ＨＡ20—ｌｙｓｌ0在大肠埃希菌中的融合表达纯化和凝胶阻滞试验
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[摘要] 目的 表达和纯化流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合蛋白HA20—lys10，并观察其与质粒结合的能力。方法 用PCR方法构建流感病毒血凝素HA2氨基末端20个氨基酸与10个赖氨酸的融合基因HA20—lysl0，并克隆于pET22a(+)原核表达载体。将重组表达质粒pET—HA—K转化大肠埃希菌BL21(DE3)，当A(Abs)600nm，达到0.6时，加入终浓度为1mmol/L IPTG诱导目的蛋白的表达。表达产物用亲和层析一步法进行纯化，然后用凝胶阻滞试验观察重组蛋白结合质粒的能力。结果 InG诱导后可获得相对分子质量约为27 000的目的蛋白，表达蛋白以可溶形式存在，占菌体蛋白20%以上。表达菌超声后，表达产物经亲和层析一步纯化后可获得纯度达85%以上目的蛋白。凝胶阻滞试验发现，纯化的重组蛋白在一定条件下可以与质粒结合，使质粒的迁移率明显改变。结论 融合蛋白HA20—lys10有望用于受体介导基因转移，以提高基因转移的效率。[关键词] 流感病毒血凝素； 凝胶阻滞试验； 融合基因； 表达与纯化[中国图书馆分类法分类号] Q789
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