环介导等温扩增法在登革病毒临床检测中的运用(2)
二、标准登革病毒株制备与核酸提取本研究采用的病毒株由南方医科大学病原生物学系P3实验室赵卫教授馈赠,病毒株的型别分别为:1型夏威夷株,2型新几内亚株,3型H87株,4型 H241株。采用QIAGEN病毒RNA提取试剂盒提取RNA,并采用实验室已存的标准质粒和探针对提取的RNA进行绝对定量,以标准株为阳性对照。
三、登革病毒的血清特异性抗体检测
采用胶体金快速免疫层析法(试剂盒由广州万孚生物技术有限公司提供)对登革病毒非结构蛋白1(NS1)IgG/IgM抗体进行定性检测,当样品中含有登革病毒IgG/IgM抗体,且浓度高于最低检出限时,将在检测区T1或T2形成肉眼可见的红色反应线,此时结果为登革病毒IgG或登革病毒IgM抗体阳性,相反,当样品中不含有登革病毒IgG/IgM抗体或浓度低于最低检出限时,则检测区(T1、T2)无红色反应线出现,此时结果为登革病毒IgG/IgM抗体阴性。无论样本中是否含有登革病毒IgG/IgM抗体,在质控区(C)都会形成一条红色的反应线。
四、登革病毒RNA的PCR定量检测
使用Taqman探针法,采用OMIGA病毒RNA提取试剂盒提取病毒RNA ......
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