅰ
<1∶2
2
66.50±13.44
34.50±6.36
31.00±9.90
1.14±0.16
Ⅱ
1∶2～1∶4
8
64.13±3.31
40.13±7.74
, 百拇医药
31.88±4.88
1.46±0.39
Ⅲ
>1∶4
30
64.03±13.14
37.07±12.61
35.87±10.14**
1.09±0.41**△
Control
40
, 百拇医药 67.95±9.96
36.83±10.70
27.70±9.35
1.46±0.57
**P<0.01(compared with control)，**△P<0.05(compared with Ⅱ group)
3 讨论
3.1 T细胞亚群变化可以了解梅毒病人的细胞免疫状态 本文对经TP.PA试验确诊的40例梅毒病人进行了外周静脉血T细胞亚群的观察、统计。结果表明，与对照组比较，CD4、CD3无显著差异(P<0.05)，CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)。CD8增高提示抑制性T淋巴细胞显著增多，说明细胞免疫功能已有明显下降，且以免疫抑制现象和自身免疫监视能力下降尤为突出，CD4/CD8比值降低是疾病严重程度和预后不良的重要标志之一，也表明了T细胞亚群间的失衡。因此，我们认为梅毒病人的反复感染与机体免疫应答及免疫调节功能紊乱有关。
, 百拇医药
3.2 滴度对T细胞亚群变化的影响 为了解随滴度变化梅毒病人细胞免疫受损的程度，我们将梅毒组以TRUST试验的强弱及滴度再划分为3个组，各组再进行比较。与正常对照比较，Ⅱ组的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8均无显著差异(P<0.05)，Ⅲ组的CD3、CD4无显著差异(P<0.05)，CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8比值显著降低(P<0.01)。Ⅲ组与Ⅱ组比较，Ⅲ组的CD4明显降低，CD8明显升高，但无统计学差异，CD4/CD8比值明显降低(P<0.05)。Ⅰ组例数较少(仅2例)，故不参与比较。多数学者认为滴度反映了梅毒螺旋体的感染程度，滴度越高感染时间越长，感染程度越严重。通过本文的研究显示，低滴度组(Ⅱ组)与对照间无显著差异，说明梅毒螺旋体早期感染的细胞免疫功能尚未受到损伤，细胞免疫水平尚属正常。随着疾病的发展，感染的加重，Ⅲ组的CD4较Ⅱ组降低，CD8较Ⅱ组升高，但尚无统计学差异。说明T淋巴细胞的辅助性功能下降，抑制性功能增强，使T淋巴细胞对梅毒螺旋体的免疫反应受到抑制。CD4/CD8明显降低(P<0.05)，表明调节网络失去平衡，引起免疫紊乱。Ⅲ组与正常对照组比较CD8显著升高(P<0.01)，CD4/CD8显著降低(P<0.01)，已符合结论。因此，我们认为滴度越高感染程度越严重，感染时间越长，T细胞亚群的变化越明显。
, http://www.100md.com
3.3 T细胞亚群变化及反复感染的原因分析 病原体进入机体后，能迅速激活人体免疫系统，引起免疫应答，包括特异性和非特异性两大类，通常整个免疫应答的过程二者是无法截然分开的，其中起重要作用的是T细胞，作为免疫应答的调节枢扭多由CD4与CD8细胞数量及功能相互消长完成[1]。
CD4细胞是辅助性T细胞，能够协助B细胞分化抗体；CD8细胞是一种抑制性T细胞，能够抑制B淋巴细胞活性，抑制抗体的合成、分泌及T细胞的增殖。两者的稳态维持着机体正常的免疫应答，当机体被梅毒螺旋体感染后，随感染的加剧，CD4细胞降低，CD8细胞增高，CD4/CD8比值下降，导致辅助性功能下降，抑制性功能上升，引起梅毒螺旋清除困难，且反复感染出现临床症状。
因此，本文认为治疗梅毒病人，尤其是反复感染、病程较长的病人，是否可以联合应用增强细胞免疫的药物，以便提高机体免疫，增强药物疗效，迅速治愈梅毒病人，其免疫疗法的效果有待于进一步的研究。
第一作者：女，49岁，本科，副主任技师
参考文献
1 杨锡强.细胞免疫功能测定的临床意义.中国实用儿科杂志，1993，5(8)：271
(1999-01-31收稿；1999-05-12修回), http://www.100md.com