李超 石芳琼 杨丹 王洁 翦新春 蒋灿华

    (1.中南大学湘雅医院 口腔颌面外科；2.中南大学湘雅医学院 免疫学系，长沙 410078)

    口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A对自然杀伤细胞与细胞毒性T淋巴细胞杀伤活性影响的实验研究

    李超1石芳琼1杨丹1王洁2翦新春1蒋灿华1

    (1.中南大学湘雅医院 口腔颌面外科；2.中南大学湘雅医学院 免疫学系，长沙 410078)

    目的 探讨口腔鳞癌细胞过表达MHC-Ⅰ类链相关蛋白A(MICA)对自然杀伤细胞(NK)与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响。方法 通过绘制细胞生长曲线、检测细胞周期、进行平板集落形成率及裸鼠皮下成瘤等方法对稳定转染并过表达MICA的口腔鳞癌细胞株进行生物学特性鉴定。采用乳酸脱氢酶释放法及流式细胞术分析口腔鳞癌细胞过表达MICA对NK与CTL细胞杀伤活性及自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)受体表达的影响。结果 口腔鳞癌细胞转染MICA基因后主要生物学特性未发生改变，但能显著增强NK与CTL细胞杀伤活性并上调其表面NKG2D的表达，与未转染及转染空白载体的细胞比较，差异有统计学意义(P1 材料和方法

    1.1 主要试剂和仪器

    胎牛血清、马血清、RPMI1640及α-MEM培养液(GIBCO公司，美国)，人重组白细胞介素-2(recombine human interleukin-2，rhIL-2)(长春生物制品研究所)，甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)、淋巴细胞分离液(Sigma公司，美国)，异藻蓝蛋白(allophycocyanin，APC)标记的鼠抗人NKG2D/ CD314单克隆抗体(eBioscience公司，美国)，乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。

    1.2 实验动物和细胞系

    选取BALB/C-nu/nu裸小鼠18只(购自上海斯莱克实验动物有限公司)，4～6周龄，雄性，饲养于中南大学实验动物中心无特定病原体(special pathogen free，SPF)级动物房。人舌鳞癌脑高转移Tb细胞系由上海交通大学口腔医学院肿瘤生物实验室馈赠。人NK细胞系NK92由华中科技大学同济医学院医学免疫学系馈赠，培养于含12.5%胎牛血清、12.5%马血清和rhIL-2(100U·mL-1)的α-MEM培养液中。转染MICA基因重组质粒pEGFP-N1-MICA或空白质粒pEGFPN1的细胞株Tb-pEGFP-N1-MICA及Tb-pEGFP-N1由本课题组建立 ......