大鼠肺内动脉平滑肌细胞分离及穿孔膜片钳记录
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作者：洪志刚 王迪浔
单位：同济医科大学卫生部呼吸疾病重点实验室病理生理室，湖北 武汉 430080
关键词：
中国病理生理杂志0010328
目的：肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系是近年研究热点，改变这些钾离子通道活性能直接影响血管张力。缺氧可阻断延迟整流性钾通道或/和钙离子激活性钾通道，引起肺动脉平滑肌细胞收缩，使肺动脉压升高。目前，国内有关肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系的研究还很初浅，主要与肺动脉平滑肌细胞的急性分离以及膜片钳实验时细胞封接、破膜十分困难有关。大鼠肺内动脉平滑肌细胞电生理研究尚无报道，原因与其细胞分离困难更大有关。方法和结果：利用胶原酶、木瓜蛋白酶酶解消化的方法，成功地急性分离出大鼠肺内动脉平滑肌细胞，发现分离的细胞具有较高的成活率，呈舒展长梭形，边界清晰、有完整的胞膜、胞浆均匀，高倍镜下可见清晰的细胞核。细胞对苯肾上腺素有剂量依耐性收缩反应，免疫组化显示胞浆内表达细丝状的平滑肌α-actin。分离的细胞较易封接，用二性霉素B较易穿孔、破膜并记录到全细胞钾电流。结论：大鼠肺内动脉平滑肌细胞急性分离及全细胞穿孔膜片钳方法的建立，为HPV的研究提供了极其重要的实验方法。, http://www.100md.com
单位：同济医科大学卫生部呼吸疾病重点实验室病理生理室，湖北 武汉 430080
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中国病理生理杂志0010328
目的：肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系是近年研究热点，改变这些钾离子通道活性能直接影响血管张力。缺氧可阻断延迟整流性钾通道或/和钙离子激活性钾通道，引起肺动脉平滑肌细胞收缩，使肺动脉压升高。目前，国内有关肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系的研究还很初浅，主要与肺动脉平滑肌细胞的急性分离以及膜片钳实验时细胞封接、破膜十分困难有关。大鼠肺内动脉平滑肌细胞电生理研究尚无报道，原因与其细胞分离困难更大有关。方法和结果：利用胶原酶、木瓜蛋白酶酶解消化的方法，成功地急性分离出大鼠肺内动脉平滑肌细胞，发现分离的细胞具有较高的成活率，呈舒展长梭形，边界清晰、有完整的胞膜、胞浆均匀，高倍镜下可见清晰的细胞核。细胞对苯肾上腺素有剂量依耐性收缩反应，免疫组化显示胞浆内表达细丝状的平滑肌α-actin。分离的细胞较易封接，用二性霉素B较易穿孔、破膜并记录到全细胞钾电流。结论：大鼠肺内动脉平滑肌细胞急性分离及全细胞穿孔膜片钳方法的建立，为HPV的研究提供了极其重要的实验方法。, http://www.100md.com