四逆散对抑郁模型大鼠血浆NPY\SP\SS含量的影响
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摘要 目的：探讨四逆散对抑郁症大鼠血浆中神经肽Y(NPY)、P物质(SP)和生长抑素(SS)含量的影响。方法：将90只大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组、四逆散低、中、高荆量组。除正常组外，其它大鼠以慢性轻度不可预见性应激结合孤养造模，观察四逆散对抑郁大鼠在旷场中水平活动和垂直活动的影响，记录各组大鼠体重以及糖水摄入等指标变化以及四逆散对抑郁大鼠血清中NPY、SP及SS含量的影响。结果：四逆散能缓解慢性应激引起的大鼠体重增加缓慢，敞箱实验的水平运动、垂直运动得分、糖水消耗明显下降等指标。同时能降低抑郁症大鼠血清中的NPY、SS和SP水平。结论：四逆散对抑郁大鼠具有一定疗效，其抗抑郁机制可能与调节血浆中NPY、SS、SP水平有关。
关键词 四逆散 抑郁症 神经肽 YP物质 生长抑素
抑郁症的发病机制至今仍未完全阐明，目前公认神经肽与其密切相关，且一些抗抑郁药物的作用机制与神经肽有关，神经肽类物质SS、SP和NPY在中枢神经系统中的含量平衡对抑郁症的生理机制起着重要的作用。四逆散为张仲景《伤寒论》方，具有疏肝解郁、调和肝脾的功效，是治疗肝气郁结型抑郁症的祖方。在前期的实验研究中发现，四逆散能上调抑郁动物模型脑组织皮质、海马区去甲。肾上腺素、5-羟色胺含量；同时还能降低抑郁动物模型血清皮质酮、CRF水平、缓解HPA功能亢进状态，但四逆散的抗抑郁作用是否与血浆中神经肽类物质相关，尚不明确。本实验旨在通过检测抑郁大鼠血浆NPY、SP、SS含量变化，以探讨四逆散的抗抑郁作用机制。
1 材料
1.1实验动物：清洁级SD雄性大鼠90只，体重180～200g，由军事医学科学院实验动物中心提供，动物许可证号：SCXG(军)20060001。自由饮食，室温(20±3)℃，明暗周期为12h/12h。
1.2药物与试剂：四逆散由柴胡、白芍、枳实、炙甘草组成，购于广安门医院。上药制成粗粉，置8倍温水中浸泡0.5h，沸后文火煎4h，取汁经3层纱布过滤；第2次和第3次均以6倍水文火煎2h取汁，合并3次药液，置水浴箱内浓缩至含生药1.5g/ml。常温冷却后，置4℃冰箱内保存备用。氟西汀(规格：1g/瓶，纯度：99.89%，Sigma公司)；NPY、SP、SS放免试剂盒由北京华英生物技术公司提供。
2 实验方法
2.1动物分组及给药：动物适应性喂养1周后，随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组、四逆散低、中、高剂量组共6组，每组15只，正常组5只/笼群养，其余各组1只/笼饲养。各组在造模同时即开始给药，氟西汀组胃饲氟西汀20mg/kg，四逆散组根据临床等效剂量进行换算，以中剂量组相当于临床用药量，低、中、高剂量组分别胃饲四逆散提取液2.5、5和10g/kg，模型组、正常组胃饲生理盐水。
2.2慢性温和应激抑郁模型的建立：为了避免动物对单一的应激产生耐受，本实验采用慢性不可预见的温和刺激来建立抑郁模型。潮湿垫料、24小时禁水、禁食24小时等9种应激因子按随机方法在21天内给予。每日给予1种刺激，累计3～4次。
2.3糖水偏好测试：糖水偏好指数降低是评价抑郁情绪的有效指标。在慢性应激的前1天及后第21天。经23小时隔夜饮水剥夺后，进行1h双瓶测定(1瓶饮用水，1瓶1%蔗糖溶液)，记录其摄入量。糖水偏好指数为糖水摄入量与总的液体摄入量之比。
2.4大鼠体重变化：记录各组大鼠在实验的第1、7、14、21天的体重。
2.5旷场实验：在首次应激前和末次应激结束后，将大鼠置于50cm、直径180cm的圆形旷场中，记录大鼠在旷场内5min的活动，包括水平活动距离和直立次数。直立次数直接观察记录并通过录像校正。
2.6血浆NPY、SP、SS含量检测：取大鼠尾静脉血5ml注入加抑肽酶抗凝剂的试管中混匀，4℃，3000r/min.离心15min。取上清液2ml，置于-20℃条件下待测。用放免法测其含量。
2.7统计处理：采用SPSS11.5统计软件进行统计学单向方差分析，P%0.05为有明显统计学差异。
3 结果
3.1对体重的影响：慢性应激可使大鼠体重增加显著减慢。与正常组相比，模型组的体重在第7天增加就已下降，有显著性差异(P<0.05)。四逆散干预后能缓解应激大鼠的体重减轻，高剂量组、氟西汀组与模型组比较均有显著性差异(均P<0.01)。
3.2对糖水偏好的影响：应激前各组大鼠糖水偏好无统计学差异。应急后第21天，与正常组相比，模型组大鼠糖水偏好显著下降(P<0.01)。与模型组相比，低、中、高剂量四逆散都可使抑郁大鼠的糖水偏好显著增加，并呈现明显的量效关系。高剂量组、氟西汀组与模型组比较均有显著性差异(均P<0.05)。
3.3旷场测试：造模前各组大鼠旷场实验中的水平运动距离、垂直运动次数无统计学差异。应激后第21天，抑郁大鼠水平运动距离、垂直运动次数均明显下降，与正常组相比，具有显著性差异(P<0.01)。四逆散干预能提高应激大鼠水平运动距离、垂直运动次数，有明显的量效递增关系。其高剂量组已接近正常值，与模型组比较，垂直运动次数和水平运动距离均有显著性差异(P<0.05和P<0.01)，氟西汀组与模型组比较也有显著性差异(P<0.01)。见表1。
3.4血浆NPY、SP、SS检测结果：见表2。与正常组比较，模型组NPY、SS水平显著下降(P<0.01)，SP水平显著升高(P<0.01)；四逆散能提高应激大鼠血浆的NPY、SS水平，降低SP水平，并呈现明显的剂量依赖关系。高剂量组和氟西汀组与模型组比较，NPY、SS和SP水平均有显著性差异(均P<0.01)。
4 讨论
NPY是脑内广泛分布的一种神经多肽，在情感及行为应激反应的共同核心机制中发挥重要功能。海马内NPY的表达可以“缓冲”促肾上腺皮质激素释放因子等应激促进信号的行为学效应，减轻机体对应激刺激过度应答造成的损害。陈松芳等研究抑郁症病例血浆中NPY含量发现，抑郁症病人血浆中NPY含量明显低于正常人，服用氟西汀能升高病人血浆中NPY含量。SS是神经系统内广泛存在的神经递质，它能增加胺能和胆碱能神经递质的更新率，刺激DA和5-HT释放，并具有活化海马部位的突触功能，影响人体记忆。Rubinow等的研究发现，抑郁症患者脑脊液中SS浓度显著低于正常组。SP是第一个被发现的多肽，SP与情绪有关的神经递质通路(如5-TH和NE)发生交叉反应，调节人体的情感、认知。杨斌研究发现，抑郁症组患者治疗前血浆P物质水平明显高于对照组，治疗后血浆P物质水平较治疗前明显下降。本研究结果显示与正常组比较，模型组大鼠血浆NPY、SS含量降低，SP含量升高；四逆散进行抑郁治疗后，血浆NPY、SS含量显著上升，SP含量显著下降。综合上述研究基础及本次结果可见，血浆NPY、SS水平降低、SP水平升高与抑郁发病密切相关，四逆散的抗抑郁功效与降低血浆中NPY、SS水平，升高SP水平有关。四逆散是治疗抑郁症疗效好且副作用少的药物，与抗抑郁西药相比，四逆散能显著改善患者症状、维持药物作用时间、长期使用不易产生耐药性和严重毒副作用。, http://www.100md.com(冯劫)