电化学发光免疫分析法测定TSH、FT3、FT4的临床应用
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作者：张允平 单汉青 徐龙宝 邓民斌
单位：江苏省常州市第二人民医院内分泌科 常州213003
关键词：
标记免疫分析与临床000219 电化学发光免疫分析法(electro-chemiluminescence immunoassay, ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫分析法之后的新一代标记免疫测定技术， 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物[1]。它包括了电化学和化学发光两个过程。 整个测定过程全自动控制， 反应时间短， 15～30分钟即可出结果。该法灵敏度高，检测下限可达1pmol/L。
我院从1997年7月进口了德国宝灵曼公司的ECL1010仪器， 用该公司提供的试剂盒测TSH、FT3、FT4，共测定4096例次， 其批间变异系数分别为3.6%，2.8%,2.4%。现将应用情况总结报道如下。
, 百拇医药
材料和方法
(1)正常人22名， 其中男6例， 女16例， 平均年龄39岁。
(2)用IRMA和ECLI两种方法同时测TSH、FT3、FT4。IRMA试剂盒由美国Diasorin公司提供。
结果
(1)用IRMA和ECLI两种方法同时测定52例甲状腺患者的TSH、FT3、FT4，其结果见表1。
表1 ECLI法与IRMA法测定甲状腺激素的结果比较 测定方法
FT3(pmol/L)
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FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
IRMA
10.28±6.36
36.91±17.65
0.239±0.31
ECLI
11.28±6.95
39.58±21.06
0.14±0.31
注： 两种测定方法相关系数： FT3，0.94;FT4，0.879;TSH,0.926
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(2)22名正常人测定结果：FT4 18.43±2.39pmol/L, FT3 4.62±0.82pmol/L， TSH 1.63±1.01mIU/L。
(3)ECLI法临床应用实例如下：
例1 中老年人(48～80岁)患快速房颤而被疑诊为甲亢者15人， 用ECLI法测定甲状腺功能后， 其中6例明确诊断为甲亢。
例2 甲亢伴肝功损害而被误诊者5例， 甲、乙、丙、丁、戊肝炎抗原、抗体均为(-)， 用ECLI法测定甲状腺功能后立即明确诊断为甲亢。其测定结果见表2。表2 5例甲亢伴肝功能损害者测定结果 病例
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
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TSH(mIU/L)
SGPT
SGOT
甲状腺肿
心率
薛某女26岁
54.6
>100
>0.005
254
87
Ⅱ°
120
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陆某男39岁
59.15
35.33
0.02
261
78
Ⅱ°
103
戴某男42岁
19.86
87.86
0.031
102
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67
Ⅰ°
120
何某男48岁
81.6
>100
0.05
245
82
Ⅰ°
120
汤某女40岁
9.2
, 百拇医药
34.68
0.005
287
195
Ⅰ°
117
例3 徐某， 女，53岁， 右眼突出1个月， 甲状腺Ⅰ°肿大。经测定其结果是： TSH 0.12mIU/L, FT3 5.37pmol/L, FT4 18.26 pmol/L。1个月后复查，结果是： TSH 0.08mIU/L, FT3 21.53pmol/L, FT4 58.24pmol/L。据此明确诊断其右眼为Graves眼病。
例4 姜某，女，36岁，左眼突出1个月有余，甲状腺Ⅰ°肿大。经测定其结果是：TSH 0.01mIU/L,FT3 5.95pmol/L, FT4 20.18pmol/L, TRH试验30分、60分、120分、180分TSH均小于0.03mIU/L。诊断为Graves眼病。
, 百拇医药
例5 Graves病患者用抗甲状腺药物治疗8周或以上而甲状腺功能获得控制的76例中， FT3、FT4 55例正常； 12例仍高于正常； 9例低于正常但TSH高于正常。将其列入表3。表3 Graves患者服抗甲状腺药物8周或以上的甲状腺激素水平变化
例数
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
已正常
55
5.26±1.32
, 百拇医药 15.54±3.07
-
高于正常
12
9.85±2.07
24.62±7.69
-
低于正常
9
4.65±1.02
9.62±2.85
15.86±3.64
例6 17例甲减患者长期用L-T4替代，9例正常量，4例过量，4例剂量不足，甲状腺激素测定结果列入表4。表4 17例甲减患者长期用L-T4替代后甲状腺激素水平变化
, 百拇医药
例数
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
正常
9
5.62±1.46
18.98±3.73
3.29±2.07
低于正常
4
4.51±1.79
, 百拇医药
13.77±3.55
14.67±5.39
高于正常
4
6.81±2.15
26.69±8.26
0.089±0.009
讨论
ECLI技术是90年代发展起来的标记免疫技术[1]。三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+是ECLI的标记分子， 但只有与抗体或抗原结合成复合物以后这种发光反应才具有特异性。ECLI的另一个重要试剂是TPA， 它如同酶免疫测定中的底物， 配入缓冲液中， 是ECLI反应中的电子供体。 ECLI测定TSH、FT3、FT4的双抗体夹心法检测抗原反应步骤如下： [Ru(bpy)3]2+标记的抗体、微球固相抗体与待测样品共同温育一段时间后， 形成[Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-微球复合体。 然后用蠕动泵将反应液吸入流动室， 在这里磁样微球被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。 紧接着用蠕动泵加入含TPA的缓冲液， 同时给电极加电压， 启动ECL反应光电倍增管检测光子强度。 光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系。 据此可测出待测抗原的含量。 整个过程全自动化封闭运行， 无人为操作误差。 表1示出IRMA法与ECLI法之间的相关系数为： FT3，0.941;FT4,0.879;TSH 0.926，这说明两种方法相关性极好， ECLI法结果准确。 由于ECLI法能快速出结果， 除了典型的甲亢或甲减能及时得到诊断外， 还对于某些以快速房颤、纳差肝功能异常、低钾麻痹等症状为首诊的主诉者， 只要医生怀疑可能患有甲亢， ECLI法可帮助医生立即作出鉴别诊断， 以免误治。 由于ECLI法是电化学发光和免疫测定相结合的产物， TSH的测定下限可达0.005mIU/L， 比RIA法更灵敏。 对可疑患有甲亢者作FT3、FT4和TSH基础值测定后即可作出诊断[3]。对FT3、FT4正常， TSH很低的患者要考虑亚临床甲亢， 可临床随访或加做T3抑制试验或TRH兴奋试验； 低TSH值对FT3、FT4正常的Graves眼病诊断很有价值， 如例4。 对于接受抗甲状腺药物治疗的甲亢患者或接受L-T4替代治疗的甲减患者， TSH对治疗中的甲状腺功能评价很重要。 有报道长期使用左旋甲状腺素所致的TSH水平降低可对骨量和心脏有不良影响[3]。而甲亢患者若FT3、FT4值虽然在正常范围， 但TSH持续低于正常则表示药物剂量仍然不足。 从表3、表4结果看出 ， 临床上按症状、心率来判断甲状腺功能与实际测得结果有较大距离。 IRMA法测TSH、FT3、FT4需3天后出结果， 而ECLI法仅半小时后出结果， 临床医生用ECLI法能立即获得结果以调整药物剂量。综上所述， ECLI法测甲状腺功能是一项快速、准确、经济的检测方法， 值得推广应用。
, 百拇医药
参考文献
1，郑佐娅， 陶以训.临床检验信息，1998；5(1)：10～12
2，Leland J K et al. Electrogenerated Chemiluminescence anoxidative reduction type ECL reaction sequence using triproly amine. J Electrochem Soc, 1990;137 (10):3127
3，姬秋和.促甲状腺激素测定方法的进展及其在评价甲状腺功能中的作用.国外医学：内分泌分册， 1996；16(4)：171～174
(1999-05-14收稿 1999-09-03修回), http://www.100md.com
单位：江苏省常州市第二人民医院内分泌科 常州213003
关键词：
标记免疫分析与临床000219 电化学发光免疫分析法(electro-chemiluminescence immunoassay, ECLI)是继放射免疫、酶免疫、荧光免疫、化学发光免疫分析法之后的新一代标记免疫测定技术， 是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物[1]。它包括了电化学和化学发光两个过程。 整个测定过程全自动控制， 反应时间短， 15～30分钟即可出结果。该法灵敏度高，检测下限可达1pmol/L。
我院从1997年7月进口了德国宝灵曼公司的ECL1010仪器， 用该公司提供的试剂盒测TSH、FT3、FT4，共测定4096例次， 其批间变异系数分别为3.6%，2.8%,2.4%。现将应用情况总结报道如下。
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材料和方法
(1)正常人22名， 其中男6例， 女16例， 平均年龄39岁。
(2)用IRMA和ECLI两种方法同时测TSH、FT3、FT4。IRMA试剂盒由美国Diasorin公司提供。
结果
(1)用IRMA和ECLI两种方法同时测定52例甲状腺患者的TSH、FT3、FT4，其结果见表1。
表1 ECLI法与IRMA法测定甲状腺激素的结果比较 测定方法
FT3(pmol/L)
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FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
IRMA
10.28±6.36
36.91±17.65
0.239±0.31
ECLI
11.28±6.95
39.58±21.06
0.14±0.31
注： 两种测定方法相关系数： FT3，0.94;FT4，0.879;TSH,0.926
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(2)22名正常人测定结果：FT4 18.43±2.39pmol/L, FT3 4.62±0.82pmol/L， TSH 1.63±1.01mIU/L。
(3)ECLI法临床应用实例如下：
例1 中老年人(48～80岁)患快速房颤而被疑诊为甲亢者15人， 用ECLI法测定甲状腺功能后， 其中6例明确诊断为甲亢。
例2 甲亢伴肝功损害而被误诊者5例， 甲、乙、丙、丁、戊肝炎抗原、抗体均为(-)， 用ECLI法测定甲状腺功能后立即明确诊断为甲亢。其测定结果见表2。表2 5例甲亢伴肝功能损害者测定结果 病例
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
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TSH(mIU/L)
SGPT
SGOT
甲状腺肿
心率
薛某女26岁
54.6
>100
>0.005
254
87
Ⅱ°
120
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陆某男39岁
59.15
35.33
0.02
261
78
Ⅱ°
103
戴某男42岁
19.86
87.86
0.031
102
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67
Ⅰ°
120
何某男48岁
81.6
>100
0.05
245
82
Ⅰ°
120
汤某女40岁
9.2
, 百拇医药
34.68
0.005
287
195
Ⅰ°
117
例3 徐某， 女，53岁， 右眼突出1个月， 甲状腺Ⅰ°肿大。经测定其结果是： TSH 0.12mIU/L, FT3 5.37pmol/L, FT4 18.26 pmol/L。1个月后复查，结果是： TSH 0.08mIU/L, FT3 21.53pmol/L, FT4 58.24pmol/L。据此明确诊断其右眼为Graves眼病。
例4 姜某，女，36岁，左眼突出1个月有余，甲状腺Ⅰ°肿大。经测定其结果是：TSH 0.01mIU/L,FT3 5.95pmol/L, FT4 20.18pmol/L, TRH试验30分、60分、120分、180分TSH均小于0.03mIU/L。诊断为Graves眼病。
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例5 Graves病患者用抗甲状腺药物治疗8周或以上而甲状腺功能获得控制的76例中， FT3、FT4 55例正常； 12例仍高于正常； 9例低于正常但TSH高于正常。将其列入表3。表3 Graves患者服抗甲状腺药物8周或以上的甲状腺激素水平变化
例数
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
已正常
55
5.26±1.32
, 百拇医药 15.54±3.07
-
高于正常
12
9.85±2.07
24.62±7.69
-
低于正常
9
4.65±1.02
9.62±2.85
15.86±3.64
例6 17例甲减患者长期用L-T4替代，9例正常量，4例过量，4例剂量不足，甲状腺激素测定结果列入表4。表4 17例甲减患者长期用L-T4替代后甲状腺激素水平变化
, 百拇医药
例数
FT3(pmol/L)
FT4(pmol/L)
TSH(mIU/L)
正常
9
5.62±1.46
18.98±3.73
3.29±2.07
低于正常
4
4.51±1.79
, 百拇医药
13.77±3.55
14.67±5.39
高于正常
4
6.81±2.15
26.69±8.26
0.089±0.009
讨论
ECLI技术是90年代发展起来的标记免疫技术[1]。三氯联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+是ECLI的标记分子， 但只有与抗体或抗原结合成复合物以后这种发光反应才具有特异性。ECLI的另一个重要试剂是TPA， 它如同酶免疫测定中的底物， 配入缓冲液中， 是ECLI反应中的电子供体。 ECLI测定TSH、FT3、FT4的双抗体夹心法检测抗原反应步骤如下： [Ru(bpy)3]2+标记的抗体、微球固相抗体与待测样品共同温育一段时间后， 形成[Ru(bpy)3]2+-抗体-抗原-抗体-微球复合体。 然后用蠕动泵将反应液吸入流动室， 在这里磁样微球被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。 紧接着用蠕动泵加入含TPA的缓冲液， 同时给电极加电压， 启动ECL反应光电倍增管检测光子强度。 光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系。 据此可测出待测抗原的含量。 整个过程全自动化封闭运行， 无人为操作误差。 表1示出IRMA法与ECLI法之间的相关系数为： FT3，0.941;FT4,0.879;TSH 0.926，这说明两种方法相关性极好， ECLI法结果准确。 由于ECLI法能快速出结果， 除了典型的甲亢或甲减能及时得到诊断外， 还对于某些以快速房颤、纳差肝功能异常、低钾麻痹等症状为首诊的主诉者， 只要医生怀疑可能患有甲亢， ECLI法可帮助医生立即作出鉴别诊断， 以免误治。 由于ECLI法是电化学发光和免疫测定相结合的产物， TSH的测定下限可达0.005mIU/L， 比RIA法更灵敏。 对可疑患有甲亢者作FT3、FT4和TSH基础值测定后即可作出诊断[3]。对FT3、FT4正常， TSH很低的患者要考虑亚临床甲亢， 可临床随访或加做T3抑制试验或TRH兴奋试验； 低TSH值对FT3、FT4正常的Graves眼病诊断很有价值， 如例4。 对于接受抗甲状腺药物治疗的甲亢患者或接受L-T4替代治疗的甲减患者， TSH对治疗中的甲状腺功能评价很重要。 有报道长期使用左旋甲状腺素所致的TSH水平降低可对骨量和心脏有不良影响[3]。而甲亢患者若FT3、FT4值虽然在正常范围， 但TSH持续低于正常则表示药物剂量仍然不足。 从表3、表4结果看出 ， 临床上按症状、心率来判断甲状腺功能与实际测得结果有较大距离。 IRMA法测TSH、FT3、FT4需3天后出结果， 而ECLI法仅半小时后出结果， 临床医生用ECLI法能立即获得结果以调整药物剂量。综上所述， ECLI法测甲状腺功能是一项快速、准确、经济的检测方法， 值得推广应用。
, 百拇医药
参考文献
1，郑佐娅， 陶以训.临床检验信息，1998；5(1)：10～12
2，Leland J K et al. Electrogenerated Chemiluminescence anoxidative reduction type ECL reaction sequence using triproly amine. J Electrochem Soc, 1990;137 (10):3127
3，姬秋和.促甲状腺激素测定方法的进展及其在评价甲状腺功能中的作用.国外医学：内分泌分册， 1996；16(4)：171～174
(1999-05-14收稿 1999-09-03修回), http://www.100md.com