万 苗 欧阳钦 吴春明 刘三海 赵安静

    浙江中医药大学附属温州中医院 浙江 温州 325000

    已故浙南地区名老中医任侠民先生以温州地道药材——鸡骨柴和平地木，创立“鸡平合剂”[1]，临床证实对急性肝衰竭(ALF)有一定的疗效；结合《内经》《伤寒论》有关“黄疸”论述，以“湿蕴热郁、不得越发”为病机，创制二草清肝和剂(ercao qinggan decoction，EQD)，临床研究证实EQD能降低免疫性肝损害大鼠的肝损伤，其机制与肝细胞内的Toll样受体4(TLR4)及其下游信号分子受抑制不无关系[2，3]。本研究旨在通过构建ALF模型，从分子和细胞水平研究TLR4通路中相关信号分子在肝损伤及肝损伤修复过程中的表达水平，探讨EQD对该通路的影响机制。

    1 材料与方法

    1.1 动物：雌性小鼠21只，BALB/C型，SPF级，体重18～20g，购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK(湘)2019-0004，遵伦理要求进行动物实验。

    1.2 药物：鸡骨草、垂盆草、茵陈各15g，制大黄3g，茯苓、泽泻、苍术各10g，陈皮、甘草各6g，以上中药均来自温州永安堂中药饮片公司，按常规剂量使用，水煎2次后药液合并、过滤并浓缩，两种浓度生药含量分别为3.3g/ml、6.6g/ml。

    1.3 实验分组：随机分4组：EQD小剂量组(n=6)，EQD大剂量组(n=5)，空白对照组(n=3)，内毒素模型组(n=7)，适应性饲养7天。

    1.4 模型验证：取6只正常BALB/C小鼠随机分成内毒素脂多糖(LPS)高(15mg/kg)、中(10mg/kg)、低(5mg/kg)剂量组，每组2只，另外取1只作为空白对照组。高中低剂量组依次按1.5mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml剂量的LPS联合80mg/ml D-氨基半乳糖(D-GalN)的混合药液(1ml/100g)进行腹腔注射，观察24h。结果，高剂量组小鼠全部死亡，中剂量组小鼠死亡1只，中剂量组存活1只和低剂量组的2只均状态不佳。存活小鼠处死后取出肝脏称重，HE染色观察病理改变。HE结果显示LPS中剂量组模型成功，LPS低剂量组1只成模1只未成模。根据模型验证的结果选用LPS10mg/kg和7.5mg/kg两个剂量做毒性实验 ......