4.实时荧光定量PCR

    处死大鼠后打开腹腔，取前列腺腹侧叶和一部分膀胱黏膜组织至新的1.5 ml EP管中，用玻璃棒研磨，加入Trizol l ml充分振荡混匀，加入氯仿0.2 ml，盖紧后用力摇15 s，15 - 30℃孵育2 -3 min，4℃12 000×g离心15 min，取上清液，根据说明书使用Trizol试剂提取总RNA;使用ThermoScript RT-PCR系统将总RNA(l mg)合成为模板DNA。引物分别为ERβ(NM_012754)、ERa(NM_012689)、TNF-α(NM_012675)、 诱导型一氧化氮合酶(iNOS，XM_003750865)、环氧酶2(COX2，NM_017008)、三磷酸腺苷受体(P2X2，NM_207608)、瞬时受体电位通道A1(TRPAI，XM_008769306)、神经生长因子(NGF，NM_001277055)和内参基因GAPDH( NM_017008)。其中引物ERB、ERα、TNF-α、COX2、NGF和GAPDH由QIAGEN( QuantiTect Primers)预先设计和验证 ......