双波长薄层扫描法测定小儿退热贴中栀子甙含量
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作者：李其兰 卢喜珍
单位：李其兰(湖北中医学院附属医院中药研究室 430061)；卢喜珍(湖北中医学院中药系)
关键词：小儿退热贴；栀子甙；提取工艺；双波长薄层扫描法
湖北中医学院学报000127 摘 要：用双波长薄层扫描法对小儿退热贴中栀子甙进行含量测定。加样回收率为98.29%，r=0.9997，RSD=0.56%。本法可控制小儿退热贴质量。
中图分类号：R284.2 文献标识码：B 文章编号：1008-987X(2000)01-0048-02
Determination of Gardenoside Content in Xiaoer Tuire
Tie by Double-wavelength TLCS Method
, 百拇医药
Li Qilan
(The Lab of Chinese materia Medica of Affiliated Hospital of Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430061)
Lu Xizhen
(The Department of Chinese Materia Medica of Hubei College of Traditional Chinese Medicine)
Abstract：Using double-wavelength TLCS method to process content measurement of gardenoside in xiaoer tuire tie.The rate of adding sample recovery is 98.29%，r=0.9997，RSD=0.56%.This method can control the quality of xiaoer tuire tie.
, 百拇医药
Key words：Xiaoer tuire tie Gardenoside Extraction technology Double-wavelength TLCS method
小儿退热贴由栀子、柴胡等中药精制而成，经多年临床应用，疗效良好。栀子具有清热解毒等功效，而栀子甙是其主要有效成分。笔者用双波长薄层扫描法对小儿退热贴中栀子甙的含量进行了测定，作为控制其质量的方法，现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器(1)CS-9000型薄层扫描仪(岛津，日本)；(2)365nm紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂)；(3)LINOMARN自动点样器(CAMAG，瑞士)。
1.2 试剂 硅胶G(AR级，青岛海洋化工厂产)，其他试剂均为AR级，栀子甙(中国药品生物制品检定所提供)。
, 百拇医药
2 栀子甙的含量测定方法
采用双波长薄层扫描[1]。
2.1 层析条件 吸附剂为硅胶G(60型)，CMC-Na的浓度为0.5%，薄层板为20cm×20cm，厚为0.5mm，110°C活化0.5h。置干燥器中备用，展开剂为氯仿-甲醇-浓氨水(8∶2∶0.3)，展距约12cm，取出晾干，将全板浸入硫酸乙醇溶液中，迅速取出吹干，于110°C烘5分钟，显色，见一紫红色斑点，见图1。
图 1
2.2 扫描条件 双波长反射法锯齿扫描，背景校正：ON，Sx=3，λS=510nm，λR=600nm。
, 百拇医药 2.3 标准品的制备 精密称取栀子甙标准品，用甲醇定容，制定成1.05mg/ml溶液。
2.4 供试品溶液制备 精密吸取制备好的样品溶液1ml，再加甲醇定容到10ml，摇匀即为供试品溶液。
2.5 阴性对照液制备 制备同样品液，在提取过程中不加栀子，精密吸取已制备好的阴性液1ml，加5ml水，再加甲醇定容到10ml，摇匀即为阴性对照液。
2.6 标准曲线制备 分别吸取标准品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL点样，依上述层析条件展开，测定标准品量为横坐标，扫描积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=271.7595+2788.740X
Y=0.9997，栀子甙的量在1-5μL范围内含量与峰面积呈线性关系。(见图2)
, 百拇医药
图 2
2.7 样品的含量测定 精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液2μl、5μl间隔点样于同一硅胶G薄层板上，按标准曲线项下操作，测其积分值，用外标两点法计算含量。测试结果如图3、图4。
图 3
图 4
2.8 精密度实验 同一斑点依法测定5次，平均值为X=5138.67，RSD=1.4%，表明仪器精密度良好。
2.9 扫描重现性实验 取栀子甙标准品，在同一板上点5个量相同的点，测定峰面积为5081.344，RSD%=2.1%，表明扫描重现性好。
, 百拇医药
2.10 稳定性实验 同一板上同一斑点，每小时测1次，4小时内峰面积稳定，24小时后测定，峰面积同样稳定。
2.11 加样回收率实验 分别精密量取已知栀子甙含量的样品5分，每份再精密加入标准品溶液1ml(C=1.05mg/ml)，定容到2ml，作为供试品溶液，点于同一薄层板上，展开，测定其积分值。用外标两点法计算栀子甙含量，按回收率计算方法计算。结果如下表：
表1 加样回收率测定
样品含量
测得量
(mg)
回收率
(n=3)
, 百拇医药
RSD(%)
1
0.4986
0.5088
102.04
98.286
2.56%
2
0.4753
0.4513
95.01
3
0.4781
, 百拇医药
0.4680
98.47
4
0.4855
0.4790
98.67
5
0.4753
0.4683
98.52
3 讨论
从以上实验看出，测得的回收率差异很小，说明此扫描法稳定、可靠。
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背景校正：除去背景干扰，在扫描过程中，发现栀子甙所在斑点位置后有一小斑，经扫描，在510nm到600nm之间无吸收，不会影响测定。
在选择展开剂展开时，发现阴性对照品在栀子甙所在斑点时，应位置前后各有一斑点，经多次筛选展开剂，认为碱性展开系统较其它展开系统更易将其分开，达到扫描条件[2]。
湖北省科委课题(93192008)
李其兰，女，1952年生，副主任药师。
参考文献
[1] 苏健，王宝琴.复方栀子冲剂栀子甙薄层扫描测定.中成药，1993，15(1)：16
[2] 吉力，徐植灵.栀子果实挥发油的GC-Ms分析.中国药学杂志，1993，28(7)：398, 百拇医药
单位：李其兰(湖北中医学院附属医院中药研究室 430061)；卢喜珍(湖北中医学院中药系)
关键词：小儿退热贴；栀子甙；提取工艺；双波长薄层扫描法
湖北中医学院学报000127 摘 要：用双波长薄层扫描法对小儿退热贴中栀子甙进行含量测定。加样回收率为98.29%，r=0.9997，RSD=0.56%。本法可控制小儿退热贴质量。
中图分类号：R284.2 文献标识码：B 文章编号：1008-987X(2000)01-0048-02
Determination of Gardenoside Content in Xiaoer Tuire
Tie by Double-wavelength TLCS Method
, 百拇医药
Li Qilan
(The Lab of Chinese materia Medica of Affiliated Hospital of Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430061)
Lu Xizhen
(The Department of Chinese Materia Medica of Hubei College of Traditional Chinese Medicine)
Abstract：Using double-wavelength TLCS method to process content measurement of gardenoside in xiaoer tuire tie.The rate of adding sample recovery is 98.29%，r=0.9997，RSD=0.56%.This method can control the quality of xiaoer tuire tie.
, 百拇医药
Key words：Xiaoer tuire tie Gardenoside Extraction technology Double-wavelength TLCS method
小儿退热贴由栀子、柴胡等中药精制而成，经多年临床应用，疗效良好。栀子具有清热解毒等功效，而栀子甙是其主要有效成分。笔者用双波长薄层扫描法对小儿退热贴中栀子甙的含量进行了测定，作为控制其质量的方法，现报道如下。
1 仪器与试剂
1.1 仪器(1)CS-9000型薄层扫描仪(岛津，日本)；(2)365nm紫外分析仪(上海科艺光学仪器厂)；(3)LINOMARN自动点样器(CAMAG，瑞士)。
1.2 试剂 硅胶G(AR级，青岛海洋化工厂产)，其他试剂均为AR级，栀子甙(中国药品生物制品检定所提供)。
, 百拇医药
2 栀子甙的含量测定方法
采用双波长薄层扫描[1]。
2.1 层析条件 吸附剂为硅胶G(60型)，CMC-Na的浓度为0.5%，薄层板为20cm×20cm，厚为0.5mm，110°C活化0.5h。置干燥器中备用，展开剂为氯仿-甲醇-浓氨水(8∶2∶0.3)，展距约12cm，取出晾干，将全板浸入硫酸乙醇溶液中，迅速取出吹干，于110°C烘5分钟，显色，见一紫红色斑点，见图1。
图 1
2.2 扫描条件 双波长反射法锯齿扫描，背景校正：ON，Sx=3，λS=510nm，λR=600nm。
, 百拇医药 2.3 标准品的制备 精密称取栀子甙标准品，用甲醇定容，制定成1.05mg/ml溶液。
2.4 供试品溶液制备 精密吸取制备好的样品溶液1ml，再加甲醇定容到10ml，摇匀即为供试品溶液。
2.5 阴性对照液制备 制备同样品液，在提取过程中不加栀子，精密吸取已制备好的阴性液1ml，加5ml水，再加甲醇定容到10ml，摇匀即为阴性对照液。
2.6 标准曲线制备 分别吸取标准品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL点样，依上述层析条件展开，测定标准品量为横坐标，扫描积分值为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程Y=271.7595+2788.740X
Y=0.9997，栀子甙的量在1-5μL范围内含量与峰面积呈线性关系。(见图2)
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图 2
2.7 样品的含量测定 精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液2μl、5μl间隔点样于同一硅胶G薄层板上，按标准曲线项下操作，测其积分值，用外标两点法计算含量。测试结果如图3、图4。
图 3
图 4
2.8 精密度实验 同一斑点依法测定5次，平均值为X=5138.67，RSD=1.4%，表明仪器精密度良好。
2.9 扫描重现性实验 取栀子甙标准品，在同一板上点5个量相同的点，测定峰面积为5081.344，RSD%=2.1%，表明扫描重现性好。
, 百拇医药
2.10 稳定性实验 同一板上同一斑点，每小时测1次，4小时内峰面积稳定，24小时后测定，峰面积同样稳定。
2.11 加样回收率实验 分别精密量取已知栀子甙含量的样品5分，每份再精密加入标准品溶液1ml(C=1.05mg/ml)，定容到2ml，作为供试品溶液，点于同一薄层板上，展开，测定其积分值。用外标两点法计算栀子甙含量，按回收率计算方法计算。结果如下表：
表1 加样回收率测定
样品含量
测得量
(mg)
回收率
(n=3)
, 百拇医药
RSD(%)
1
0.4986
0.5088
102.04
98.286
2.56%
2
0.4753
0.4513
95.01
3
0.4781
, 百拇医药
0.4680
98.47
4
0.4855
0.4790
98.67
5
0.4753
0.4683
98.52
3 讨论
从以上实验看出，测得的回收率差异很小，说明此扫描法稳定、可靠。
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背景校正：除去背景干扰，在扫描过程中，发现栀子甙所在斑点位置后有一小斑，经扫描，在510nm到600nm之间无吸收，不会影响测定。
在选择展开剂展开时，发现阴性对照品在栀子甙所在斑点时，应位置前后各有一斑点，经多次筛选展开剂，认为碱性展开系统较其它展开系统更易将其分开，达到扫描条件[2]。
湖北省科委课题(93192008)
李其兰，女，1952年生，副主任药师。
参考文献
[1] 苏健，王宝琴.复方栀子冲剂栀子甙薄层扫描测定.中成药，1993，15(1)：16
[2] 吉力，徐植灵.栀子果实挥发油的GC-Ms分析.中国药学杂志，1993，28(7)：398, 百拇医药